一种甲磺酸二氢麦角碱缓释片有关物质检测的前处理方法与流程

1.本发明涉及药物分析技术领域，尤其涉及一种甲磺酸二氢麦角碱缓释片有关物质检测的前处理方法。


背景技术：

2.甲磺酸二氢麦角碱缓释片，商品名依舒佳林，是一种亲水凝胶骨架型缓释片，用药后能在较长时间内持续释放药物，从而可维持较为平稳的血药浓度，可避免由于血药浓度的迅速升高而引起的不良反应。卡波姆作为形成骨架的功能性辅料，是由由丙烯酸单聚物与烯丙基季戊四醇交联形成的高分子聚合物，其特点为服用后骨架遇消化液表面润湿，吸水后膨胀形成凝胶层，从而延缓药物的释放，达到缓释的效果。
3.在日常质量控制中，通常采用高效液相法对甲磺酸二氢麦角碱缓释片的有关物质进行检测。然而，由于卡波姆具有高黏性的特点，采用常规方法制备供试品溶液并采用高效液相法有关物质时，常出现进样精密度rsd值偏大、样品过滤处理困难，同时还发现色谱柱柱压上升、柱效明显下降等一系列问题。因此，亟须寻找一种简单有效的前处理方法，使处理后的供试品溶液能适用于高效液相有关物质检测是十分必要的。
4.中国专利文献cn111999157b公开了一种用于检测含亲水型凝胶骨架和高粘度辅料的缓释制剂中主药含量及有关物质的前处理方法。该方法特征为采用甲醇作为分散剂，将样品经振摇均匀分散，加入沉淀剂氯化钙后超声处理，再经离心过滤步骤获得待测样品。该方法对振摇分散步骤要求很高，如不能将样品颗粒完全均匀分散在甲醇中，则会在加入氯化钙后，未分散均匀的辅料不能与氯化钙发生沉淀反应，从而极大影响结果重现性。且由于该前处理方法中使用了氯化钙作为沉淀剂，而氯化钙与卡波姆等辅料形成沉淀的速度过快，导致在形成沉淀过程中极易造成主药成分被包裹，从而导致回收率的降低。因此，需要开发一种有效针对含辅料卡波姆的缓释制剂的快速、准确的前处理方法。


