一种新型冠状病毒抗体及其在无传播风险口腔液检测中的应用

1.本技术属于病毒检测领域，尤其涉及一种新型冠状病毒的检测方法及其应用，更具体地涉及一种新型冠状病毒抗体及其在无传播风险口腔液检测中的应用。


背景技术：

2.新型冠状病毒sars-cov-2与中东呼吸综合征冠状病毒mers-cov，严重急性呼吸综合征冠状病毒sars-cov同属于冠状病毒科，冠状病毒(coronavirus，covs)为有包膜的单股正链rna病毒，其基因组长大约为26000-32000bp，是目前已知的最大的rna病毒。新型冠状病毒感染疑似病例igm、igg 检测的血清学诊断，以及大规模新型冠状病毒疫苗接种后sars-cov-2特异性抗体检测，都需要采集血液样本进行检测，而采血具有一定的创伤性和潜在感染风险，受采者依从性差，并需要专业医护人员操作和专业的采血场所。
3.人体口腔液(oral fluids)，是唾液和口腔粘膜渗出液的混合液体，是机体抵御病原微生物感染的第一道防线。唾液主要由口腔内下颌下腺、腮腺、舌下腺三对大唾液腺分泌。口腔粘膜渗出液是指牙龈结缔组织中富含的毛细血管渗出液，因此igg、 iga、igm等成分与血液成分相近，可以实现口腔液检测新型冠状病毒抗体。国外有使用唾液进行新型冠状病毒抗体检测，检测方法主要是酶联免疫吸附方法(elisa)。其缺点是唾液含有的抗体量很少， elisa检测灵敏度、特异度较低，并且操作繁琐、耗时长，自动化程度不高。并且唾液标本采集无法进行质量控制。国外有使用唾液进行新型冠状病毒核酸检测的报道，国内有用于新型冠状病毒抗原检测的唾液采集器的实用技术（专利），以降低采样过程中的感染风险。但唾液只是一次性吐一口唾液，不能充分收集口腔里含有的病毒量，抗原及核酸检测灵敏度低；且唾液标本检测新型冠状病毒抗体灵敏度极低，达不到一份标本同时进行病原学和血清学检测的目的。而口腔液不同于唾液，可以通过刷拭牙龈收集毛细血管渗出液，可以提高检测抗体灵敏度。现阶段，有采用口腔液同时用于核酸和抗体检测（专利和国外商品化口腔液采集器产品），但商品化的采集器及专利技术的口腔液采集器在标本采集、标本处理、标本保存环节存在一定缺点。（1）市售简易口腔液口腔液采集器，样本处理操作复杂、危险性高，需要手工挤压，再反转将海绵头倒插在管帽里后离心，离心后还需再开盖吸出洗脱下来的口腔液，增加操作外溢的风险，处理效率低，不适用大规模采样。（2）现有的集口腔液洗脱和收集一体的口腔液采集器，结构冗杂，采样刷不容易从采样管中取出，现场采样操作不方便，容易污染；口腔液处理时不能进行洗脱前的震荡，震荡处理很重要，可以使洗脱液将海绵头吸附的口腔液充分冲刷松动，否则后续口腔液离心洗脱不彻底，影响检测灵敏度。（3）收集管的设计不利于口腔液的充分离心处理和长期保存。（4）大规模采集样本、大批量处理样本时，耗时、耗力，处理效率不高，且生物安全风险高。


技术实现要素：

4.本发明的目的是提供一种适用于口腔液的新型冠状病毒抗体的灵敏、高通量检测
方法。
5.首先，本发明提供一种新型冠状病毒重组抗原表位的融合蛋白，所述融合蛋白中包含s蛋白抗原表位、n蛋白抗原表位、m蛋白抗原表位、e蛋白抗原表位，并对上述优势抗原进行优化连接，形成新的融合蛋白，可以有效识别sars-cov-2原始毒株、变异毒株和各种衍生亚型。
6.进一步的，本发明提供一种用口腔液检测sars-cov-2抗体，所述抗体为利用羊驼外周血淋巴细胞建立天然单域抗体噬菌体展示库技术筛选获得的针对上述新型冠状病毒重组抗原的单域抗体。
