S1PR1激动剂FTY720在促进裂孔隔膜蛋白表达和修复足细胞损伤中的用途

s1pr1激动剂fty720在促进裂孔隔膜蛋白表达和修复足细胞损伤中的用途
技术领域
1.本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种s1pr1激动剂fty720在促进裂孔隔膜蛋白表达和修复足细胞损伤中的用途。


背景技术：

2.fsgs是一种主要针对足细胞损伤的进展性疾病，由各种因素导致的足细胞损伤与丢失都会导致fsgs的启动与发展。足细胞是高度分化的终末细胞，包括胞体、足突。足突之间由多个足细胞相关蛋白分子有规律地交错形成裂孔隔膜，维持足细胞的基本形态，参与肾小球滤过屏障的形成。若构成裂孔隔膜的相关蛋白表达缺失或分布异常，可引起足突正常结构发生改变；进而使足细胞与基底膜粘附连接减弱，足细胞从基底膜剥离、脱落，导致srns的发生。尽管迄今为止对fsgs足细胞裂孔隔膜蛋白(nephrin、zo-1)的损伤机制有一定的研究，但临床上仍然缺乏特异性的治疗策略。因此，对足细胞裂孔隔膜损伤及调节机制的深入研究，可为临床提供新的治疗靶点。
3.s1prs是磷酸鞘氨醇(s1p)的g蛋白偶联受体，介导细胞各种生理反应并调节细胞信号通路。s1pr1基因位于染色体1p21.2，编码的s1pr1蛋白由7个疏水的跨膜α螺旋组成，包括n端和三个胞外环(ecl1-ecl3)，c端和三个细胞内环(icl1-icl3)，高表达于淋巴细胞、星形胶质细胞、脉管系统及肾脏组织，可通过激活pi3k/akt抑制细胞凋亡，并激活rac促进细胞骨架重排和细胞迁移，在维持正常血脑屏障和紧密连接蛋白的正常定位中起重要作用。
4.现有的临床及基础研究显示，s1pr1主要通过免疫机制，参与aav相关性肾炎、狼疮肾炎等肾损伤的发病。此外，也有研究表明s1pr1激动剂在屏障功能受损中起保护作用。s1pr1的选择性激动剂sew2871可通过ampk信号通路改善肝屏障功能和肝细胞紧密连接，从而缓解α-萘基异硫氰酸盐诱导的胆汁淤积性肝损伤。sew2871还可以通过增加紧密连接(occludin和zo-1)表达和改善屏障功能障碍来预防il-10-/-小鼠的结肠炎。然而，s1pr1激动剂在肾脏中的作用及对裂孔隔膜蛋白的作用尚不清楚。