技术实现要素：

5.为解决现有方法中存在的问题，本发明提供了一种针对以卡波姆为主要辅料的甲磺酸二氢麦角碱缓释片的前处理方法，经本发明方法处理后的溶液可有效降低溶液黏度，便于离心和过滤等后续处理步骤，从而获得适用于高效液相有关物质检测的供试品溶液。
6.卡波姆是由丙烯酸单聚物与烯丙基季戊四醇交联生成的聚合物，而当卡波姆在水中溶胀时，其结构中的-cooh基团会转变为-coo-，具负电荷。因负电荷之间的相互排斥，导致卡波姆的分子链撑开，使溶液的黏度增加。向卡波姆溶液中加入带正电荷的阳离子时，会中和基团-coo-的负电荷，使撑开的分子链收缩，同时由于中和了电荷，破坏了卡波姆胶体溶液的稳定性，卡波姆分子相互聚集成团，形成絮状沉淀，从而极大降低了溶液的黏度。
7.基于上述原理，本发明人进行一系列筛选后发现，使用含有阳离子的溶液对样品溶液进行处理后，均可显著的降低样品溶液的黏度。但在进一步对回收率的测试研究中发现，在尝试使用专利cn111999157b中方法进行测试时，回收率结果明显偏低。
8.在深入研究后，发现该方法的重现性和准确性非常依赖于操作步骤中的振摇程度，因卡波姆在有机溶剂甲醇中溶解性差，所以直接向样品粉末中加入甲醇后，样品中辅料卡波姆不能被有效浸润，而以固体状态聚集成团，并黏附于量瓶底部，即使长时间振摇，也无法均匀分散，极大的影响了主成分溶出。
9.经研究发现，钙离子与卡波姆发生沉淀的速度明显快于钠离子，导致反应速度过快，从而使得在沉淀生成过程中可能会有少量甲磺酸二氢麦角碱(主成分)被包裹在沉淀中，这是导致回收率结果偏低的主要原因。发明人对比考察了多种试剂，最终发现经氯化钠溶液处理后的供试品溶液，不仅能大大降低溶液黏度，同时能达到理想的回收率(98％-102％)，从而对杂质检出更加灵敏。
10.基于上述目的，本发明提供了一种甲磺酸二氢麦角碱缓释片有关物质检测的前处理方法，包含如下步骤：
11.(1)将甲磺酸二氢麦角碱缓释片研成细粉后，使细粉在氯化钠溶液中溶胀，形成沉淀；
12.(2)摇匀，加有机溶剂稀释定容；
13.(3)离心，取上清液，过滤。
14.本发明所述的前处理方法中，所述步骤(1)中细粉在氯化钠溶液中溶胀并形成沉淀时间为2-10h，由于卡波姆颗粒表面的水化速度较慢，如溶胀并形成沉淀时间过短，卡波姆无法有效溶解在氯化钠溶液中并与之发生中和沉淀反应。
15.本发明所述的前处理方法中，所述步骤(1)中氯化钠溶液的浓度为1％-20％，优选为2-5％，当氯化钠溶液浓度低于1％时，钠离子浓度过低，不能产生明显的沉淀效应，而钠离子浓度大于20％时，加入稀释剂乙腈后，会析出无机盐颗粒，增加后续处理难度。
16.试验过程中，发明人还发现经沉淀后，需对样品溶液进行充分摇匀，在形成沉淀时，有少量甲磺酸二氢麦角碱(主成分)会粘附在沉淀表面，需通过充分摇匀让主成分脱离沉淀物表面，否则回收率数据会偏低。经试验研究，采用旋涡混合器，转速2500-3000rpm，时间5-10min，即可达到令人满意的回收率结果。
17.发明人还比较了多种常见有机溶剂，包括甲醇、乙醇和乙腈，作为稀释剂对样品溶液黏度大小的影响，以及有关物质的检测情况。结果显示，醇类溶剂由于存在较强的氢键作用，易与溶液中残留的卡波姆相互作用，从而导致样品溶液黏度大于使用乙腈作为稀释剂时。因此，使用乙腈作为稀释剂得到的待测溶液，具有最低的黏度，便于后续的过滤操作
18.本发明所述的前处理方法中，所述步骤(3)中离心的离心力为10000-15000g，因为卡波姆与钠离子形成的共聚物沉淀呈细绒状，体积小且质轻，当离心转速过小时，沉淀物不能很好的沉积在离心管底部，会有部分悬浮在上清液中，从而影响离心效果。
19.由以上技术方案可知，本发明采用氯化钠溶液对含辅料卡波姆的甲磺酸二氢麦角碱缓释片进行前处理，可获得低粘度，便于离心过滤，适用于高效液相色谱法有关物质检测的溶液，且在检测中未出现明显干扰，能达到专属、灵敏和准确的技术效果。且该方法操作简单，重复性好，在检测含辅料卡波姆的甲磺酸二氢麦角碱缓释片有关物质时具备明显优势。
附图说明
20.为了更清楚地说明本发明或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
21.图1为本发明实施例1中甲磺酸二氢麦角碱缓释片3种处理方式的样品溶液对比图；
22.图2为本发明实施例2中甲磺酸二氢麦角碱缓释片分别采用氯化钙溶液和氯化钠溶液处理后有关物质检测hplc重叠图
具体实施方式
23.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进一步详细说明。
24.表1仪器列表
25.仪器名称厂家型号编号电子天平梅特勒xse105du2004001高效液相色谱仪acchroms60002008003ph计赛多利斯pb-102003008高速离心机湖南赫西tg16mw2007001超声仪深圳歌能gs-100a2001007
26.色谱条件
