降尿酸的发酵物及其制备方法和用途与流程

1.本发明属于中药发酵技术领域，具体涉及降尿酸的发酵物及其制备方法和用途。


背景技术：

2.高尿酸血症(hyperuricemia,hua)是一种与嘌呤代谢异常有关的以血清尿酸水平升高为特征的疾病，其诊断标准是：在正常嘌呤饮食状态下，非同日两次空腹血尿酸水平男性高于420μmol/l，女性高于360μmol/l。近年来，高尿酸血症的流行率和患病率正在迅速上升。
3.高尿酸血症是导致痛风的主要危险因素。尿酸是机体黄嘌呤氧化酶(xanthineoxidase，xod)氧化黄嘌呤和次黄嘌呤的代谢产物，当血清尿酸浓度超过其饱和度时，就会以尿酸单钠晶体(monosodiumuratecrystals，msu)的形式析出，并沉积在关节处，诱发组织局部炎症反应，从而导致痛风的形成。除此之外，高尿酸血症还会累及肾脏、肝脏、关节等器官，而血尿酸长期、持续性增高可导致痛风性关节炎、痛风石、痛风性肾脏病变等各种损害。
4.目前高尿酸血症的治疗主要包括药物治疗和非药物干预。药物治疗主要以抗炎治疗和降尿酸治疗两方面为主，抗炎治疗是使用阿司匹林、秋水仙碱等常规抗炎药物进行治疗，这些药物虽然消炎止痛作用快，但仅为对症治疗，无法降低尿酸水平，大多数毒副作用明显。降尿酸治疗主要是使用别嘌呤醇等黄嘌呤氧化酶抑制剂减少尿酸生成，这些药物虽然能有效地降低血清尿酸水平，但需长期服用，且不具有解热镇痛抗炎药效，对急性发作的关节炎疗效甚微，甚至加重其症状或延长病程。此外，单独使用降尿酸药物治疗早期还可能诱发痛风的急性发作，长期使用则会产生胃肠道刺激、骨髓抑制和肾毒性等副作用，增加了预后不良甚至致命的风险，反而限制了它们的临床应用。
5.现有技术中已经公开了通过发酵制备的降尿酸的产品。
6.如中国专利申请202111076145.6中公开了：一种适用于高尿酸及痛风人群的药食同源酵素及其制备方法，包括以下组分：em菌、乳酸菌、酵母菌、植物乳杆菌、嗜热链球菌、双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、凝结芽孢杆菌、罗伊氏乳杆菌、蜂蜜、珊瑚钙、饮用水。所述药食同源中药材原料，包括以下组分：葵花盘、玉米须、鱼腥草、薏苡仁、葛根、蒲公英、栀子、菊苣、杜仲、芡实、肉桂、淡竹叶、茯苓、马齿苋、百合。该发明利用有益微生物菌群，结合药食同源中药材原料进行发酵，其制取物能够有效降低痛风人群血尿酸含量，缓解疼痛，提高免疫系统，恢复和改善代谢功能，适用性广，无毒无副作用，可日常食用。但其所涉及的原料过多，且降尿酸效果并不明确。
7.如中国专利202110786163.7中公开了：一种治疗痛风的中药发酵制剂及其制备方法，采用赤苍藤、姜黄、甘草与薏仁4味中药以及葡萄糖、牛肉膏，中药药材经过超微粉碎，细胞破壁后进行益生菌液体发酵，所获得的中药发酵液经过喷雾干燥，收集得到的干粉粉末直接做成粉末包装或制成胶囊、片剂、颗粒其中任一种。该发明的制备方法操作简单，能充分利用中药药材及其有效成分，通过中药及益生菌的协同作用，能有效降低血尿酸，从而达
到预防或治疗痛风效果。但其实际对血尿酸的降低效果有进一步提升的空间。


技术实现要素：

8.为了解决上述问题，本发明提供了一种降尿酸的发酵物，不仅能够显著降尿酸，还对长期高尿酸血症引起的肾脏病变以及肝损伤有一定的修复作用。
9.本发明中，“菌活”、“菌活力”、“活菌数”、“活菌含量”、“活菌量”在一些条件下具有相同的含义。
10.本发明中，“酶活”“酶活力”“酶的活力”“酶的比活”在一些条件下具有相同的含义。
11.一方面，本发明提供了一种降尿酸的发酵物。
12.所述的发酵物的发酵原料中以重量份计包括：黑果枸杞100-180份，杜仲雄花120-200份，丹凤牡丹花80-160份，耳叶牛皮消60-140份，短梗五加140-220份，显脉旋覆花60-140份，发酵菌粉1.2-12份和酶制剂14-120份；
13.所述的酶制剂中包括纤维素酶、果胶酶、酸性蛋白酶和中温α-淀粉酶，各酶酶活比为18-27：32-40：50-60：40-60。
14.具体地，各酶质量比为6-9：8-10：5-6：8-12，单位酶活比为30-40：40-50：90-100：5-6。
15.优选地，各酶质量比为6：8：6：12或9：10：5：8或6：8：6：12；各酶单位酶活比为：30：40：100：5；所述的纤维素酶单位酶活为30000u/g。
16.所述的酶制剂用于底物酶解得到酶解液；
17.所述的发酵菌粉中包括植物乳植杆菌、发酵粘液乳杆菌、罗伊氏粘液乳杆菌嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳酪杆菌和青春双歧杆菌，各菌的菌活力比为120-150：55-70：48-64：36-48：78-104：12-20，总菌活为8000-8100亿cfu/g；
18.具体地，各菌的质量比为12-15：11-14：6-8：6-8：6-8：3-5；各菌单位活力比为18-20：8-10：14-16：10-12：23-26：6-8。
19.优选地，各菌的质量比为12：14：6：8：8：3或15：11：8：6：6：5；各菌单位活力比为20：10：16：12：26：8；所述的植物乳植杆菌的单位活力为2000亿cfu/g。
20.所述的发酵菌粉用于酶解后发酵。
21.进一步优选地，所述的酶制剂中，纤维素酶、果胶酶、酸性蛋白酶和中温α-淀粉酶，各酶酶活比为18：32：60：60。
22.进一步优选地，所述的发酵菌粉中，各菌的菌活力比为120：70：48：48：104：12。
23.进一步优选地，所述的发酵菌粉中，总菌活为8040-8060亿cfu/g，更进一步为8040亿cfu/g。
24.进一步优选地，所述的酶制剂包括纤维素酶6-9重量份，果胶酶8-10重量份，酸性蛋白酶5-6重量份和中温α-淀粉酶8-12重量份；所述纤维素酶的活力为30000u/g，所述果胶酶活力为40000u/g，所述酸性蛋白酶活力为100000u/g，所述中温α-淀粉酶活力为5000u/g。