7.进一步的，本发明提供一种针对口腔液的检测方法，克服采血的创伤性和潜在感染风险，降低医护人员感染风险，也克服了唾液检测灵敏度差的缺点。相比于传统抗体检测方法所需的血液标本采集具有一定的创伤性，本方法无创采样、安全、便捷，尤其对于老人、儿童，舒适性更高，可自行采集，有利于特殊人群的样本收集及大人群的抗体筛查。同时，一份口腔液，不仅可以检测抗体，还可以同时检测核酸和抗原，高效、节约，节省医疗资源，大大降低生物安全风险。
8.进一步的，本发明提供一种检测口腔液sars-cov-2抗体的磁微粒化学发光法，化学发光法具备高灵敏性、高度特异性，快速、准确、可自动化等特点，克服胶体金灵敏度低、无法自动化的缺点；克服elisa方法的灵敏度、特异度低、操作复杂、耗时产的缺点。并建立口腔液采集和检测的质量控制方法，克服了唾液采集无法质控的缺点。
9.磁微粒化学发光法建立：选择本发明提供的特异性重组抗原，用异硫氰酸荧光素（fitc）标记抗原，用抗fitc抗体标记磁珠，通过抗fitc抗体与fitc结合使抗原抗体复合物结合在磁珠上，在外加磁场中沉淀，去上清后清洗沉淀的复合物，加入碱性磷酸酶标记的鼠抗人igg单克隆抗体，形成“磁性颗粒-抗原-新型冠状病毒igg抗体-碱性磷酸酶标记鼠抗人igg单克隆抗体”复合物，加入底物液，碱性磷酸酶催化底物液发光，形成发光反应。采用化学发光法免疫分析仪，测定各标本管的发光值（rlu）。标本发光值与其中新型冠状病毒抗体浓度呈正相关，从而检测人口腔液标本中的新型冠状病毒igg抗体。
10.进一步的，本发明提供一种在上述方法中采用的用于新型冠状病毒抗体、核酸、抗原检测的口腔液采集器，包括采样管、转换管、滤芯、收集管、采样刷，所述转换管内有滤芯，所述采样刷包括海绵刷头、垫片和手持杆，手持杆远端有手握柄和折断刻痕；所述转换管上设有第一内螺纹，采样管上设有外螺纹，转换管通过第一内螺纹与采样管的外螺纹连接，转换管上设有第二内螺纹，收集管上设有外螺纹，转换管通过第二内螺纹与收集管的外螺纹连接。优选的，采样管中还可以含有标本处理液，可以对样品进行保存，所述标本处理液具体为：10％胎牛血清、1％庆大霉素、1％青链霉素，余量为pbs，优选的，其中还可以添加0.5％的红色染料。
11.优选的，所述采样管、转换管和收集管连接成一个密闭整体，全长不超过12cm；优选的，所述采样管的底端设计为圆形；优选的，所述海绵刷头采用无毒无害海绵材质，直径不超过采样管内径；优选的，所述转换管中的滤芯设有滤芯；优选的，所述转换管与采样管螺纹连接处为转换管内螺纹，采样管外螺纹；优选的，所述转换管与收集管螺纹连接处为转换管内螺纹，收集管外螺纹；优选的，所述收集管为实验室通用性离心管，利于样本处理和保存。
12.进一步的，本发明提供一种针对口腔液的检测试剂盒，所述试剂盒中含有搭配使用的口腔液采集器和相应的阳性对照。所述检测试剂盒同样也可以用于其他样品的检测，包括但不限于血清、血液、口腔上皮细胞、脱落细胞、口腔拭子、咽拭子等。
13.进一步的，本发明提供一种口腔液采集器、新型冠状病毒重组抗原表位的融合蛋白、针对上述新型冠状病毒重组抗原的单域抗体，在制备检测新型冠状病毒药物或者试剂中的应用。
附图说明
14.图1 本发明优选的新型冠状病毒重组抗原3-d分析模拟图图2 本发明提供的口腔液采集器结构示意图；图3 本发明提供的口腔液采集器中海绵刷的示意图其中，1.采样管，2.转换管，3.滤芯，4.收集管，5.采样刷，6.采样管外螺纹，7.转换管第一内螺纹，8.转换管第二内螺纹，9.收集管外螺纹，10.海绵刷头，11.手持杆，12.手握柄，13.刻痕，14.垫片。
具体实施方式
15.为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