27.用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.05mol/l磷酸氢二铵(用10％磷酸溶液调ph值至2.5)为流动相a，甲醇为流动相b，按表2进行线性梯度洗脱，检测波长为280nm，进样体积25μl，流速1ml/min。
28.表2线性梯度洗脱条件
29.时间(分钟)流动相a(％)流动相b(％)0901010.0901025.0604035.0505045.0505055.0406055.5901065.09010
30.甲磺酸二氢麦角碱缓释片(商品名依舒佳林)的处方如下：甲磺酸二氢麦角碱、卡波姆、淀粉、无水乳糖、酒石酸、硬脂酸镁、滑石粉和丁基羟基苯甲醚。
31.实施例1
32.甲磺酸二氢麦角碱缓释片样品不同处理方式效果对比
33.1.处理方式
34.1)处理方式1：称取研磨后甲磺酸二氢麦角碱缓释片细粉540mg，置25ml量瓶中，加
入10ml甲醇，采用旋涡混合器摇匀，转速3000rpm，时间10min。
35.2)处理方式2：称取研磨后甲磺酸二氢麦角碱缓释片细粉540mg，置25ml量瓶中，加入15ml的5％氯化钙溶液，静置2小时。
36.3)处理方式3：称取研磨后甲磺酸二氢麦角碱缓释片细粉540mg，置25ml量瓶中，加入15ml的5％氯化钙溶液，静置2小时。
37.2.结果
38.1)处理方式1：细粉无法分散在甲醇中，聚集成团并牢固黏附在量瓶底部。
39.2)处理方式2：细粉在溶液中分散，底部出现细颗粒状沉淀，溶液中部澄清。
40.3)处理方式2：细粉在溶液中分散，底部出现细绒状沉淀，溶液中部澄清。
41.实施例2
42.甲磺酸二氢麦角碱缓释片前处理中不同种类试剂处理效果对比
43.1.试剂种类
44.1)二价钙离子：5％氯化钙；
45.2)一价钠离子：5％氯化钠；
46.3)一价钠离子：5％硫酸钠；
47.4)一价钾离子：5％氯化钾。
48.2.操作过程
49.称取研磨后甲磺酸二氢麦角碱缓释片细粉540mg，置25ml量瓶中，分别加入15ml的上述各溶液，轻轻摇匀后，静置2小时，采用旋涡混合器摇匀，转速3000rpm，时间10min，用乙腈稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液微孔滤膜滤过。
50.3.实验结果
51.分别用上述试剂处理后供试品溶液进行有关物质检测结果如下表3所示，其中氯化钙溶液处理后供试品溶液的杂质检出个数明显少于氯化钠溶液处理后溶液，且已知杂质a的检出量也大大下降。
52.表3有关物质检测结果
[0053][0054]
实施例3甲磺酸二氢麦角碱缓释片样品前处理中不同浓度氯化钠溶液处理效果对比
[0055]
1.氯化钠浓度
[0056]
1)浓度1：0.5％氯化钠溶液；
[0057]
2)浓度2：1％氯化钠溶液；
[0058]
3)浓度3：20％氯化钠溶液；
[0059]
4)浓度4：25％氯化钠溶液。
[0060]
2.处理过程
[0061]
1)称取研磨后甲磺酸二氢麦角碱缓释片细粉540mg，置25ml量瓶中，加入15ml的0.5％氯化钠溶液，轻轻摇匀后，静置2小时，超声5分钟，用乙腈稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液微孔滤膜滤过。
[0062]
2)称取研磨后甲磺酸二氢麦角碱缓释片细粉540mg，置25ml量瓶中，加入15ml的1％氯化钠溶液，轻轻摇匀后，静置2小时，采用旋涡混合器摇匀，转速3000rpm，时间10min，用乙腈稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液微孔滤膜滤过。
[0063]
3)称取研磨后甲磺酸二氢麦角碱缓释片细粉540mg，置25ml量瓶中，加入15ml的20％氯化钠溶液，轻轻摇匀后，静置2小时，采用旋涡混合器摇匀，转速3000rpm，时间10min，用乙腈稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液微孔滤膜滤过。
[0064]
4)称取研磨后甲磺酸二氢麦角碱缓释片细粉540mg，置25ml量瓶中，加入15ml的25％氯化钠溶液，轻轻摇匀后，静置2小时，采用旋涡混合器摇匀，转速3000rpm，时间10min，用乙腈稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液微孔滤膜滤过。
[0065]
3.结果
[0066]
分别采用1％和20％的氯化钠溶液对供试品溶液进行处理后，均能明显降低溶液黏度，但甲磺酸二氢麦角碱缓释片细粉加入到0.5％的氯化钠溶液后难以均匀分散，部分聚集成团，20％的氯化钠溶液与乙腈混合时，有无机盐颗粒析出，增加了后续处理步骤的难度。
[0067]
实施例4
[0068]
甲磺酸二氢麦角碱缓释片不同混匀方式回收率测定结果对比。
[0069]
