一种感知细菌的多肽及其应用

1.本发明涉及细菌检测技术领域，特别是涉及一种感知细菌的多肽及其应用。


背景技术：

2.机体为抵御病原菌感染，形成了一系列应对策略，如细胞通过自噬、内吞直接清除病原菌，启动先天性免疫通路抵抗病原菌的增殖，还可以在初次感染后或接种对应疫苗后通过获得性免疫生成抗体抵御再次感染。但不管何种应对方式，都需要机体快速的感知细菌的存在。
3.如何快速便捷的检测细菌感染一直是临床及生产应用中需要解决的问题。目前的检测方法主要包括：鲎试剂法，涂片检测法，细菌培养法，血清学检测法，pcr检测法，二代测序法等。其中最灵敏快速的方法是鲎试剂法，但此方法需要利用保护动物鲎的血液制剂，价格昂贵，而且不利于频危动物的保护，亟需替代方案。其他方法也存在检测时间长，价格高，步骤多等问题。


技术实现要素：

4.为了解决上述问题，本发明提供了一种感知细菌的多肽及其应用。本发明提供的多肽可以被细菌降解，从而可以感知是否发生细菌感染，具有操作简便、检测时间短和价格低的优势。
5.为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
6.本发明提供了一种感知细菌的多肽，所述多肽的氨基酸序列如seq id no.1所示。
7.本发明还提供了上述技术方案所述的多肽或含有上述技术方案所述的多肽的融合蛋白在感知细菌中的应用。
8.优选的，所述融合蛋白包括上述技术方案所述的多肽和细胞周期调控蛋白。
9.优选的，所述细胞周期调控蛋白包括p21蛋白和p27蛋白。
10.优选的，所述细菌为革兰氏阴性菌。
11.优选的，所述革兰氏阴性菌包括大肠杆菌(escherichiacoli)dh5α、大肠杆菌bl21(de3)和绿脓杆菌(pseudomonasaeruginosa)pao1中的一种或多种。
12.有益效果：
13.本发明提供了一种感知细菌的多肽，所述多肽的氨基酸序列如seq id no.1所示。本发明提供的多肽可以直接感受细菌，即细菌蛋白或某些组分可以通过识别该短肽进而降解含有该短肽的蛋白，将该多肽与细胞周期调控蛋白用于考马斯亮蓝染色或免疫印记实验指示蛋白强度变化，如目的条带强度显著降低或消失则提示细菌感染；另外，将该多肽与gfp组成的融合蛋白或与荧光素酶组成的融合蛋白用于分光光度计测定强度变化，如荧光强度显著降低则提示细菌感染；或者将该多肽与细胞色素c组成的融合蛋白可直接肉眼观察颜色差异变化，如紫色消失或显著减弱则提示细菌感染，具有操作简便、检测时间短和价格低的优势。
附图说明
14.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
15.图1为人ocel1蛋白与小鼠ocel1蛋白全长氨基酸序列比对结果；
16.图2为不同长度的ocel1原核表达质粒的插入片段的氨基酸长度示意图；
17.图3为实施例1的考马斯亮蓝染色实验结果；
18.图4为实施例2～5的westernblot实验结果；
19.图5为实施例6中不同原核表达载体质粒的插入片段的氨基酸长度示意图；
20.图6为实施例6的考马斯亮蓝染色实验结果；
21.图7为实施例7的westernblot实验结果。
具体实施方式
22.本发明提供了一种感知细菌的多肽，所述多肽的氨基酸序列如seq id no.1所示，具体如seq id no.1所示：ppgpgpp。
23.本发明提供的多肽可以被细菌识别，从而可以感知是否发生细菌感染。
24.本发明还提供了上述技术方案所述的多肽或含有上述技术方案所述的多肽的融合蛋白在感知细菌中的应用。本发明所述的感知细菌优选可以是以非诊断为目的，是检测是否有细菌的一个中间结果。本发明通过实验证明了细菌蛋白或细菌中的某些组分可以通过识别本发明所述的7肽ppgpgpp，进而降解含有该7肽的蛋白，利用该特性可以检测待测样本是否有细菌，即感知细菌。
25.在本发明中，所述融合蛋白包括上述技术方案所述的多肽和细胞周期调控蛋白；所述细胞周期调控蛋白优选包括p21蛋白和p27蛋白。
26.在本发明中，所述细菌优选包括革兰氏阴性菌；所述革兰氏阴性菌优选包括大肠杆菌(escherichiacoli)dh5α、大肠杆菌bl21(de3)和绿脓杆菌(pseudomonasaeruginosa)pao1中的一种或多种。