25.进一步优选地，所述的发酵菌粉由植物乳植杆菌1.2-1.5重量份、发酵粘液乳杆菌1.1-1.4重量份、罗伊氏粘液乳杆菌0.6-0.8重量份、嗜酸乳杆菌0.6-0.8重量份、鼠李糖乳酪杆菌0.6-0.8重量份、青春双歧杆菌0.3-0.5重量份组成；所述植物乳植杆菌活力为2000
亿cfu/g、所述发酵粘液乳杆菌活力为1000亿cfu/g、所述罗伊氏粘液乳杆菌活力为1600亿cfu/g、所述嗜酸乳杆菌活力为1200亿cfu/g、所述鼠李糖乳酪杆菌活力为2600亿cfu/g、所述青春双歧杆菌活力为800亿cfu/g。
26.所述的发酵物的发酵原料中还包括酸碱调节剂，所述的酸碱调节剂用于调节反应液的ph。
27.优选地，所述的酸碱调节剂中包括：乙酸、碳酸氢钠、柠檬酸和氢氧化钠。
28.优选地，所述的发酵物还包括酸碱调节剂；所述的酸碱调节剂包括2-6重量份乙酸和2-8重量份碳酸氢钠组成或由1-4重量份柠檬酸和2-6重量份氢氧化钠。
29.另一方面，本发明提供了前述的发酵物的制备方法。
30.所述的制备方法中包括：
31.(1)酶解：将粉碎并称量的黑果枸杞、杜仲雄花、耳叶牛皮消、短梗五加、显脉旋覆花、丹凤牡丹花，与水混合形成混合物，调节ph至4.5-5.5后加入酶制剂进行酶解，酶解结束后调ph至5.0-6.8，得到酶解液；
32.(2)将所述酶解液进行提取处理，得到提取液；
33.(3)向所述提取液中加入发酵菌粉进行发酵，固液分离得到上清即为发酵物。
34.优选地，所述的步骤(1)中的ph通过前述的酸碱调节剂进行调节。
35.所述步骤(1)中酶解的温度为45℃-65℃，酶解时间为30-180min。
36.所述的步骤(2)提取为升温提取。优选的温度为80-108℃，提取时间为10-90min。
37.所述步骤(3)中发酵温度为25-45℃，发酵时间为24-240h，搅拌转速为100-1000rpm，通风量为1-10vvn。
38.再一方面，本发明提供了前述的发酵物在制备预防或治疗高尿酸血症、痛风或尿酸引起的肾脏病变症药物中的用途。
39.所述的发酵物通过降尿酸的作用体现预防或治疗作用。
40.所述的高尿酸血症可以是原发性也可以是继发性。
41.又一方面，本发明还提供了包含前述的发酵物的药物制剂。
42.所述的药物制剂中还包括其他药学上可接受的载体或赋形剂。
43.所述的药学上可接受的载体或赋形剂包括但不限于：缓冲液、赋形剂、稳定剂、防腐剂、调香剂、调味剂。
44.所述的药物制剂可以是固体制剂，也可以是液体制剂。
45.所述的药物制剂的剂型包括但不限于：片剂、颗粒剂、糖浆剂、口服液、胶囊剂。
46.所述的片剂包括但不限于：分散片、缓释片、控释片、泡腾片及肠溶片。
47.本发明的有益效果：
48.1.本发明提供的降尿酸的发酵物原料中：
49.黑果枸杞：补肾益精，养肝明目，补血安神，生津止渴，润肺止咳；可用于虚劳精亏、腰膝酸软、头晕耳鸣、内热消渴、血虚萎黄、目昏不明。
50.杜仲雄花：温阳通络、强筋健骨、滋补肝肾、润肠通便、保肝护肝；具有安神、降血糖、润肠通便、抗疲劳、降血压、抗衰老、降血脂、增强免疫力等作用。
51.短梗五加：补肾强腰、益气安神、活血通络，可提高人体免疫力，富含强心苷，具有祛风化湿、活血化瘀、健胃利尿等多重功效。
52.显脉旋覆花：清热解毒，利尿消肿，祛风除湿，通络止痛，降气化痰，降逆止呕，促进胃肠蠕动、防治便秘、降血脂，还具有抗炎抑菌、抗氧化的功效。
53.丹凤牡丹花：调经活血、养血和肝、散郁祛瘀，通经活络，美容养颜。
54.耳叶牛皮消：消食健胃，理气止痛，祛风利水，还具有补肾益肝、乌发生发、养血益精、抗衰老。
55.上述六种中药组分协同配合在酶解发酵的作用下具有很好的降尿酸的效果，还能对肾脏损伤，肝脏损伤有显著的保护作用，降低血清肌酐，尿白蛋白排泄率，改善肾小球过滤功能；且可改善炎症因子水平。
56.2.本发明提供的发酵物，酸碱调节剂用于在酶解，发酵之前进行酸碱度的调节，利于有效成分的分解及析出，且当选用乙酸和碳酸氢钠为酸碱调节剂或柠檬酸和氢氧化钠为酸碱调节剂时，更有利于有效成分的分解及析出。
57.3.本发明提供的发酵物，植物乳植杆菌、发酵粘液乳杆菌、罗伊氏粘液乳杆菌、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳酪杆菌和青春双歧杆菌的协同配合能显著提高各原料的有效成分含量。
附图说明
58.图1为高尿酸血症小鼠肾脏的病理变化结果图。
59.图2为小鼠的p38mapk、nf-κb和nlrp3蛋白水平测定结果图。
具体实施方式
60.下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本发明，仅用于说明本发明。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。基于本发明公开中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本公开保护的范围。
61.实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内文献所描述的常规步骤的操作或条件即可进行。所有试剂未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
62.以下实施例中，部分产品的来源信息如下：
63.植物乳植杆菌：选用江苏新申奥生物科技有限公司的植物乳杆菌lp3a；
64.发酵粘液乳杆菌：选用四川高福记生物科技有限公司的发酵粘液乳杆菌gf1633；
65.罗伊氏粘液乳杆菌：选用四川高福记生物科技有限公司的发酵粘液乳杆菌gf2408；
66.嗜酸乳杆菌：选用江苏新申奥生物科技有限公司的嗜酸乳杆菌lj10201；
67.鼠李糖乳酪杆菌：选用四川高福记生物科技有限公司鼠李糖乳酪杆菌gf1827青春双歧杆菌：
68.青春双歧杆菌选用山东中科嘉亿生物工程有限公司青春双歧杆菌jyqs-216。
69.实施例1
70.本实施例提供了一种降尿酸发酵物，制备方法为：