16.实施例1 新型冠状病毒重组抗原的优化和单克隆抗体的制备
17.冠状病毒基因组依次编码棘突蛋白(spike protein)、包膜蛋白(envelopeprotein)、膜蛋白(membrane protein)和核衣壳蛋白(nucleocapsid)。其中棘突蛋白(spike protein，s)被认为是冠状病毒侵入细胞使用的最重要的病毒表面膜蛋白。核衣壳蛋白(n)是冠状病毒中含量最丰富的蛋白。在病毒体组装过程中，n蛋白与病毒rna结合并导致螺旋核衣壳的形成。核衣壳蛋白是一种高度免疫原性的磷蛋白，与病毒基因组复制和调节细胞信号通路有关。由于n蛋白的序列保守性和强大的免疫原性，n蛋白常被作为冠状病毒诊断检测工具。s蛋白和n蛋白具有较好的免疫原性。因此为了实现更灵敏的检测，尤其是针对口腔液的检测，分析现有病毒株（sars-cov-2isolate wuhan-hu-1、2019-ncov whu01、2019-ncov_hku-sz-002a_2020、2019-ncov_hku-sz-005b_2020、2019-ncov/japan/ai/i-004/2020、2019-ncov/japan/ky/v-029/2020、2019-ncov/japan/ty/wk-012/2020、betacov/korea/kcdc03/2020、2019-ncov/usa-wa1/2020、sars-cov-2变异毒株alpha(b.1.1.7)、beta(b.1.351)、gamma(p.1)、kappa(b.1.617.1)、delta(b.1.617.2)、omicron亚型ba.1、ba.1.1、ba.2、ba.2.12.1、ba.3、ba.4、ba.5），将上述病毒的s蛋白抗原表位、n蛋白抗原表位、m蛋白抗原表位、e蛋白抗原表位的保守优势抗原表位进行模拟分析和结构优化，并通过生物信息学手段对其连接方式进行优选，最终筛选获得新型冠状病毒重组抗原的序列：twfhsihvsgtngtkpfdnpvlpsssalhlsyltpgdsgsgssevrqiapsqtgkiadgsannaaivlqlpqgttlpkgssikdlpkhitvatsrtgsgsnsspddqigyyrratsgassnrvagdsgfaaysgglivnsvphflafvvsflpgrvknlnss（seq id no.1）.利用本单位已经成熟的利用羊驼外周血淋巴细胞建立天然单域抗体噬菌体展示库技术筛选获得针对上述新型冠状病毒重组抗原的单域抗体。
18.（1）将已建立的天然单域抗体噬菌体文库进行扩增：100
µ
l甘油菌文库加入2
×
yt培养基，od600=0.5时，加入20 moi辅助噬菌体，静置30min，离心后将沉淀用2
×
yt培养基重悬，再培养1h，再加抗生素培养16h后离心，其上清经预冷peg-nacl（1/4体积）沉淀，1ml pbs重悬即为扩增的单域抗体文库；（2）免疫管淘选：将纯化后的上述新型冠状病毒重组抗原融合蛋白（华大基因（北京）公司，带生物素标签并且纯化）50
µ
g/管包被免疫管过夜，去除包被液后洗涤3次，用2ml bsa(1% )封闭2h，pbst洗涤3次，加入100
µ
l（1）步扩增的单域抗体文库作为一抗，37℃作用2h，pbst洗涤3次，用glycine-hci(ph2.2)洗脱，洗脱液用tris-hci调节至ph 7.4，获得淘选的第一轮天然单域抗体文库；（3）将（2）步获得的第1轮天然单域抗体文库按照（1）步进行扩增，获得第1轮天然单域抗体重悬文库，然后重复（2）步免疫管淘选步骤，只是一抗加入的是100
µ