27.本发明所述的多肽ppgpgpp影响ocel1蛋白、p21蛋白或p27蛋白的表达，且与细菌感染剂量和感染时间均呈正相关，利用该多肽可被细菌降解的特性，可以感知是否发生细菌感染，将该多肽与细胞周期调控蛋白用于考马斯亮蓝染色或免疫印记实验指示蛋白强度变化，如目的条带强度显著降低或消失则提示细菌感染；另外，将该多肽与gfp组成的融合蛋白或与荧光素酶组成的融合蛋白用于分光光度计测定强度变化，如荧光强度显著降低则提示细菌感染；或者将该多肽与细胞色素c组成的融合蛋白可直接肉眼观察颜色差异变化，如紫色消失或显著减弱则提示细菌感染，具有操作简便、检测时间短和价格低的优势。
28.为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的一种感知细菌的多肽及其应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
29.实施例1
30.本发明从ncbi数据库中检索并下载人(human)ocel1与小鼠(mouse)ocel1全长氨基酸序列，并利用序列比对软件dnaman对两者氨基酸进行序列比对。比对结果如图1所示，橙色为两者一致的氨基酸，绿色为两者不同的氨基酸；红框区表明人与小鼠拥有较为保守的occludlin结构域，但该蛋白在两物种n端并无明显保守性；且发现其第76～82氨基酸即
id no.18；
53.δ76-82aa-r：5
’‑
tcggggcgccagtccctgcaggtgagtatgcaggtgcccccggga-3’，seq id no.19；
54.ocel1(δ76-82aa)原核表达质粒插入片段扩增步骤如下：以ocel1-f与δ76-82aa-r为正反向引物扩增获得pcr产物，经胶回收后标记回收产物为pcr3；以76-264aa-f与ocel1-r为正反向引物扩增获得pcr产物，经胶回收后标记回收产物为pcr4；在pcr3和pcr4以1：1的体积比混合后，取3μl为模板，以ocel1-f与ocel1-r为正反向引物，进行pcr反应获得pcr产物。
55.每个pcr反应为80μl反应体系，具体如下：a4pcrmix(购自gimmico，货号为yckj-ksm-jx-003036)73μl、正向引物3μl、反向引物3μl和模板2μl；
56.每个pcr反应的程序为：98℃预变性2min；98℃变性10s，60℃退火20s，72℃延伸15s，共30个循环；72℃终延伸5min；
57.pcr结束后经dna琼脂糖胶电泳鉴定，切取目的条带并利用胶回收试剂盒进行胶回收，最终洗脱体积为40μl，再加入ecori和xhoi限制性内切酶及酶切buffer37℃酶切2小时，经dna琼脂糖胶电泳鉴定后，切取目的条带并利用胶回收试剂盒进行胶回收，最终洗脱体积为20μl；
58.3)连接转化：按插入片段3μl、载体1μl、t4连接酶0.5μl和连接酶buffer0.5μl构建连接体系，22℃连接1小时，再取50μldh5α菌株为转化受体，进行转化，得到转化后的菌株；
59.4)质粒鉴定：挑取转化后的单克隆菌株到含5mllb液体培养基的15ml离心管中，37℃摇床培养12小时后按质粒小提试剂盒(购自tiangen)说明书进行质粒提取，最后吸取5μl质粒溶液送测序公司进行测序，测序结果经序列比对后完全正确的质粒即为所需质粒，做好标记进行后续试验。
60.将上述构建的质粒分别转化进入大肠杆菌bl21(de3)菌株，细菌培养皿置于37℃培养箱培养过夜，挑取转化后的大肠杆菌bl21(de3)单克隆菌株接种至含5mllb液体培养基的15ml离心管中，37℃摇床培养4小时，加入终浓度为1mm的蛋白表达诱导剂iptg，继续于37℃摇床诱导2小时，记为+iptg组；同时设置未加蛋白表达诱导剂iptg的对照组，记为-iptg组。
61.分别取+iptg组和-iptg组各1ml菌液于1.5mlep管中，4℃离心1min收集菌体，离心的转速为10000rpm/min，弃上清后用0.1mlpbs(ph值为7.4)溶液重悬沉淀，加入等体积的2
×
sds-page蛋白上样缓冲液和5％体积的β-巯基乙醇，沸水浴10min立即置于冰上，4℃离心1min(离心的转速为10000rpm/min)，点样进行sds-page电泳(条件为200v，45min)，考马斯亮蓝(g250)溶液室温孵育染色1小时，脱色液洗3次，每次10min，最后用超纯水漂洗后拍照。结果见图3。