71.(1)将黑果枸杞160g，杜仲雄花180g，丹凤牡丹花120g，耳叶牛皮消100g，短梗五加200g和显脉旋覆花80g粉碎过400目筛，并与5000g水混合均匀得到中药混合液，加入2g柠檬酸调节ph至4.5后，加入纤维素酶6g，果胶酶8g，酸性蛋白酶6g，中温α-淀粉酶12g在温度为55℃下酶解180min，酶解结束后加入4g氢氧化钠调节ph至6.5得酶解液；
72.其中，纤维素酶活力为30000u/g，果胶酶活力为40000u/g，酸性蛋白酶活力为100000u/g，中温α-淀粉酶活力为5000u/g。
73.(2)将上述酶解液升温至96℃，提取45min得到提取液；
74.(3)向上述提取液中加入植物乳植杆菌1.2g、发酵粘液乳杆菌1.4g、罗伊氏粘液乳杆菌0.6g、嗜酸乳杆菌0.8g、鼠李糖乳酪杆菌0.8g、青春双歧杆菌0.3g，在温度为37℃，转速为100rmp，通风量为0vvm的条件下厌氧发酵168h得发酵液；
75.其中，植物乳植杆菌活力为2000亿cfu/g、发酵粘液乳杆菌活力为1000亿cfu/g、罗伊氏粘液乳杆菌活力为1600亿cfu/g、嗜酸乳杆菌活力为1200亿cfu/g、鼠李糖乳酪杆菌活力为2600亿cfu/g、青春双歧杆菌活力为800亿cfu/g。
76.(4)将所述发酵清液进行固液分离，得到发酵清液，即发酵物。
77.实施例2
78.本实施例提供了一种降尿酸发酵物，制备方法为：
79.(1)将黑果枸杞150g，杜仲雄花160g，丹凤牡丹花140g，耳叶牛皮消120g，短梗五加170g和显脉旋覆花100g粉碎过400目筛，并与5000g水混合均匀得到中药混合液，加入5g乙酸调节ph至4.5后，加入纤维素酶9g，果胶酶10g，酸性蛋白酶5g，中温α-淀粉酶8g在温度为55℃下酶解180min，酶解结束后加入6g碳酸氢钠调节ph至6.5得酶解液；
80.其中，纤维素酶活力为30000u/g，果胶酶活力为40000u/g，酸性蛋白酶活力为100000u/g，中温α-淀粉酶活力为5000u/g。
81.(2)将上述酶解液升温至96℃，提取45min得到提取液；
82.(3)向上述提取液中加入植物乳植杆菌1.5g、发酵粘液乳杆菌1.1g、罗伊氏粘液乳杆菌0.8g、嗜酸乳杆菌0.6g、鼠李糖乳酪杆菌0.6g、青春双歧杆菌0.5g，在温度为37℃，转速为100rmp，通风量为0vvm的条件下厌氧发酵168h得发酵液；
83.其中，植物乳植杆菌活力为2000亿cfu/g、发酵粘液乳杆菌活力为1000亿cfu/g、罗伊氏粘液乳杆菌活力为1600亿cfu/g、嗜酸乳杆菌活力为1200亿cfu/g、鼠李糖乳酪杆菌活力为2600亿cfu/g、青春双歧杆菌活力为800亿cfu/g。
84.(4)将所述发酵清液进行固液分离，得到发酵清液，即发酵物。
85.实施例3
86.本实施例提供了一种降尿酸发酵物，制备方法为：
87.(1)将黑果枸杞140g，杜仲雄花200g，丹凤牡丹花80g，耳叶牛皮消100g，短梗五加140g和显脉旋覆花140g粉碎过400目筛，并与5000g水混合均匀得到中药混合液，加入2g柠檬酸调节ph至4.5后，加入纤维素酶6g，果胶酶8g，酸性蛋白酶6g，中温α-淀粉酶12g在温度为55℃下酶解180min，酶解结束后加入4g氢氧化钠调节ph至6.5得酶解液；
88.其中，纤维素酶活力为30000u/g，果胶酶活力为40000u/g，酸性蛋白酶活力为100000u/g，中温α-淀粉酶活力为5000u/g。
89.(2)将上述酶解液升温至96℃，提取45min得到提取液；
90.(3)向上述提取液中加入植物乳植杆菌1.2g、发酵粘液乳杆菌1.4g、罗伊氏粘液乳杆菌0.6g、嗜酸乳杆菌0.8g、鼠李糖乳酪杆菌0.8g、青春双歧杆菌0.3g，在温度为37℃，转速为100rmp，通风量为0vvm的条件下厌氧发酵168h得发酵液；
91.其中，植物乳植杆菌活力为2000亿cfu/g、发酵粘液乳杆菌活力为1000亿cfu/g、罗伊氏粘液乳杆菌活力为1600亿cfu/g、嗜酸乳杆菌活力为1200亿cfu/g、鼠李糖乳酪杆菌活力为2600亿cfu/g、青春双歧杆菌活力为800亿cfu/g。
92.(4)将所述发酵清液进行固液分离，得到发酵清液，即发酵物。
93.实施例4
94.本实施例提供了一种降尿酸发酵物，制备方法为：
95.(1)将黑果枸杞180g，杜仲雄花120g，丹凤牡丹花160g，耳叶牛皮消100g，短梗五加220g和显脉旋覆花60g粉碎过400目筛，并与5000g水混合均匀得到中药混合液，加入2g柠檬酸调节ph至4.5后，加入纤维素酶6g，果胶酶8g，酸性蛋白酶6g，中温α-淀粉酶12g在温度为55℃下酶解180min，酶解结束后加入4g氢氧化钠调节ph至6.5得酶解液；
96.其中，纤维素酶活力为30000u/g，果胶酶活力为40000u/g，酸性蛋白酶活力为100000u/g，中温α-淀粉酶活力为5000u/g。
97.(2)将上述酶解液升温至96℃，提取45min得到提取液；
98.(3)向上述提取液中加入植物乳植杆菌1.2g、发酵粘液乳杆菌1.4g、罗伊氏粘液乳杆菌0.6g、嗜酸乳杆菌0.8g、鼠李糖乳酪杆菌0.8g、青春双歧杆菌0.3g，在温度为37℃，转速为100rmp，通风量为0vvm的条件下厌氧发酵168h得发酵液；
99.其中，植物乳植杆菌活力为2000亿cfu/g、发酵粘液乳杆菌活力为1000亿cfu/g、罗伊氏粘液乳杆菌活力为1600亿cfu/g、嗜酸乳杆菌活力为1200亿cfu/g、鼠李糖乳酪杆菌活力为2600亿cfu/g、青春双歧杆菌活力为800亿cfu/g。
100.(4)将所述发酵清液进行固液分离，得到发酵清液，即发酵物。
101.实施例5
102.本实施例提供了一种降尿酸发酵物，制备方法为：
103.(1)将黑果枸杞100g，杜仲雄花200g，丹凤牡丹花150g，耳叶牛皮消60g，短梗五加200g和显脉旋覆花130g粉碎过400目筛，并与5000g水混合均匀得到中药混合液，加入2g柠檬酸调节ph至4.5后，加入纤维素酶6g，果胶酶8g，酸性蛋白酶6g，中温α-淀粉酶12g在温度为55℃下酶解180min，酶解结束后加入4g氢氧化钠调节ph至6.5得酶解液；