l扩增的第1轮天然单域抗体重悬文库，最后获得淘选的第2轮天然单域抗体文库；（4）将（3）步获得的第2轮天然单域抗体文库按照（1）步进行扩增，获得第2轮天然单域抗体重悬文库，然后重复（2）步免疫管淘选步骤，只是一抗加入的是100
µ
l扩增的第2轮天然单域抗体重悬文库，最后获得淘选的第3轮天然单域抗体文库。
19.（5）淘选的单个阳性克隆摇菌扩增用于抗体表达：将上述步骤淘选的第3轮天然单域抗体文库接种于2
×
yt培养基，od
600nm
=0.5时，加入20 moi辅助噬菌体，静置30min，离心后将沉淀用2
×
yt培养基重悬，再培养1h，然后涂布于含抗生素的2
×
yt平板，培养过夜，次日挑选40个单菌落接种到2
×
yt培养基中，od600=0.5时，加入20 moi辅助噬菌体，静置30min，离心后将沉淀用2
×
yt培养基重悬，再培养，并加入iptg进行诱导表达8h。
20.（6）elisa鉴定：将纯化后的上述新型冠状病毒重组抗原融合蛋白（华大基因（北京）公司，带生物素标签并且纯化、浓度1ng/
µ
l）100
µ
l/孔包被elisa板过夜，去除包被液后洗涤3次，用200
µ
l/孔 bsa(3% )封闭2h，pbst洗涤3次，加入100
µ
l/孔 （1）步分别扩增的单域抗体文库作为一抗（文库构建载体带m13），37℃作用2h，pbst洗涤3次，二抗加入m13-hrp，终止后检测od450nm值，结果判读：比对照组od450nm值高出3倍判为阳性。
21.（7）将经elisa检测为阳性的克隆对应相应菌液提取质粒，利用质粒载体的通用引物进行测序。根据序列比对软件 mega 6.0 分析各个克隆株的基因序列，把 cdr1、 cdr2、cdr3 序列相同的株视为同一克隆株，而其序列不同的株视为不同克隆株，最终获得1株针对新型冠状病毒重组抗原融合蛋白的特异性单域抗体序列。其中筛选出效果最好的一株，其抗体的氨基酸序列为 seq id no：2（dvqvqphsqesggglgslcpgalsssgrltypaigwfrqgkhsapesvsclhdgptsqnlidsvaphlnagrftikntvylqmndyvpsnlepeacaadaphlyhavseplemahywgqvageqvss）。 下划线部分所示的cdr1-cdr2-cdr3区，构成主体的vhh链。
22.实施例2口腔液样品新型冠状病毒抗体检测
23.参照图2、3，口腔液样品的采集使用一种特定的口腔液采集器，包括采样管1、转换管2、滤芯3、收集管4、采样刷5，其特征在于,转换管2内有滤芯3，采样刷5包括海绵刷头10、垫片14和手持杆11，手持杆11远端有手握柄12和刻痕13；转换管2上设有第一内螺纹7，采样管1上设有外螺纹6，转换管2通过第一内螺纹7与采样管1的外螺纹6进行螺纹连接，转换管2上设有第二内螺纹8，收集管4上设有外螺纹9，转换管2通过第二内螺纹8与收集管4的外螺纹9进行螺纹连接。其中，采样管1、转换管2和收集管4连接成一个密闭整体，全长不超过
12cm；采样管1的底端设计为圆形，能够方便加入处理液后震荡混匀，将海绵头内部的口腔液充分洗脱；采样刷5的海绵刷头10采用无毒无害海绵材质，直径不超过采样管1内径，充分收集的口腔液中不仅含有唾液成分，还含有牙龈、齿龈沟里毛细血管渗出液，其中含有血液里的抗体成分，所以一份口腔液可以同时检测新型冠状病毒核酸、抗原和抗体；转换管2内部设有滤芯3，通过滤芯设置能够挡住口腔液里的食物残渣，使口腔液更清亮、更纯，减少口腔液中的残渣对检测结果的影响；收集管4为实验室通用性离心管，利于样本处理和保存，适用于大规模样本处理和检测。