技术实现要素：

5.针对现有技术中的上述不足，本发明提供一种s1pr1激动剂fty720在促进裂孔隔膜蛋白表达和修复足细胞损伤中的用途，可有效的提升足细胞裂孔隔膜蛋白的表达，并修复受损的足细胞。
6.为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
7.s1pr1激动剂fty720在促进裂孔隔膜蛋白表达中的用途。
8.进一步地，裂孔隔膜蛋白为足细胞裂孔隔膜蛋白。
9.进一步地，裂孔隔膜蛋白为nephrin和zo-1。
10.上述s1pr1激动剂fty720在制备足细胞损伤修复制剂中的用途。
11.上述s1pr1激动剂fty720在制备治疗足细胞损伤所致疾病的制剂中的用途。
12.进一步地，病症为局灶节段性肾小球硬化。
13.本发明的有益效果：
14.本发明发现在足细胞损伤模型中s1pr1显著表达下降，而在施加s1pr1激动剂fty720后，足细胞损伤模型中裂孔隔膜蛋白(nephrin、zo-1)表达被拯救，并能修复足细胞损伤。可为相关治疗药物的研发提供新的理论依据，具有重大的科学意义和临床转化价值。
附图说明
15.图1为特发性fsgs患者肾组织中s1pr1的表达情况；
16.图2为足细胞损伤模型中s1pr1及p-s1pr1的表达情况；
17.图3为adr小鼠肾小球pas染色图；
18.图4为adr小鼠肾小球电镜图；
19.图5为adr诱导小鼠fsgs模型中s1pr1及p-s1pr1的表达情况；
20.图6为fty720对人足细胞损伤模型的保护作用。
具体实施方式
21.下面对本发明的具体实施方式进行描述，以便于本技术领域的技术人员理解本发明，但应该清楚，本发明不限于具体实施方式的范围，对本技术领域的普通技术人员来讲，只要各种变化在所附的权利要求限定和确定的本发明的精神和范围内，这些变化是显而易见的，一切利用本发明构思的发明创造均在保护之列。
22.实施例1
23.1、本发明实施例中筛选3例临床表现为特发性fsgs患者，通过免疫荧光验证患者肾组织中s1pr1的表达。免疫荧光显示，与健康对照相比，特发性fsgs患者中s1pr1表达下降，见图1。
24.2、构建足细胞损伤模型
25.33℃培养人足细胞，传2-3代使细胞数量足够，铺至6孔板中在37℃培养14天，将细胞分为以下三组：
①
对照组；
②
0.5μl/ml adr刺激24h；
③
0.5μl/ml adr刺激48h；将细胞用空白培养基培养6-8h，于不同时间段加入adr刺激，冰pbs清洗细胞提取蛋白质，通过western blot检测synpo、s1pr1及p-s1pr1水平。
26.结果显示，synpo在0.50μg/ml adr刺激48h的足细胞损伤模型中表达下降，证明足细胞损伤模型构建成功；且s1pr1及p-s1pr1在adr诱导的足细胞损伤模型中下降(图2)。根据以上结果，证明s1pr1及p-s1pr1在adr诱导足细胞损伤模型中表达下降，可能参与fsgs疾病的发生。
27.3、adr诱导小鼠fsgs模型
28.选用8-10周龄balb/c雄性小鼠，随机分为野生型小鼠(wt)组、阿霉素诱导组小鼠(adr)组，adr组尾静脉注射adr，剂量为11mg/kg，wt组予以同等剂量生理盐水；6周后吸入异氟烷进行麻醉处死小鼠，收集肾脏组织，进行pas染色、电镜及western blot检测s1pr1及p-s1pr1水平。
29.结果显示，pas染色可见到肾小球出现节段性硬化及球囊粘连(图3)；电镜下可见足细胞的足突弥漫性融合(图4)，证明adr诱导小鼠fsgs模型构建成功。与对照组相比，
s1pr1及p-s1pr1在adr诱导的小鼠fsgs模型中表达下降(图5)。根据上述结果，证明s1pr1及p-s1pr1在小鼠fsgs模型中表达下降，可能参与fsgs疾病的发生。
30.实施例2s1pr1激动剂fty720对足细胞损伤模型的修复
31.在0.5μl/ml adr刺激48h的人足细胞损伤模型中，施加5μms1pr1激动剂fty720刺激24小时后，进行western blot，检测s1pr1的活性形式p-s1pr1、裂孔隔膜蛋白nephrin和紧密连接蛋白zo-1的表达。结果显示足细胞损伤组中p-s1pr1、nephrin、zo-1表达显著下降，在加入fty720后，p-s1pr1、nephrin、zo-1表达增加(图6)。由此可见，s1pr1激动剂fty720能够提升足细胞损伤模型中裂孔隔膜蛋白nephrin和zo-1的表达。
32.综上所述，这些所有结果表明，在fsgs患者中s1pr1表达下降，且s1pr1激动剂可以拯救足细胞损伤模型中裂孔隔膜蛋白(nephrin、zo-1)的表达，修复足细胞损伤，可能是fsgs的潜在治疗靶点。
33.最后应说明的是，以上具体实施方式仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照实例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

技术特征：
1.s1pr1激动剂fty720在促进裂孔隔膜蛋白表达中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述裂孔隔膜蛋白为足细胞裂孔隔膜蛋白。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述裂孔隔膜蛋白包括nephrin和zo-1。4.权利要求1中所述的s1pr1激动剂fty720在制备足细胞损伤修复制剂中的用途。5.权利要求1中所述的s1pr1激动剂fty720在在制备治疗足细胞损伤所致疾病的制剂中的用途。6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述病症为局灶节段性肾小球硬化。

技术总结
本发明公开了S1PR1激动剂FTY720在促进裂孔隔膜蛋白表达和修复足细胞损伤中的用途，属于生物医药技术领域。具体而言：S1PR1激动剂FTY720可提升Nephrin、ZO-1蛋白的表达。本发明发现在足细胞损伤模型中S1PR1显著表达下降，而在施加S1PR1激动剂FTY720后，足细胞损伤模型中裂孔隔膜蛋白(Nephrin、ZO-1)表达被拯救，并能修复足细胞损伤。可为相关治疗药物的研发提供新的理论依据，具有重大的科学意义和临床转化价值。转化价值。转化价值。


技术研发人员：王墨 宋小媚 杨晴 蔡鑫 刘子琳
受保护的技术使用者：重庆医科大学附属儿童医院
技术研发日：2023.06.21
技术公布日：2023/8/5