62.由图3可知，含有7肽ppgpgpp的原核表达载体，如ocel1(67-264aa)、ocel1(1-82aa)、ocel1(64-264aa)和ocel1，ocel1蛋白就不能表达。而未含有7肽ppgpgpp的表达载体，如ocel1(1-66aa)、ocel1(δ67-82aa)、ocel1(83-264aa)、ocel1(δ76-82aa)和ocel1，ocel1蛋白便可以表达。可见，7肽ppgpgpp将影响ocel1蛋白在大肠杆菌bl21(de3)中的表达。
63.实施例2
64.1、过表达质粒pcmv-ha-ocel1的构建：
65.1)载体准备：以ecori和kpni限制性内切酶37℃酶切1μgpcmv-ha载体(真核表达载体)2小时，经dna琼脂糖胶电泳鉴定后，切取目的条带并利用胶回收试剂盒(购自bioflux)进行胶回收，最终洗脱体积为30μl；
66.2)以实施例1中全长的人的ocel1为模板扩增并回收得到的插入片段；
67.引物信息如下：ha-ocel1-f：5
’‑
atatgaattcggatgcacaacccggacggaagt-3’，seq id no.20；
68.ha-ocel1-r：5
’‑
atatggtaccttagaagtacacggagccctc-3’，seq id no.21；
69.3)连接转化：按插入片段3μl、载体1μl、t4连接酶0.5μl和连接酶buffer0.5μl构建连接体系，22℃连接1小时，再取50μldh5α菌株为转化受体，进行转化，得到转化后的菌株；
70.4)质粒鉴定：挑取转化后的单克隆菌株到含5mllb液体培养基的15ml离心管中，37℃摇床培养12小时后按质粒小提试剂盒(购自tiangen)说明书进行质粒提取，最后吸取5μl质粒溶液送测序公司进行测序，测序结果经序列比对后完全正确的质粒即为所需过表达质粒pcmv-ha-ocel1，做好标记进行后续试验；
71.2、在6孔板中每孔加入含10％fbs的dmem培养基和200μl的hct116细胞，所述hct116细胞浓度为1
×
104个/μl；待细胞完全贴壁且细胞密度在70％时进行转染，转染量为每孔2μg过表达质粒pcmv-ha-ocel1；
72.3、转染24小时后去除培养基，胰酶消化后离心收集贴壁细胞至1.5mlep管中，加入200μlpbs缓冲液超声裂解细胞，得到细胞裂解液；每孔细胞裂解液分别与0μl(记为-)、2μl(记为+)、5μl(记为++)、10μl(记为+++)、20μl(记为++++)和50μl(记为+++++)大肠杆菌bl21(de3)超声裂解物37℃共孵育1小时，随即进行免疫印迹实验，结果见图4中的c。
73.由图4中的c可知，得到细胞裂解液后ocel1蛋白能够正常表达，而加入大肠杆菌裂解物后细胞裂解液中蛋白含量降低，说明大肠杆菌bl21能够降解已表达的ocel1蛋白，即大肠杆菌裂解物呈剂量依赖性降低ocel1蛋白水平。
74.实施例3
75.将大肠杆菌菌株dh5α或bl21(de3)感染悬浮细胞thp1后收集并裂解细胞后进行免疫印迹实验，具体实验过程如下：
76.1、在6孔板中每孔加入含10％fbs的1640培养基和200μlthp1细胞，所述thp1细胞浓度为1
×
104个/μl；
77.2、接种细胞24小时后，接种moi＝1的大肠杆菌，并分别在37℃处理0小时、12小时、24小时、36小时后，去除培养基，并用pbs再次漂洗彻底清除残留培养基及细菌；
78.4、裂解细胞，收取细胞裂解液，4℃离心15min(离心的转速为12000rpm/min)，取50μl上清，加入等体积2
×
sds-page蛋白上样缓冲液和5％体积的β-巯基乙醇，沸水浴5min立即置于冰上，4℃离心1min(离心的转速为10000rpm/min)，点样进行sds-page电泳(条件为200v，45min)，电泳结束后，安装转移系统，负极到正极方向依次放置厚滤纸、蛋白胶、pvdf膜、厚滤纸(注意：胶和膜之间不要有气泡)，使用蛋白质半干转系统，以25v电压恒压转膜25分钟，将蛋白转移至孔径为0.45μm的pvdf膜上；