24.在使用时，从采样管1和转换管2连接处打开口腔液采集器，将采集好口腔液的采样刷5海绵刷头10朝向采样管底部放入，从刻痕13处折断，弃去手握柄12，再将采样管1和转换管2通过螺纹6和螺纹7连接。此时，口腔液采集器1、2、3、4连接成为一个密闭的整体将5包裹其中。处理标本时，仅需打开6、7连接，向海绵刷头10加入处理液一步操作，再连接6、7即可。采样管设计为圆形底，便于震荡混匀；转换管2里面的滤芯3将口腔液中的残渣和沉淀过滤，消除其对检测结果的影响；转换管2与采样管1、收集管4连接的螺纹设计为内螺纹，保证在离心处理过程中，口腔液直接沿内壁流入转换管，杜绝样本外溢造成污染的可能；转换管2直接将口腔液导入收集管4，整个口腔液采集器设计将人工操作将至最低，减少生物安全风险。
25.下面结合具体操作对口腔液样品新型冠状病毒抗体检测的方法和步骤进行说明：1、口腔液标本采集：首先，将口腔液采集器倒置，即采样管1在下，收集管4在上，便于样品的收集。从采样管1和转换管2连接处打开采集器，使用口腔液采样刷5，在齿龈部位，上下左右反复刷90秒，直至刷头完全浸湿，将采集好口腔液的采样刷5海绵刷头10朝向采样管底部放入，从刻痕13处折断，弃去手握柄12，再将采样管1和转换管2通过螺纹6和螺纹7连接。此时，口腔液采集器1、2、3、4连接成为一个密闭的整体将5包裹其中，-4℃保存，24h内送至实验室进行标本处理。其中，采样管中可以预存0.5-1ml标本处理液，但需要在使用前利用离心方式将标本处理液集中到采样管1中便于后续采样操作。所述标本处理液具体为：10％胎牛血清、1％庆大霉素、1％青链霉素，余量为pbs，优选的，其中还可以添加0.5％的红色染料。标本处理液也可以在步骤2口腔液标本的处理操作前通过打开6、7连接，向采样管1中另行加入再连接6、7即可。
26.2、口腔液标本的处理：保持口腔液采集器倒置，将浸泡标本处理液中的海绵刷头充分震荡后，口腔液采集器翻转，即采样管1在上，收集管4在下，1500rpm离心1min，在离心处理过程中，口腔液直接沿内壁流入转换管，杜绝样本外溢造成污染的可能；转换管2直接将口腔液导入收集管4，整个口腔液采集器设计将人工操作将至最低，减少生物安全风险。若不能立即检测，则-20℃保存。
27.3、选择实施例1中的新型冠状病毒重组抗原作为检测抗原，并用异硫氰酸荧光素(fitc)标记：将fitc溶于dmso中，制成浓度为20mg/ml的溶液，避光保存。将新型冠状病毒重组抗原与fitc溶液以1：1.5-1:1.0的摩尔比加入棕色玻璃瓶内并充分混匀，将标记产物进行酸碱平衡并纯化，得到fitc标记的新型冠状病毒重组抗原；避光-20℃保存。
28.4、磁微粒标记：将羧基磁珠（solarbio
®
）磁性分离洗涤3次并去除上清，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液和n-羟基琥珀酰亚胺溶液活化磁珠表面羧基。活化后的羧基磁珠与抗fitc抗体（ambio
®
）按100：1的质量比混合，偶联后保持混匀状态；用
0.01mpbs清洗3次后定容备用，制成磁性微粒-抗异硫氰酸荧光素(fitc)抗体。
29.5、从步骤2收集管4中取出50-80μl口腔液待检测样本，用涡旋混匀仪混匀5秒，静止15分钟后开始实验；同时设置阴性对照和阳性对照。加入40-60μl步骤3的 fitc标记新型冠状病毒重组抗原；若样本中含有新型冠状病毒igg抗体，则与fitc标记新型冠状病毒重组抗原形成复合物；6、加磁珠并孵育：加入30-50μl步骤4的磁性微粒-抗异硫氰酸荧光素(fitc)抗体，37℃孵育15-20分钟，形成复合物-磁性颗粒；清洗液(渝械备20200040号)清洗3次，洗去游离的成分；7、加二抗：将40-60μl碱性磷酸酶标记鼠抗人igg单克隆抗体（solarbio
