STF-083010在制备防治主动脉夹层药物中的应用

stf-083010在制备防治主动脉夹层药物中的应用
技术领域
1.本发明属于医药技术领域，具体涉及化合物stf-083010(c
15h11
no3s2)在制备防治主动脉夹层药物中的应用。


背景技术：

2.主动脉夹层(aortic dissection，ad)是一类致死率极高的急危重血管疾病，通常发病隐匿，若不及时干预，死亡率高达80％以上。患者常以剧烈胸痛为首发症状，是胸痛中心重点关注的高危病种之一，其主要危险因素包括年龄、高血压、血脂异常及动脉粥样硬化等，目前中国正快速步入老龄化社会，ad发病率也呈逐年升高态势。主动脉夹层病变主要由于血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，vsmcs)收缩功能障碍，诱导表型转化和炎症反应发生，同时主动脉壁结构蛋白失衡，导致主动脉壁基质广泛降解、弹性变弱，进而无法承受较高的腔内压力，导致主动脉壁扩张(主动脉瘤)或内膜撕裂(主动脉夹层)发生，严重者可致动脉瘤与夹层破裂，造成死亡。目前，临床上尚缺乏有效预防和治疗ad的药物，唯一的治疗方案仍是手术干预，如微创血管内支架进行手术修复，但患者在术后仍面临主动脉扩大和动脉瘤复发等问题，严重影响患者预后。因此，寻找ad发生的关键作用靶点并开发有效药物一直是医学界关注的重要课题，具有重要的科学意义和临床应用价值。
3.化合物stf-083010是一种ire1α特异性抑制剂，在发生内质网应激后，stf-083010抑制ire1内切核酸酶活性，而不影响其激酶活性。用在人类多发性骨髓瘤异种移植模型中stf-083010显示出显著的抗骨髓瘤活性，且stf-083010(50μm)抑制p53缺陷人癌细胞的生长。此外，在动脉粥样硬化小鼠模型中stf-083010可减少斑块面积。stf-083010也可减轻四氯化碳诱发的小鼠肝损伤和肝纤维化。但stf-083010对主动脉夹层的作用未见有报道。