104.其中，纤维素酶活力为30000u/g，果胶酶活力为40000u/g，酸性蛋白酶活力为100000u/g，中温α-淀粉酶活力为5000u/g；
105.(2)将上述酶解液升温至96℃，提取45min得到提取液；
106.(3)向上述提取液中加入植物乳植杆菌1.2g、发酵粘液乳杆菌1.4g、罗伊氏粘液乳杆菌0.6g、嗜酸乳杆菌0.8g、鼠李糖乳酪杆菌0.8g、青春双歧杆菌0.3g，在温度为37℃，转速为100rmp，通风量为0vvm的条件下厌氧发酵168h得发酵液；
107.其中，植物乳植杆菌活力为2000亿cfu/g、发酵粘液乳杆菌活力为1000亿cfu/g、罗伊氏粘液乳杆菌活力为1600亿cfu/g、嗜酸乳杆菌活力为1200亿cfu/g、鼠李糖乳酪杆菌活力为2600亿cfu/g、青春双歧杆菌活力为800亿cfu/g；
108.(4)将所述发酵清液进行固液分离，得到发酵清液，即发酵物。
109.实施例6
110.本实施例提供了一种发酵粉，其将实施例1制备得到的发酵物进行浓缩，浓缩温度为65℃，真空度-0.08mpa制备得到发酵浓缩膏，密度为1.18g/cm3，可溶性固形物含量40.6％。将发酵浓缩膏采用喷雾干燥工艺干燥成粉得发酵粉，发酵粉水分为6.3％。
111.对比例1
112.本对比例提供了一种发酵物，其仅由短梗五加840g制成。其余同实施例1相同。
113.对比例2
114.本对比例提供了一种发酵物，其仅由显脉旋覆花840g组成。其余同实施例1相同。
115.对比例3
116.本对比例提供了一种发酵物，发酵菌粉由5.1g罗伊氏粘液乳杆菌组成，其余同实施例1相同。
117.对比例4
118.本对比例提供的制剂不经过发酵，其余同实施例1。
119.对比例5
120.与实施例1相比，不添加罗伊氏粘液乳杆菌，其他发酵菌活菌比例不变，总菌数不变。
121.实验例1活性成分检测
122.本实验目的在于验证实施例1、和对比例3和对比例4中得到发酵物/制剂活性成分的变化。
123.1)原花青素b2含量检测
124.采用反相高效液相色谱法(rp-hplc)进行原花青素b2的检测，色谱柱c18(250mm
×
4.6mm，5μm)，流动相为2％冰醋酸溶液-乙腈，梯度洗脱；流速为1ml/min；检测波长为280nm。柱温：30℃；进样量：20μl；洗脱顺序见表1。
125.表1流动相洗脱顺序
[0126][0127]
原花青素b2对照品溶液的制备：
[0128]
精密称定原花青素b2对照品1mg，加甲醇1ml，配制成1mg/ml的溶液。分别取上述溶液1μl，2.5μl，5μl，10μl，25μl，50μl，加甲醇定容，分别配制成1μg/ml，2.5μg/ml，5μg/ml，10μg/ml，25μg/ml，50μg/ml的溶液，-18℃保存备用。
[0129]
原花青素b2标准曲线制作：
[0130]
分别取1μg/ml，2.5μg/ml，5μg/ml，10μg/ml，25μg/ml，50μg/ml原花青素b2对照品溶液，分别进样20μl，以峰面积为纵坐标，对照品溶液浓度为横坐标，得到标准曲线方程，y＝10.2164x+6.3754，r＝0.9985。
[0131]
待测样品的制备及测定：
[0132]
取实施例1，对比例3和对比例4对应得到的发酵物各10ml，添加甲醇定容至50ml，过0.45μm微孔滤膜，即得备用。
[0133]
2)绿原酸、丹皮酚含量检测
[0134]
采用c18色谱柱(4.6mm
×
250mm，5μm)；流动相：甲醇-0.2％磷酸，梯度洗脱，洗脱梯度见下表2；检测波长：绿原酸：330nm，丹皮酚：278nm；柱温：25℃；进样量：10μl；理论板数按丹皮酚峰计算，应不低于5000。
[0135]
表2梯度洗脱
[0136][0137]
对照品溶液的制备：
[0138]
精密称取绿原酸、丹皮酚对照品适量，加50％甲醇溶解稀释制成每1ml含绿原酸20μg、丹皮酚10μg的溶液。
[0139]
绿原酸和丹皮酚标准曲线测定：
[0140]
分别精密量取绿原酸和丹皮酚对照品储备液0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml、1.1ml置于10ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10μl注入液相色谱仪，测定绿原酸和丹皮酚峰面积，以对照品峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程，绿原酸回归方程：y＝65.248x-9.1322，r＝0.9991；丹皮酚回归方程：y＝28.541x-3.2256，r＝0.9983。
[0141]
供试品溶液的制备：
[0142]
精密量取实施例1，对比例3和对比例4发酵物10ml，置50ml容量瓶中，加入50％甲醇适量稀释定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
[0143]
3)告达亭含量检测
[0144]
采用c18色谱柱(250
×
4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-水，流速：1ml/min，柱温25℃；进样量：10μl；紫外检测波长220nm；检测时间：60min，采用梯度洗脱，程序如下：
[0145]
表3梯度洗脱
[0146][0147]
对照品溶液的制备：
[0148]
精密称取告达亭对照品适量，加65％乙醇定容，制成每1ml含告达亭1mg的溶液，然后用0.45μm的滤膜进行过滤，得滤液备用。
[0149]
供试品溶液的制备：
[0150]
精密量取实施例1，对比例3和对比例4发酵物10ml，置50ml容量瓶中，加入65％乙醇适量稀释定容至刻度，摇匀，用0.45μm的滤膜进行过滤，得滤液备用，即得供试品溶液。
[0151]
告达亭标准曲线测定：