79.5、转完膜后，小心将膜取出，在甲醇中把膜浸湿，放在干净滤纸上自然干燥；干燥完成后，用记号笔标记蛋白marker的位置，根据蛋白大小裁剪膜；封闭之前再将膜在甲醇中
浸湿，然后将膜放于5％脱脂奶粉室温封闭1小时；
80.6、加入以稀释过的ocel1一抗(购自sigma-aldrich,货号为hpa042070，稀释比例为1：1000)和α-tubulin一抗(购自abclonal公司，货号为ac012，稀释比例为1:10000)，室温孵育2小时；孵育完成后，用含5％脱脂奶粉的tbst洗膜3次，每次5分钟；以1:10000稀释比例加入hrp标记的二抗，室温孵育2小时；孵育完成后，用含5％脱脂奶粉的tbst洗膜3次，每次5分钟，最后用未加奶粉和吐温20的tbs洗涤3次；
81.7、采用millipore公司的hrp显色试剂盒进行显色，用凝胶扫描分析系统(las4000miniluminescentimageanalyzer)扫描存图，结果见图4中的d。
82.由图4中的d可知，大肠杆菌菌株dh5α或bl21(de3)感染hek293t细胞后，显著降解了内源的ocel1蛋白，并随着处理时间的延长，降解内源的ocel1蛋白的程度越明显。
83.实施例4
84.为了探究其他革兰氏阴性菌是否也有类似效应，本发明选取条件致病菌绿脓杆菌pao1菌株作为实验材料，实验过程与实施例3相似，区别在于，步骤3为：转染18小时后，接种moi＝1的绿胧杆菌pao1，并分别在37℃处理0小时、3小时、6小时、9小时后，去除培养基，并用pbs再次漂洗彻底清除残留培养基及细菌。结果见图4中的e。
85.结果显示pao1感染thp1细胞同样显著降解了内源的ocel1蛋白，并随着处理时间的延长，pao1降解内源的ocel1蛋白的程度越明显。
86.实施例5
87.本发明选取条件致病菌绿胧杆菌pao1菌株作为实验材料，实验过程与实施例3相似，区别在于，步骤3为：转染18小时后，分别接种moi＝0、1、2、5和10的绿脓杆菌pao1，并在37℃处理6小时后，去除培养基，并用pbs再次漂洗彻底清除残留培养基及细菌。结果见图4中的f，其中从左到右分别为moi＝0、1、2、5和10。
88.结果显示pao1感染thp1细胞同样显著降解了内源的ocel1蛋白，并随着感染剂量的增加，pao1降解内源的ocel1蛋白的程度越明显。
89.结合实施例2～5的结果可推知，7肽ppgpgpp可以直接感受细菌，即细菌蛋白或某些组分可以通过识别该短肽进而降解含有该短肽的蛋白。
90.实施例6
91.1、如图5所示，以pgex-4t-1为原核表达载体质粒，构建7肽ppgpgpp分别与小鼠ocel1蛋白，细胞周期调控蛋白p21和细胞周期调控蛋白p27的融合表达质粒，具体为：pgex-4t-1-ocel1-7aa-n，pgex-4t-1-ocel1-7aa-c，pgex-4t-1-p21-7aa-n，pgex-4t-1-p21-7aa-c，pgex-4t-1-p27-7aa-n和pgex-4t-1-p27-7aa-c；其中7aa-n表示ppgpgpp多肽位于蛋白的n端，7aa-c表示ppgpgpp多肽位于蛋白的c端。同时构建对应的ocel1，p21和p27野生型表达质粒，分别记为：pgex-4t-1-ocel1-wt，pgex-4t-1-p21-wt和pgex-4t-1-p27-wt。质粒构建过程如下：
92.1)载体准备：同实施例1中的步骤1)；
93.2)插入片段准备：根据插入片段的不同，设计对应的pcr扩增引物，分别在正向及反向引物上加上ecori和xhoi限制性内切酶酶切位点序列，序列信息如下所示：
94.ocel1-wt-f：seq id no.4所示；
95.ocel1-wt-r：seq id no.5所示；
96.p21-wt-f：5
’‑
atatgaattcatgtcagaaccggctggggatgtc-3’，seq id no.22；
97.p21-wt-r：5
’‑
atatctcgagttagggcttcctcttggagaagat-3’，seq id no.23；
98.p27-wt-f：5
’‑
atatgaattcatgtcaaacgtgcgagtgtctaac-3’，seq id no.24；
99.p27-wt-r：5
’‑