®
） 加入反应管中，形成碱性磷酸酶标记抗体-复合物-磁性颗粒。37℃孵育15-20分钟，并用清洗液清洗3次，洗去游离成分；8、检测：加入底物100μl，碱性磷酸酶催化底物液发光，避光检测，反应5秒读取化学发光值。
30.9、临界值(cut-off值)的确立：选择294例未接种新冠病毒感染疫苗的空白健康人群(血清新型冠状病毒igg抗体均阴性)，398例接种新冠病毒感染疫苗第三针受试者(血清igg抗体均为阳性)，检测其口腔液的新型冠状病毒igg抗体，使用spss21软件进行roc曲线绘制， 经过计算，选择cut-off值89841.7-97590时，实验的检测性能最佳，为本方法的临界值，灵敏度为97.0％-99.4％，特异度为96.2％-98.1％。roc曲线分析结果显示曲线下面积为0.99，表明本检测方法准确性较高。
31.检测结果判定标准：样本发光值/临界值大于或等于1，检测结果判为阳性，比值小于1，检测结果判为阴性。
32.口腔液样本采集和检测的质量控制：选取口腔液成分人总igg抗体(total igg)作为质控指标，选用商品化检测试剂盒（博奥赛斯
®
）人总igg抗体检测试剂盒(磁微粒化学发光法)在检测新型冠状病毒igg抗体的同时，检测样本中的total igg，通过采集307例未接种新冠病毒感染疫苗的空白健康人群(血清新型冠状病毒igg抗体均阴性)和415例接种新冠病毒感染疫苗第三针受试者(血清igg抗体均为阳性)口腔液，计算人群口腔液total igg参考值范围。得到临界值total igg浓度为0.274-0.372μg/ml，当total igg检测值高于临界值，口腔液标本合格，新型冠状病毒igg抗体检测结果正确；当total igg检测值低于临界值，认定为采样不合格，口腔液新型冠状病毒igg抗体检测结果不可被采纳。通过质控剔除不合格样本，减少假阴性结果的存在。
33.检测方法的质量控制：阳性对照阴性对照在计算所得的临界值下同时成立，此次实验成立，结果可采纳。
实施例3 sars-cov-2 的口腔液样品检测试剂盒临床试验
34.利用实施例2中类似的方法，分别选择甲型流感病毒(甲型h1n1)、乙型流感病毒（乙型victoria)、呼吸道合胞病毒、鼻病毒、副流感病毒阳性样品对该口腔液样品检测试剂盒进行检测，结果显示上述检测试剂盒对其他甲型流感病毒、乙型流感病毒等的检测结果均为阴性，确定该检测试剂盒可以实现精确的口腔液检测。
35.临床验证特异性实验：
阴性样本的检测：检测230例普通临床样品的检测，检测结果都为阴性。
36.阳性样本的检测：通过研究实验，结果证实，口腔液和血清样本新冠病毒igg抗体检测结果具有高度一致性。本研究表明口腔液在新型冠状病毒血清流行病学调查中有很好的应用效果，具有推广应用的价值。
37.临床稳定性实验：将随机抽取同批生产好的待检试剂盒分成2份，1份置于4℃冰箱中，另1份置于37℃恒温箱中10天后取出放入4℃冰箱中平衡过夜，用阳性质控品进行稳定性检测，两者检测结果相同，证实本技术的试剂盒具有较好的稳定性。
38.以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

技术特征：