技术实现要素：

4.本发明的目的是提供stf-083010在制备防治主动脉夹层疾病药物中的应用。
5.本发明所述的stf-083010的分子式为：c
15h11
no3s2(可市购)。
6.本发明首先研究stf-083010在心血管方面的新型药理作用,本发明通过il-1β诱导vsmcs炎症模型观察到stf-083010对vsmcs炎症表型分子具有抑制作用，从而起到预防主动脉夹层疾病的发生。通过western blot和rt-qpcr检测stf-083010对il-1β诱导的vsmcs炎症和焦亡的作用，结果显示stf-083010抑制il-1β诱导的vsmcs炎症和焦亡发生；利用bapn(1.0g/kg/day)溶于饮用水中连续饮用28天诱导小鼠主动脉夹层模型，并给予一周两次的stf-083010治疗，结果显示stf-083010可显著抑制bapn诱导的血管壁弹性纤维降解和主动脉壁内膜破裂，并抑制血管炎症及细胞焦亡标志物的蛋白/mrna水平。
7.从而可知，stf-083010可用于制备防治主动脉夹层疾病药物。
8.具体地，所述stf-083010在体内和体外通过抑制血管炎症相关蛋白表达，发挥抗主动脉夹层发生的作用。
9.进一步地，所述stf-083010通过在体外抑制白细胞介素1β(il-1β)诱导的血管炎
症及在体内抑制主动脉夹层发生发进展，实现对主动脉夹层疾病的治疗。
附图说明
10.图1：stf-083010对il-1β诱导的vsmcs炎症和焦亡的影响。其中，(a)利用western blot方法检测炎症因子(cox-2，il-6)、金属基质蛋白酶mmp9和细胞焦亡标志物gsdmd蛋白水平；(b)用rt-qpcr方法检测大鼠主动脉平滑肌细胞中cox-2、il-6、mmp9基因的表达情况；control：正常对照组，il-1β：模型组，il-1β+stf-083010：模型+stf-083010(50μm)组。*p《0.05,**p《0.01,***p《0.001。
11.图2：stf-083010对bapn诱导的血管壁弹性纤维降解和主动脉壁内膜破裂的影响。其中，(a)各组血管形态对比；(b)h&e染色观察各组血管横截面变化。sham：假手术组；bapn+vehicle：主动脉夹层模型组；bapn+stf-083010：主动脉夹层模型+stf-083010给药组，30mg/kg/次，一周两次；zoom：放大倍数。
12.图3：stf-083010对bapn诱导的血管炎症和细胞焦亡的影响。其中，(a)利用western blot方法检测炎症因子(cox-2、il-6、inos、vcam-1)、金属基质蛋白酶mmp9和细胞焦亡标志物gsdmd蛋白水平；(b)用rt-qpcr方法检测大鼠主动脉平滑肌细胞中cox-2、il-6、α-sma基因的表达情况；sham：假手术组；bapn+vehicle：主动脉夹层模型组；bapn+stf-083010：主动脉夹层模型+stf-083010给药组，30mg/kg/次，一周两次。*p《0.05,**p《0.01,***p《0.001。
具体实施方式
13.本发明通过建立体外il-1β诱导的血管炎症和体内β-氨基丙腈(β-aminopropionitrile，bapn)诱导的主动脉夹层动物模型实验研究，结果显示，所述的stf-083010通过抑制血管炎症相关基因/蛋白表达水平，减少细胞焦亡发生，明确stf-083010抑制血管炎症的作用。体内结果表明stf-083010可显著抑制主动脉夹层发生，并缓解血管壁弹性纤维降解和主动脉壁内膜破裂。此外，stf-083010可降低炎症表型标志物(vcam-1、inos、il-6、cox-2等)、金属基质蛋白酶mmp9、和细胞焦亡标志物gsdmd蛋白水平，与此同时改善bapn诱导的il-6、cox-2基因表达变化，证明所述的stf-083010具有明显的抗炎和延缓主动脉夹层发生的作用，可制备防治主动脉夹层的药物。
14.实验例1.stf-083010抑制il-1β诱导的vsmcs炎症和焦亡发生
15.大鼠原代平滑肌细胞培养于含10％胎牛血清的dmem培养基中，置于37℃，5％ co2孵箱中培养，当细胞汇合度达80-90％时传代。设置正常对照组(control，无药物干预，不加il-1β)，模型组(model，无药物干预，10ng/μl il-1β刺激48h),stf-083010组(stf-083010，50μm，提前4h预加后以il-1β刺激)。il-1β(10ng/μl，48h)培养诱导大鼠主动脉平滑肌细胞炎症模型，提取细胞总蛋白和总mrna，采用western blot测定炎症相关表型分子包括cox-2、il-6、mmp9及细胞焦亡标志物gsdmd的蛋白表达，并采用rt-qpcr实验测定炎症相关表型分子如cox-2，il-6，mmp9的mrna表达变化。结果参见图1所示，显示stf-083010能抑制血管炎症因子cox-2，il-6，mmp9及gsdmd的蛋白表达，与此同时对血管炎症因子cox-2、il-6、mmp9的mrna水平也有显著的抑制作用，表明所述的stf-083010对il-1β诱导的原代平滑肌细胞炎症反应具有保护作用。
16.实验例2.stf-083010抑制血管壁弹性纤维降解和主动脉壁内膜破裂
17.3周龄野生型c57bl/6j小鼠，采用β-氨基丙腈(β-aminopropionitrile monofumarate，bapn)(a3134，sigma-aldrich)构建主动脉夹层小鼠模型。β-氨基丙腈(bapn)，是一种赖氨酰氧化酶抑制剂，通过抑制胶原和弹性蛋白的交联，破坏动脉壁结构的完整性，研究者报道持续给予c57bl/6j小鼠bapn饮水可引起动脉中层变性，导致ad和动脉瘤形成。将bapn(1.0g/kg/day)溶于饮用水中连续饮用4周诱导形成主动脉夹层模型。stf-083010以适当溶剂(10％ dmso
→
40％ peg300
→
5％ tween-80
→
45％生理盐水)溶解，将小鼠随机分为假手术组(sham，n＝5)，模型组(bapn，n＝10)，模型+stf-083010组(bapn+stf-083010,30mg/kg/次，1周两次，n＝5)。28天后，取材主动脉并进行血管形态拍照，一部分采用4％多聚甲醛固定，包埋做石蜡切片，h&e染色观察血管形态；另一部分于液氮中保存，用于后续western blot和rt-qpcr检测；结果见图2所示。
18.血管形态拍照结果显示，bapn可显著诱导主动脉弓及升主动脉部分膨大，给予stf-083010后可改善膨大状态。此外h&e结果显示，模型组bapn导致血管壁弹性纤维降解，主动脉壁内膜破裂，stf-083010可显著抑制bapn诱导的血管壁弹性纤维降解和主动脉壁内膜破裂。
19.实验例3.stf-083010抑制bapn诱导的血管炎症及细胞焦亡发生
20.利用上述冻存血管进行western blot和rt-qpcr检测，观察血管炎症相关因子如cox-2、il-6、mmp9等及细胞焦亡标志物gsdmd的表达变化。结果参见图2所示，结果显示，与模型组相比，stf-083010可显著降低血管炎症相关因子如cox-2、il-6、mmp9、inos、vcam-1及细胞焦亡标志物gsdmd的蛋白表达，且stf-083010可降低血管炎症相关因子如cox-2、il-6的mrna水平。

技术特征：
1.stf-083010在制备防治主动脉夹层药物中的用途，所述stf-083010的分子式为：c
15
h
11
no3s2。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述stf-083010在体内和体外通过抑制血管炎症相关蛋白表达，发挥抗主动脉夹层发生的作用。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述stf-083010通过在体外抑制白细胞介素1β（il-1β）诱导的血管炎症及在体内抑制主动脉夹层发生发进展，实现对主动脉夹层疾病的治疗。

技术总结
本发明属于医药技术领域，具体为化合物STF-083010在制备防治主动脉夹层药物中的应用。本发明通过建立体外IL-1β诱导的血管炎症和体内β-氨基丙腈诱导的主动脉夹层动物模型实验研究，结果显示该化合物通过抑制血管炎症相关基因/蛋白表达水平，减少细胞焦亡发生，明确其抑制血管炎症的作用；该化合物可显著抑制主动脉夹层发生，并缓解血管壁弹性纤维降解和主动脉壁内膜破裂。此外，该化合物可降低有关炎症表型标志物、金属基质蛋白酶MMP9、和细胞焦亡标志物GSDMD蛋白水平，同时改善BAPN诱导的炎症因子IL-6、COX-2基因表达变化，证明该化合物具有明显的抗炎和延缓主动脉夹层发生的作用，可制备防治主动脉夹层的药物。可制备防治主动脉夹层的药物。可制备防治主动脉夹层的药物。


技术研发人员：杨迪 孟晨 苏海璧
受保护的技术使用者：复旦大学
技术研发日：2023.06.08
技术公布日：2023/8/9