atatctcgagttacgtttgacgtcttctgaggcc-3’，seq id no.25；
100.ocel1-7aa-n：5
’‑
atatgaattcatgcctcctgggcctgggcccccgatgcaa atacatgcaggtcccgcc-3’，seq id no.26；
101.ocel1-7aa-c：5
’‑
atatctcgagttcacgggggcccaggcccaggagggaa gtacacagagtcttc-3’，seq id no.27；
102.p21-7aa-n：5
’‑
atatgaattcatgcctcctgggcctgggcccccgatgtcaga accggctggggat-3’，seq id no.28；
103.p21-7aa-c：5
’‑
atatctcgagttacgggggcccaggcccaggagggggcttc ctcttggagaagat-3’，seq id no.29；
104.p27-7aa-n：5
’‑
atatgaattcatgcctcctgggcctgggcccccgatgtcaaa cgtgcgagtgtctaac-3’，seq id no.30；
105.p27-7aa-c：5
’‑
atatctcgagttacgggggcccaggcccaggaggcgtttga cgtcttctgaggcc-3’，seq id no.31；
106.小鼠ocel1系列插入片段模板为小鼠胚胎成纤维细胞(mef)的cdna，p21及p27相关插入片段的模板均为hek293t细胞的cdna，每个pcr反应为80μl反应体系，具体如下：a4pcrmix73μl、正向引物3μl、反向引物3μl和模板2μl；
107.每个pcr反应的程序为：98℃预变性2min；98℃变性10s，60℃退火20s，72℃延伸15s，共30个循环；72℃终延伸5min；
108.pcr结束后经dna琼脂糖胶电泳鉴定，切取目的条带并利用胶回收试剂盒进行胶回收，最终洗脱体积为40μl，再加入ecori和xhoi限制性内切酶及酶切buffer37℃酶切2小时，经dna琼脂糖胶电泳鉴定后，切取目的条带并利用胶回收试剂盒进行胶回收，最终洗脱体积为20μl；
109.3)连接转化：方法同实施例1中的步骤3)；
110.4)质粒鉴定：方法同实施例1中的步骤4)。
111.2、将上述构建的质粒分别转化进入大肠杆菌bl21(de3)菌株，细菌培养皿置于37℃培养箱培养过夜，挑取转化后的大肠杆菌bl21(de3)单克隆菌株接种至含5mllb液体培养基的15ml离心管中，37℃摇床培养4小时，加入终浓度为1mm的蛋白表达诱导剂iptg，继续于37℃摇床诱导2小时，记为+iptg组；同时设置未加蛋白表达诱导剂iptg的对照组，记为-iptg组。
112.3、分别取+iptg组和-iptg组各1ml菌液于1.5mlep管中，4℃离心1min收集菌体，离心的转速为10000rpm/min，弃上清后用0.1mlpbs(ph值为7.4)溶液重悬沉淀，加入等体积的2
×
sds-page蛋白上样缓冲液和5％体积的β-巯基乙醇，沸水浴10min立即置于冰上，4℃离心1min(离心的转速为10000rpm/min)，点样进行sds-page电泳(条件为200v，45min)，考马斯亮蓝(g250)溶液室温孵育染色1小时，脱色液洗3次，每次10min，超纯水漂洗后拍照。结果见图6。
113.由图6可知，ocel1，p21，p27野生型表达质粒均可以表达，无论是将ppgpgpp短肽置
于融合蛋白n端还是c端，均不能在大肠杆菌中表达，可见，细菌可通过识别ppgpgpp7肽影响ocel1蛋白、p21蛋白或p27蛋白的表达。
114.实施例7
115.1、以真核表达质粒pcmv-ha为载体，构建真核人ocel1野生型(记为ha-ocel1-wt)及缺失ppgpgpp7肽蛋白表达质粒(记为ha-ocel1-δ7aa)。ha-ocel1-wt质粒构建过程同实施例2中的步骤1；ha-ocel1-δ7aa质粒构建过程与实施例2中的步骤1相似，区别在于，步骤2)中插入片段的扩增模板为实施例1中的ocel1(δ76-82aa)原核表达质粒；
116.引物信息如下：ha-ocel1-f，seq id no.20所示；ha-ocel1-r，seq id no.25所示；