1.操作过程
[0070]
称取研磨后甲磺酸二氢麦角碱缓释片细粉540mg，置25ml量瓶中，加入15ml的2％氯化钠溶液，轻轻摇匀后，静置2小时，分别采用下表中方式进行处理后，用乙腈稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液微孔滤膜滤过。
[0071]
2.结果
[0072]
表4甲磺酸二氢麦角碱缓释片不同处理方式回收率测定结果
[0073]
序号处理方式时间回收率1不振摇—— 2手动剧烈振摇5分钟 3手动剧烈振摇10分钟99.5％4手动剧烈振摇15分钟99.8％5超声5分钟99.6％6超声10分钟99.5％7超声20分钟100.1％
[0074]
实施例5
[0075]
甲磺酸二氢麦角碱缓释片前处理步骤中不同离心转速效果对比。
[0076]
1.操作过程
[0077]
称取研磨后甲磺酸二氢麦角碱缓释片细粉540mg，置25ml量瓶中，加入15ml的2％氯化钠溶液，轻轻摇匀后，静置2小时，超声5分钟，用乙腈稀释至刻度，摇匀，分别用下表中条件进行离心操作，取上清液微孔滤膜滤过。
[0078]
2.结果
[0079]
表5甲磺酸二氢麦角碱缓释片不同处理方式回收率测定结果
[0080][0081][0082]
实施例6
[0083]
甲磺酸二氢麦角碱缓释片有关物质检测重复性结果。
[0084]
1.操作过程
[0085]
称取研磨后甲磺酸二氢麦角碱缓释片细粉540mg，置25ml量瓶中，加入15ml的2％氯化钠溶液，轻轻摇匀后，静置2小时，然后采用旋涡混合器摇匀，转速3000rpm，时间10min，用乙腈稀释至刻度，摇匀，离心(转速15000转)5分钟，取上清液微孔滤膜滤过。平行制备6份供试品溶液。
[0086]
2.结果
[0087]
表6甲磺酸二氢麦角碱缓释片有关物质重复性测定结果
[0088][0089]
所属领域的普通技术人员应当理解：以上任何实施例的讨论仅为示例性的，并非旨在暗示本发明的范围(包括权利要求)被限于这些例子；在本发明的思路下，以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合，步骤可以以任意顺序实现，并存在如上所述的本发明的不同方面的许多其它变化，为了简明它们没有在细节中提供。
[0090]
本发明旨在涵盖落入所附权利要求的宽泛范围之内的所有这样的替换、修改和变型。因此，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何省略、修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种甲磺酸二氢麦角碱缓释片有关物质检测的前处理方法，其特征在于，包含如下步骤：(1)将甲磺酸二氢麦角碱缓释片研成细粉后，使细粉在氯化钠溶液中溶胀，形成沉淀；(2)摇匀，加有机溶剂稀释定容；(3)离心，取上清液，过滤。2.根据权利要求1所述的甲磺酸二氢麦角碱缓释片有关物质检测的前处理方法，其特征在于，所述步骤(1)中细粉在氯化钠溶液中溶胀并形成沉淀时间为2-10h。3.根据权利要求1所述的甲磺酸二氢麦角碱缓释片有关物质检测的前处理方法，其特征在于，所述步骤(1)中氯化钠溶液的浓度为1％-20％。4.根据权利要求1所述的甲磺酸二氢麦角碱缓释片有关物质检测的前处理方法，其特征在于，所述步骤(1)中氯化钠溶液浓度优选范围为2％-5％。5.根据权利要求1所述的甲磺酸二氢麦角碱缓释片有关物质检测的前处理方法，其特征在于，所述步骤(2)中摇匀采用旋涡混合器，转速2500-3000rpm，时间5-10min。6.根据权利要求1所述的甲磺酸二氢麦角碱缓释片有关物质检测的前处理方法，其特征在于，所述步骤(2)中有机溶剂为甲醇、乙腈和乙醇中的一种。7.根据权利要求1所述的甲磺酸二氢麦角碱缓释片有关物质检测的前处理方法，其特征在于，所述步骤(2)中有机溶剂优选为乙腈。8.根据权利要求1所述的甲磺酸二氢麦角碱缓释片有关物质检测的前处理方法，其特征在于，所述步骤(3)中离心的离心力为10000-15000g。

技术总结
本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及一种甲磺酸二氢麦角碱缓释片有关物质检测的前处理方法，包含以下步骤：(1)将甲磺酸二氢麦角碱缓释片研成细粉后，使细粉在氯化钠溶液中溶胀，形成沉淀；(2)摇匀，加有机溶剂稀释定容；(3)离心，取上清液，过滤。本发明可使供试品溶液黏度有效降低，便于后续离心和过滤处理步骤。本方法有效解决了含辅料卡波姆的甲磺酸二氢麦角碱缓释片检测时，其在溶剂系统中不易分散均匀的问题，灵敏度高，重复性好，可用于含辅料卡波姆的甲磺酸二氢麦角碱缓释片的质量控制。制。制。


技术研发人员：张发成 万竹青 吴保祥
受保护的技术使用者：宝利化（南京）制药有限公司
技术研发日：2023.06.27
技术公布日：2023/8/9