[0152]
精密量取告达亭对照品储备液0.2ml、0.4ml、0.8ml、1.6ml、2.4ml、3.2ml置10ml量瓶中，加65％乙醇定容，摇匀，分别精密吸取10μl注入液相色谱仪，按上述条件测定告达亭峰面积，以对照品峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程，告达亭标准曲线方程：y＝17.352x+5.3641，r＝0.9994。
[0153]
4)金丝桃苷含量检测
[0154]
采用c18色谱柱(250
×
4.6mm，5μm)，以乙腈为流动相a，以0.3％的磷酸水为流动相b，梯度洗脱，洗脱条件见下表，检测波长：360nm；柱温：30℃；进样量：20μl。
[0155]
表4金丝桃苷检测洗脱条件
[0156][0157]
对照品溶液的制备：
[0158]
精密称取金丝桃苷对照品适量，加甲醇定容，制成每1ml含金丝桃苷1.5mg的溶液，然后用0.45μm的滤膜进行过滤，得滤液备用。
[0159]
供试品溶液的制备：
[0160]
精密量取实施例1，对比例3和对比例4发酵物10ml，置50ml容量瓶中，加入甲醇适量稀释定容至刻度，摇匀，用0.45μm的滤膜进行过滤，得滤液备用，即得供试品溶液。
[0161]
金丝桃苷标准曲线测定：
[0162]
精密量取金丝桃苷对照品储备液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml置于10ml量瓶中，加甲醇定容，摇匀，分别精密吸取20μl注入液相色谱仪，测定金丝桃苷峰面积，以对照品峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程，金丝桃苷标准曲线方程：y＝8.164x-2.7105，r＝0.9982。
[0163]
5)麝香草酚含量检测
[0164]
采用c18色谱柱(250
×
4.6mm,5μm)，流动相：乙腈-水(65∶35v/v)；柱温：25℃；流速：1.0ml/min；检测波长：220nm。理论板数按麝香草酚峰计，应不低于10000。
[0165]
对照品溶液的制备：
[0166]
精密称取麝香草酚对照品适量，加95％乙醇定容，制成每1ml含麝香草酚0.3mg的溶液，然后用0.45μm的滤膜进行过滤，得滤液备用。
[0167]
供试品溶液的制备：
[0168]
精密量取实施例1，对比例3和对比例4发酵物10ml，置50ml容量瓶中，加入95％乙醇定容至刻度，摇匀，用0.45μm的滤膜进行过滤，得滤液备用，即得供试品溶液。
[0169]
麝香草酚标准曲线制作：
[0170]
精密吸取麝香草酚对照品溶液2μl、4μl、6μl、8μl、10μl、12μl进样，测定其峰面积。
以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，麝香草酚回归方程为：y＝105.233x+26.1732，r＝0.9989。
[0171]
表5各实验组样品中有效成分含量测定(mg/g)
[0172] 原花青素b2绿原酸丹皮酚告达亭金丝桃苷麝香草酚实施例10.6795.8831.1042.6931.7071.352对比例30.3632.9070.8251.4521.2181.031对比例40.2481.7560.4810.8380.8760.552对比例50.4533.1450.8791.6851.2691.132
[0173]
结果分析：
[0174]
从上表可以看出，与不发酵组(对比例4)相比，发酵组(实施例1)六大有效成分含量大幅增加，原花青素b2、绿原酸、丹皮酚、告达亭、金丝桃苷、麝香草酚含量分别增加了173.8％、235.0％、129.5％、221.4％、94.9％、144.9％，由此可以看出，经过微生物发酵技术处理后，中药中的活性成分含量大幅增加。
[0175]
与不发酵组(对比例4)相比，只采用单一菌种发酵组(对比例3)有效成分含量也有一定程度的增加，原花青素b2、绿原酸、丹皮酚、告达亭、金丝桃苷、麝香草酚含量分别增加了46.4％、65.5％、71.5％、73.3％、39.0％、86.8％，由此看出，采用单一菌种发酵对中药有效成分的增加也有明显的促进作用。
[0176]
与采用单一菌种发酵组(对比例3)相比，采用多菌种共同发酵组(实施例1)各个有效成分含量也有较明显的增加，原花青素b2、绿原酸、丹皮酚、告达亭、金丝桃苷、麝香草酚含量分别增加了87.1％、102.4％、33.8％、85.5％、40.1％、31.1％，可以看出，多菌种混合发酵更有利于中药成分含量的增加。
[0177]
与采用未添加罗伊氏粘液乳杆菌发酵组(对比例5)相比，采用多菌种共同发酵组(实施例1)各个有效成分含量也有较明显的增加，原花青素b2、绿原酸、丹皮酚、告达亭、金丝桃苷、麝香草酚含量分别增加了49.9％、87.1％、25.6％、59.8％、34.5％、19.4％，可以看出，多菌种混合发酵更有利于中药成分含量的增加。
[0178]
实验例2动物实验
[0179]
实验动物：选用72只无特定病原体(spf)级雄性icr小鼠(体重18-22g)，购自北京大学医学部实验动物科学部(中国北京)。实验动物饲养于23
±
1℃，55％湿度，给予普通饲料和水，在室内12小时的光照与12小时的黑暗交替的环境下适应3天。所有动物实验程序均已由北京大学实验动物福利伦理委员会(institutionalanimalcareandusecommittee，iacuc)审批，审批编号：la2021459，并严格按照《实验动物福利伦理指南》(nih出版社，第85-23号，1996年修订)执行。
[0180]
试验样品：受试物为实施例1-5和对比例1-5制备得到的发酵物。
[0181]
实验饲料：(1)普通饲料：购自北京科澳协力饲料有限公司，其提供的营养成分及水平符合国家标准gb14924.3-2010，可满足啮齿类动物生长发育所必需。
[0182]
(2)高尿酸血症饲料：用普通饲料与4％氧嗪酸钾、20％酵母混合制成的饲料，购自北京博泰宏达生物技术有限公司[scxk(jun)2012-0003]。