1.一种新型冠状病毒重组抗原表位的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白中包含s蛋白抗原表位、n蛋白抗原表位、m蛋白抗原表位、e蛋白抗原表位，其氨基酸序列如seq id no.1所示。2.一种针对权利要求1所述的新型冠状病毒重组抗原表位的融合蛋白的单域抗体，其特征在于，所述单域抗体的氨基酸序列如seq id no.2所示。3.一种含有权利要求1所述的融合蛋白和/或权利要求2所述的单域抗体的新型冠状病毒检测装置。4.如权利要求3所述的新型冠状病毒检测装置，其特征在于，还包含一种口腔液采集器，所述口腔液采集器包括采样管、转换管、滤芯、收集管、采样刷，所述转换管内有滤芯，所述采样刷包括海绵刷头、垫片和手持杆，手持杆远端有手握柄和折断刻痕；所述转换管上设有第一内螺纹，采样管上设有外螺纹，转换管通过第一内螺纹与采样管的外螺纹连接，转换管上设有第二内螺纹，收集管上设有外螺纹，转换管通过第二内螺纹与收集管的外螺纹连接；所述采样管、转换管和收集管连接成一个密闭整体；所述采样管的底端设计为圆形；所述海绵刷头采用无毒无害海绵材质，直径不超过采样管内径；所述转换管中的滤芯设有滤芯；所述转换管与采样管螺纹连接处为转换管内螺纹，采样管外螺纹；所述转换管与收集管螺纹连接处为转换管内螺纹，收集管外螺纹；所述收集管为实验室通用性离心管，利于样本处理和保存。5.如权利要求4所述的新型冠状病毒检测装置，其特征在于，其中口腔液采集器在口腔样品预处理中具体操作为：首先，将口腔液采集器倒置，即采样管在下，收集管在上，便于样品的收集；从采样管和转换管连接处打开采集器，使用口腔液采样刷，在齿龈部位，上下左右反复刷，直至刷头完全浸湿，将采集好口腔液的采样刷海绵刷头朝向采样管底部放入，从刻痕处折断，弃去手握柄，再将采样管和转换管通过螺纹连接；此时，口腔液采集器连接成为一个密闭的整体将采样刷海绵刷头包裹其中，-4℃保存，24h内送至实验室进行标本处理。6.如权利要求4所述的新型冠状病毒检测装置，其特征在于，标本的处理步骤具体为：保持口腔液采集器倒置，在生物安全柜中打开采样管，加入口腔液标本处理液，重新拧紧采样管，将浸泡标本处理液中的海绵刷头充分震荡后，口腔液采集器翻转，即采样管在上，收集管在下，离心，在离心处理过程中，口腔液直接沿内壁流入转换管，杜绝样本外溢造成污染的可能；转换管直接将口腔液导入收集管，弃去采样管部分，留下收集管进行立即检测；若不能立即检-20℃以下保存。7.如权利要求3或4所述的新型冠状病毒检测装置，其特征在于，所述新型冠状病毒检测装置中还包括标本处理液，所述标本处理液为：10％胎牛血清、1％庆大霉素、1％青链霉素，余量为pbs。8.权利要求1所述的融合蛋白、权利要求2所述的单域抗体、权利要求3所述的口腔液采集器在制备检测新型冠状病毒药物或者试剂中的应用。9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，检测样品选自血清、血液、口腔上皮细胞、脱落细胞、口腔拭子、咽拭子。

技术总结
本发明提供一种新型冠状病毒抗体及其在无传播风险口腔液检测中的应用；本发明同时一种新型冠状病毒重组抗原表位的融合蛋白，所述融合蛋白中包含S蛋白抗原表位、N蛋白抗原表位、M蛋白抗原表位、E蛋白抗原表位，并对上述优势抗原进行优化连接，形成新的融合蛋白，可以有效识别SARS-CoV-2原始毒株、变异毒株和各种衍生亚型。本发明的样品采集管和检测方法，克服采血的创伤性和潜在感染风险，降低医护人员感染风险，也克服了唾液检测灵敏度差的缺点，高效、节约，节省医疗资源，降低生物安全风险。降低生物安全风险。降低生物安全风险。


技术研发人员：黄芳 董梅 李立东 王怡婷 谢会 黄琪 李茂中
受保护的技术使用者：北京科技大学
技术研发日：2023.07.07
技术公布日：2023/8/13