117.2、在6孔板中每孔加入1.5μl的含10％fbs的dmem培养基和200μl的hek293t细胞，所述hek293t细胞浓度为1
×
104个/μl；待细胞完全贴壁且细胞密度在70％时进行转染，转染量为每孔2μg过表达质粒pcmv-ha-ocel1，每种质粒各转4孔细胞。
118.3、转染18小时后，接种moi＝1的大肠杆菌bl21(de3)，并分别处理0、2、4、6小时后，去除培养并用pbs再次漂洗彻底清除残留培养基及细菌。
119.步骤4和5同实施例3；
120.6、加入以稀释过的ha一抗(购自cellsignalingtechnology公司，货号为3724，稀释比例为1：2000)和α-tubulin一抗(购自abclonal公司，货号为ac012，稀释比例为1:10000)，室温孵育2小时；孵育完成后，用含5％脱脂奶粉的tbst洗膜3次，每次5分钟；以1:10000稀释比例加入hrp标记的二抗，室温孵育2小时；孵育完成后，用含5％脱脂奶粉的tbst洗膜3次，每次5分钟，最后用未加奶粉和吐温20的tbs洗涤3次；
121.7、采用millipore公司的hrp显色试剂盒进行显色，用凝胶扫描分析系统(las4000miniluminescentimageanalyzer)扫描存图。结果如图7所示。
122.由图7可知，转染18小时后的hek293t细胞，ha-ocel1融合蛋白能够正常表达，而接种大肠杆菌后，hek293t细胞表达的ha-ocel1融合蛋白含量将降低，说明大肠杆菌能够降解已表达的ha-ocel1融合蛋白；一旦去除ppgpgpp短肽后，大肠杆菌将不能降解已表达的ha-ocel1-δ7aa融合蛋白，所以蛋白保持稳定存在，即说明ppgpgpp短肽可以感知细菌，包含该短肽的ha-ocel1-wt蛋白迅速被降解，一旦去除ppgpgpp短肽后，ha-ocel1-δ7aa无法感知细菌，所以蛋白保持稳定存在。
123.综上所述，本发明提供的多肽可以被细菌识别并降解含该多肽蛋白，从而可以感知是否发生细菌感染，具有操作简便、检测时间短和价格低的优势。
124.尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

技术特征：
1.一种感知细菌的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如seq id no.1所示。2.权利要求1所述的多肽或含有权利要求1所述的多肽的融合蛋白在感知细菌中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述融合蛋白包括权利要求1所述的多肽和细胞周期调控蛋白。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述细胞周期调控蛋白包括p21蛋白和p27蛋白。5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述细菌为革兰氏阴性菌。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述革兰氏阴性菌包括大肠杆菌(escherichiacoli)dh5α、大肠杆菌bl21(de3)和绿脓杆菌(pseudomonas aeruginosa)pao1中的一种或多种。

技术总结
本发明涉及细菌检测技术领域，特别是涉及一种感知细菌的多肽及其应用。本发明提供的多肽可以直接感受细菌，即细菌蛋白或某些组分可以通过识别该短肽进而降解含有该短肽的蛋白，将该多肽与细胞周期调控蛋白用于考马斯亮蓝染色或免疫印记实验指示蛋白强度变化，如目的条带强度显著降低或消失则提示细菌感染；另外，将该多肽与GFP组成的融合蛋白或与荧光素酶组成的融合蛋白用于分光光度计测定强度变化，如荧光强度显著降低则提示细菌感染；或者将该多肽与细胞色素C组成的融合蛋白可直接肉眼观察颜色差异变化，如紫色消失或显著减弱则提示细菌感染，具有操作简便、检测时间短和价格低的优势。格低的优势。格低的优势。


技术研发人员：肖武汉 王晶 李智 杜娟
受保护的技术使用者：中国科学院水生生物研究所
技术研发日：2023.05.24
技术公布日：2023/8/9