[0183]
实验方法：
[0184]
动物模型构建及分组：
[0185]
实验开始前，用电子秤测定小鼠体重，并按体重将72只雄性icr小鼠随机分为12组(n＝14)，并进行相应处理。
[0186]
(1)正常对照组：给予普通饲料，同时按10ml/kg蒸馏水进行灌胃处理，连续6周。
[0187]
(2)高尿酸血症模型组：给予高尿酸血症饲料，同时按10ml/kg蒸馏水进行灌胃处理，连续6周。
[0188]
(3)苯溴马隆组：给予高尿酸血症饲料，同时按10ml/kg(20mg/kg体重/天苯溴马隆+0.5％羧甲基纤维素)进行灌胃处理，连续6周。
[0189]
(4)实施例1组：给予高尿酸血症饲料，同时按10ml/kg(1g/kg体重/天，实施例1制备得到的受试样品)进行灌胃处理，连续6周。
[0190]
(5)实施例2组：给予高尿酸血症饲料，同时按10ml/kg(1g/kg体重/天，实施例2制备得到的受试样品)进行灌胃处理，连续6周。
[0191]
(6)实施例3组：给予高尿酸血症饲料，同时按10ml/kg(1g/kg体重/天，实施例3制备得到的受试样品)进行灌胃处理，连续6周。
[0192]
(7)实施例4组：给予高尿酸血症饲料，同时按10ml/kg(1g/kg体重/天，实施例4制备的样品)进行灌胃处理，连续6周。
[0193]
(8)实施例5组：给予高尿酸血症饲料，同时按10ml/kg(1g/kg体重/天，实施例5制备的样品)进行灌胃处理，连续6周。
[0194]
(9)对照组1：给予高尿酸血症饲料，同时按10ml/kg(1g/kg体重/天，对比例1制备的样品)进行灌胃处理，连续6周。
[0195]
(10)对照组2：给予高尿酸血症饲料，同时按10ml/kg(1g/kg体重/天，对比例2制备的样品)进行灌胃处理，连续6周。
[0196]
(11)对照组3：给予高尿酸血症饲料，同时按10ml/kg(1g/kg体重/天，对比例3制备的样品)进行灌胃处理，连续6周。
[0197]
(12)对照组4：给予高尿酸血症饲料，同时按10ml/kg(1g/kg体重/天，对比例4制备的样品)进行灌胃处理，连续6周。
[0198]
(13)对照组5：给予高尿酸血症饲料，同时按10ml/kg(1g/kg体重/天，对比例5制备的样品)进行灌胃处理，连续6周。
[0199]
实验过程中，每天观察动物的生长情况，包括毛色、精神状态和日常活动，并定期记录动物的进食量、饮水量、尿量、体重和食物利用率(体重增加/进食量
×
100％)。实验结束时，处死小鼠以收集不同组织用于不同的研究。
[0200]
降尿酸水平测定实验
[0201]
血样采集：在实验进行第6周末，将小鼠眼球摘出，采集小鼠静脉血。将血液收集到装有edta-k2的抗凝管中，在4℃下以3000r/min离心10分钟，收集小鼠血清样品，置于-20℃保存备用；
[0202]
测定方法：
[0203]
使用全自动生化分析仪奥林巴斯au480测定血清尿酸(sua)、血尿素氮(bun)、血清肌酐(scr)的浓度。
[0204]
表6各实验组小鼠血清尿酸(sua)、血尿素氮(bun)、血清肌酐(scr)的浓度
[0205][0206]
##表示与正常对照组相比，p《0.01；*表示与高尿酸血症模型组相比，p《0.05；**表示与高尿酸血症模型组相比，p《0.01。
[0207]
结果分析：
[0208]
干预6周后，与正常对照组相比，高尿酸模型组小鼠血清尿酸、血尿素氮、血清肌酐的浓度均有明显增高(p《0.01)，表明高尿酸血症小鼠造模成功。
[0209]
与高尿酸血症模型对照组相比，苯溴马隆组、实施例1-5组小鼠血清尿酸、血尿素氮、血清肌酐的浓度均有显著降低(p《0.01)，表明实施例1-5组能够有效降低高尿酸血症小鼠的血清尿酸、血尿素氮、血清肌酐水平。其中，实施例1、2的效果要稍优于实施例3、4、5。
[0210]
与高尿酸血症模型对照组相比，对比例3小鼠血清尿酸、血尿素氮、血清肌酐的浓度也有一定的降低(p《0.05)，表明只采用单一菌种发酵制备也具有一定的降尿酸效果。对比例5小鼠血清尿酸、血尿素氮、血清肌酐的浓度也有一定的降低(p《0.05)，表明未添加罗伊氏粘液乳杆菌发酵制备也有一定的降尿酸效果，但效果均低于实施例。而对比例1、2、4，与模型对照组相比，小鼠血清尿酸、血尿素氮、血清肌酐的浓度没有统计学差异(p》0.05)。
[0211]
减轻高尿酸血症小鼠肾脏病变实验
[0212]
肝肾组织采集方法：取血后，通过颈椎脱臼法处死小鼠，对肝、肾组织进行取样。对取出的肝和肾称重，收集肝和一半右肾，用液氮冷藏，并在-80℃保存。另一半右肾用4％多聚甲醛溶液固定，常温保存，作为样本后续使用。
[0213]
其中4％多聚甲醛溶液固定的右肾用于组织病理学检查。
[0214]
将肾脏组织经过脱水、透明、浸蜡、包埋、切片，制作石蜡切片，然后脱蜡、染色、脱水、透明、晒干，进行苏木精-伊红染色(se染色法)，并采集图像进行分析。
[0215]
在奥林巴斯bx43光学显微镜下，使用imageproplus5.1(mediacybernetics，us)图像分析软件检查组织并采集图像。在200倍视野下，固定显微镜的各项光学常数，分别对病理切片的各个区域进行扫描(重点扫描肾小球、肾间质)。
[0216]
结果分析：
[0217]
光镜显示结果如图1所示，比例尺：100微米；原始放大倍数200
×
。
[0218]
与正常对照组相比，高尿酸血症模型组小鼠肾小球肿胀，肾小球基底膜增厚，系膜区增宽，肾小管扩张，肾小管上皮细胞排列紊乱，局部肾间质组织散在炎性细胞浸润；与高尿酸血症模型组相比，实施例3组小鼠肾小球毛细血管肿胀有所改善，系膜基质正常，囊腔狭窄有所改善；实施例1组和实施例2组小鼠肾小球和肾小管结构正常，上皮细胞排列整齐，与正常对照组接近；与高尿酸血症模型组相比，苯溴马隆组小鼠肾小管扩张减少，肾小管上皮细胞排列整齐，偶见空泡变性。
[0219]
上述肾脏形态学结果显示，实施例1组和实施例2组能够减轻高尿酸血症小鼠造成的肾损伤，起到了很好的肾脏保护作用。虽然苯溴马隆能够降低血尿酸水平，但对肾脏并没有表现出很好的保护作用。
[0220]
降低小鼠肝脏xod活性，改善肝功能实验
[0221]
测定方法：准确称取肝脏组织样本，按重量(g)：体积(ml)＝1：9的比例加入9倍体积的生理盐水，冰浴条件下，机械匀浆，制备成10％的匀浆液。7000r/min离心10min，收集上清液，按照xod试剂盒(购自南京建成生物工程研究所)说明，进行检测xod活性。
[0222]
降尿酸水平测试实验中收集小鼠血清样品，置于-20℃保存备用的血清为样品，进行全自动生化分析仪奥林巴斯au480测定丙氨酸氨基转移酶(alt)和天冬氨酸氨基转移酶(ast)的浓度。
[0223]
结果见表7，##表示与正常对照组相比，p《0.01；*表示与高尿酸血症模型组相比，p《0.05；**表示与高尿酸血症模型组相比，p《0.01。
[0224]
表7各实验组小鼠肝脏xod活性、血清alt和ast活性
[0225] xod活性(u/g蛋白)alt活性(u/l)ast活性(u/l)正常对照组82.7
±
19.634.9
±
4.895.0
±
9.3模型对照组202.5
±
34.9##51.3
±
5.3##136.2
±
12.3##苯溴马隆组126.2
±
23.7**40.2
±
4.9**102.7
±
11.5**实施例1138.7
±
25.7**42.7
±
3.6**111.7
±
10.6**实施例2141.5
±
24.9**41.6
±
4.5**113.5
±
9.9**实施例3148.2
±
21.3**44.7
±
3.4*120.4
±
11.4**实施例4147.3
±
23.8**42.6
±
3.9**118.8
±
12.2*实施例5147.0
±
23.4**43.8
±
3.3*115.2
±
10.4**对比例1190.7
±
28.647.6
±
4.2127.9
±
11.2对比例2195.0
±
26.947.9
±
4.4128.5
±
10.9对比例3161.6
±
23.2*45.2
±
3.8*121.0
±
10.8*对比例4176.4
±
21.346.3
±
3.5124.5
±
11.7
对比例5169.2
±
12.744.8
±
4.1*121.7
±
9.6*
[0226]
干预6周后，与正常对照组相比，高尿酸模型组小鼠肝脏xod活性、血清alt和ast活性均有明显增高(p《0.01)，表明高尿酸血症显著影响了小鼠肝脏xod活性、血清alt和ast活性。
[0227]
与高尿酸血症模型对照组相比，苯溴马隆组、实施例1、2组小鼠肝脏xod活性、血清alt和ast活性均有显著降低(p《0.01)，表明实施例1、2组能够有效降低高尿酸血症小鼠的肝脏xod活性、血清alt和ast活性。实施例3、4、5小鼠肝脏xod活性、血清alt和ast活性也有很大程度降低(p《0.05，部分指标p《0.01)，从此可以看出在实施例1、2抑制小鼠肝脏xod活性、血清alt和ast活性效果方面要稍微优于实施例3、4、5。
[0228]
与高尿酸血症模型对照组相比，对比例3小鼠肝脏xod活性、血清alt和ast活性也有一定的降低(p《0.05)，表明只采用单一菌种发酵制备也具有一定的降尿酸效果。对比例5小鼠血清alt和ast活性也有一定的降低(p《0.05)，表明未添加罗伊氏粘液乳杆菌发酵制备也有一定的效果，而对比例1、2、4，与模型对照组相比，没有统计学显著性差异(p》0.05)。
[0229]
改善肾脏炎症因子水平实验
[0230]
高尿酸血症小鼠会出现明显的肠道屏障缺陷，机体肠屏障功能障碍会激活巨噬细胞介导的炎症反应，toll样受体4(tolllikereceptor4，tlr4)的表达上调，进而激活髓系分化因子88(myd88)信号通路，启动nf-κb的快速激活，增加体内il-1β、tnf-α、mcp-1和il-8的水平，引起细胞因子级联激活反应，促进近端肾小管上皮细胞炎症和氧化应激，进而加重肾脏功能损伤。因此，控制尿酸水平的关键是减少炎症和氧化应激，从而减少对肾功能的损害，保证肾脏对尿酸的排泄。
[0231]
测定方法：
[0232]
准确称取肾脏组织样本，按重量(g)：体积(ml)＝1：9的比例加入9倍体积的生理盐水，冰浴条件下，机械匀浆，制备成10％的匀浆液。3000r/min离心10min，收集上清液。按照elisa试剂盒的说明进行处理，分别检测il-1β、il-6和tnf-α的含量。小鼠tnf-α酶联免疫试剂盒(88-7324)、小鼠il-1β酶联免疫试剂盒(88-7064)、小鼠il-6酶联免疫试剂盒(88-7013)均购自美国英杰生命技术有限公司。实验结果如表8。
[0233]
表8各组(n＝10)小鼠肾脏促炎细胞因子水平(x
±
sd)
[0234]
[0235][0236]
##表示与正常对照组相比，p《0.01；*表示与高尿酸血症模型组相比，p《0.05；**表示与高尿酸血症模型组相比，p《0.01。
[0237]
与正常对照组相比，高尿酸血症模型组小鼠肾脏炎症因子il-1β、il-6和tnf-α水平均显著升高(p《0.01)，表明高尿酸血显著升高了对小鼠肾脏炎症因子水平。
[0238]
与高尿酸血症模型组相比，连续干预6周后，苯溴马隆组、实施例1、2、3小鼠肾脏il-1β、il-6、tnf-α水平显著降低(p《0.01)；实施例4、5小鼠肾脏il-1β、il-6、tnf-α水平也有明显降低(p《0.01，少部分指标p＜0.05)。结果表明，实施例1-5组均能显著降低高尿酸血症模型组小鼠肾脏炎症因子水平，对肾脏组织起到一定的保护作用。
[0239]
与高尿酸血症模型组相比，对比例1、2、4、5组小鼠肾脏炎症因子水平没有显著性差异(p＞0.05)，也表明该3个对比例组不能对肾脏起到一定的保护作用；对比例3与高尿酸血症模型组相比，小鼠肾脏il-1β、il-6、tnf-α水平显著降低(p《0.05)，但效果与实施例1-5相比较差。
[0240]
westernblot蛋白质印迹测定
[0241]
丝裂原活化蛋白激酶(mapk)是一组能被不同的细胞外刺激而被激活的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶，是信号传导的重要传递者，参与调节细胞的生长、分化、对环境的应激适应、炎症反应等多种重要的细胞生理/病理过程。mapk可分为4个亚族：erk、p38、jnk和erk5。近年来，p38mapk在促炎细胞因子调节中的作用受到了越来越多的关注。p38mapk磷酸化能够通过诱导细胞增殖，促进nf-κb的激活。
[0242]
在上游p38mapk信号的刺激下，nf-κb转运至细胞核，与nf-κb转录元件结合，激活il-1β、il-6和tnf-α炎症因子的表达。同时，il-1β和tnf-α可通过激活nf-κb信号通路诱导其他炎症因子的产生，加重肾脏炎症反应，形成恶性循环，因此降低p38mapk和nf-κb的激活，就显得十分关键。
[0243]
测定方法：
[0244]
免疫印迹法检测小鼠肾组织中p38mapk、p-p38mapk、nf-κb、p-nf-κb和nlrp3蛋白的表达。二喹啉甲酸(bicinchoninicacid，bca)蛋白定量试剂盒采用北京普利莱基因技术有限公司。
[0245]
实验结果如图2所示。
[0246]
结果分析：
[0247]
与正常对照组相比，高尿酸血症模型组小鼠肾脏p-p38mapk/p38mapk表达比例明显升高；与高尿酸血症模型组相比，实施例1组小鼠肾脏p-p38mapk/p38mapk表达比例明显降低(p《0.05)，苯溴马隆组小鼠肾脏p-p38mapk/p38mapk表达比例也明显降低(p《0.05)；与正常对照组相比，高尿酸血症模型组小鼠肾脏p-nf-κb/nf-κb表达比例显著升高；与高尿酸血症模型组相比，实施例1小鼠肾脏p-nf-κb/nf-κb表达比例明显降低(p《0.05)；各组nlrp3蛋白表达无显著差异。
[0248]
上述结果表明，实施例1组能够显著降低了p38mapk和nf-κb的激活，p-p38mapk/p38mapk表达比例明显降低，p-nf-κb/nf-κb表达比例明显降低，抑制尿酸水平的升高，并且可以显著逆转炎症造成的改变和损伤。
[0249]
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

技术特征：
1.一种降尿酸的发酵物，其特征在于，发酵原料中以重量份计包括：黑果枸杞100-180份，杜仲雄花120-200份，丹凤牡丹花80-160份，耳叶牛皮消60-140份，短梗五加140-220份，显脉旋覆花60-140份，发酵菌粉1.2-12份和酶制剂14-120份；所述的酶制剂中包括纤维素酶、果胶酶、酸性蛋白酶和中温α-淀粉酶，各酶质量比为6-9：8-10：5-6：8-12；所述的发酵菌粉中包括植物乳植杆菌、发酵粘液乳杆菌、罗伊氏粘液乳杆菌、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳酪杆菌和青春双歧杆菌，各菌的质量比为12-15：11-14：6-8：6-8：6-8：3-5。2.根据权利要求1所述的发酵物，其特征在于，所述的酶制剂中各酶单位酶活比为30-40：40-50：90-100：5-6。3.根据权利要求1所述的发酵物，其特征在于，所述的发酵菌粉中各菌单位活力比为18-20：8-10：14-16：10-12：23-26：6-8。4.根据权利要求2所述的发酵物，其特征在于，所述的酶制剂中，各酶的质量比为6：8：6：12或9：10：5：8；各酶单位酶活比为：30：40：100：5；所述的纤维素酶单位酶活为30000u/g。5.根据权利要求3所述的发酵物，其特征在于，所述的发酵菌粉中，各菌的质量比为12：14：6：8：8：3或15：11：8：6：6：5；各菌单位活力比为20：10：16：12：26：8；所述的植物乳植杆菌的单位活力为2000亿cfu/g。6.根据权利要求1所述的发酵物，其特征在于，还包括酸碱调节剂：包括2-6重量份乙酸和2-8重量份碳酸氢钠组成或由1-4重量份柠檬酸和2-6重量份氢氧化钠。7.权利要求1-6任一项所述的发酵物的制备方法，其特征在于，包括：(1)酶解：将粉碎并称量的黑果枸杞、杜仲雄花、耳叶牛皮消、短梗五加、显脉旋覆花、丹凤牡丹花，与水混合形成混合物，调节ph至4.5-5.5后加入酶制剂进行酶解，酶解结束后调ph至5.0-6.8，得到酶解液；(2)将所述酶解液进行提取处理，得到提取液；(3)向所述提取液中加入发酵菌粉进行发酵，固液分离得到上清即为发酵物。8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中酶解的温度为45℃-65℃，酶解时间为30-180min；所述步骤(2)提取处理的温度为80-108℃，时间为10-90min；所述步骤(3)中发酵的温度为25-45℃，发酵时间为24-240h，搅拌转速为100-1000rpm，通风量为1-10vvn。9.权利要求1-6任一项所述的发酵物在制备预防或治疗高尿酸血症、痛风或肾脏病变症药物中的用途。10.包含权利要求1-6任一项所述的发酵物的药物制剂。

技术总结
本发明提供一种降尿酸的发酵物，属于中药发酵技术领域。所述的发酵物发酵原料中以重量份计包括：黑果枸杞100-180份，杜仲雄花120-200份，丹凤牡丹花80-160份，耳叶牛皮消60-140份，短梗五加140-220份，显脉旋覆花60-140份，发酵菌粉1.2-12份和酶制剂14-120份。各中药组分协同配合在酶解发酵的作用下具有很好的降尿酸的效果，还能对肾脏损伤，肝脏损伤有显著的保护作用，降低血清肌酐，尿白蛋白排泄率，改善肾小球过滤功能；且可改善炎症因子水平。且可改善炎症因子水平。且可改善炎症因子水平。


技术研发人员：林峰 马涛 宋帅
受保护的技术使用者：未名太研生物科技（绍兴）有限公司
技术研发日：2023.06.28
技术公布日：2023/8/9