一种阴道菌群分子分型试剂盒及其使用方法与流程

1.本发明荧光定量pcr检测阴道微生物生态分子分型技术领域，具体涉及一种阴道细菌微生态分子分型试剂盒及其使用所述试剂盒进行非诊断目的的阴道细菌微生态分子分型的方法。


背景技术：

2.正常微生物一般被定义用来形容定植在人体中的微生物群落，在宿主特定结构部位，并随宿主长期进化过程形成的，定植在宿主皮肤或是黏膜上的微生物群。体表、口腔、呼吸道、胃肠道、尿道及生殖道是正常成年人体中微生物分布的主要部位。经过与人体漫长的适应和生物进化过程，达到与人体共生的状态，并在两者间建立紧密的联系，对完善人体生理机能尤其是促进免疫功能的成熟发挥了关键的作用。局部的微生物群落在免疫调节中扮演重要的角色。
3.乳酸杆菌属(lactobacillus genus)是常驻于女性阴道内的常驻菌,对维持女性生殖器官的正常环境具有重要作用。 就健康女性的阴道而言,乳酸不断产生以维持酸性(ph 值 4.5 至 5.5)环境,从而抑制其他机会性细菌的过度生长和由此引起的感染。高丰富度乳酸杆苗是女性生殖道健康的标识。在生理情况下，阴道菌群和宿主、环境之间构成相互制约、相互协调的动态平衡状态，共同建立以乳酸杆菌占绝对优势的育龄期阴道微生态环境。乳酸杆菌通过各种机制抵御外来致病菌的侵袭，包括：分解位于阴道内皮细胞的糖原，生成乳酸，维持阴道内低ph(3.8-4.4)；产生生物表面活性剂抵制外来致病菌的入侵，维持乳酸抒苗的绝对优势地位；产生抗生素、过氧化氢等抑菌杀菌物质；乳酸杆菌粘附阴道胞内皮细表面，形成紧密连接，形成机械屏障，阻止外来侵入菌进入血液循环；乳酸杆菌与阴道内皮细胞受体结合，竞争营养和空间等机制，促进和维持女性生殖健康等。
4.但由于受环境变化、药物刺激及宿主自身激素水平和免疫力改变等因素影响，阴道内的微生态菌群多样性可发生变化，阴道乳杆菌减少，阴道ph值升高，各种有害菌大量增殖，打破和改变宿主阴道内的微生态平衡,其由生理性组合状态转变为病理性组合状态，从而引起女性生殖道微生态失衡，进而导致阴道炎甚至宫颈癌等疾病的发生。细菌性阴道炎（bacterial vaginosis，bv）作为以阴道菌群改变为特征的常见妇科病影响着10%-37%的女性。bv的存在大大增加了早产、流产、胎膜早破等不良妊娠危险性,并且bv相关菌群能显著提高女性患盆腔炎症的几率。这种现象可能是由于女性的年龄、压力、荷尔蒙失调、月经以及通过性交产生的机会性细菌造成的。阴道炎是很多女性都会经历的一种常见病，但如果长期置之不理，则有增加盆腔炎的风险，并因阴道炎引起术后感染，可引起很多并发症。
5.引起阴道炎的主要微生物包括阴道加特纳菌和白念珠菌,以及普雷沃氏菌属、厌氧革兰氏阳性球菌和移动弧菌 (mobiluncus spp.)、解脲脲原体和人型支原体。即引起阴道炎的微生物种类繁多,可能由一种或几种微生物引起炎症。
6.宫颈癌是女性第四大常见癌症之一，每年约有 57 万例新发病例和 31 万例死亡病例，全球宫颈癌的年龄标准化发病率为 13.1/10 万妇女。在中国的 15-44 岁女性中，宫
颈癌已成为第二大常见癌症和第三大癌症死亡原因。共生在宿主阴道中的细菌通过影响宫颈癌关键致病因子
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hpv的感染与清除，参与了宫颈疾病的发生、发展过程。已有的研究表明细菌性阴道炎通过影响生殖道环境的ph值、免疫学反应、生殖道损伤等促进hpv感染，并且抑制hpv的清除；益生菌处理可能通过矫正阴道细菌微生态抑制hpv的感染。
7.明确阴道中微生物的群落结构，将为针对性防治女性生殖系统疾病提供新的有效手段。然而，现有的分析阴道微生物生态的技术手段要么是常规的显微镜形态学检查及传统的细菌培养法为基础的，难以有效对微生物种群遗传多样性进行准确地区分；或者是通过高通量测序结合生物信息学分析，很难在临床检测中进行推广应用。
8.阴道分泌物检测是妇科常规的检测指标之一。阴道分泌物检测，即俗称的“白带常规”，是妇科门诊检查中应用最普遍的一项，是评判女性是否患有阴道炎症的重要诊断依据。传统的检测手段为湿片显微镜检法，主要检测项目包括上皮细胞、白细胞、乳酸杆菌数量、查找真菌、滴虫及线索细胞。该方法简单直接、特异性高，也一直被作为金标准来推崇，但不能精细区分微生物的遗传多样性，且因是手工操作与人工判读结果，对人员的技术要求高，可能存在不同人员在结果判读上的差异。
9.近几年来，应用化学酶法联合检测白带中的过氧化氢、白细胞酯酶、唾液酸苷酶、乙酰氨基葡萄糖苷酶活性及 ph 值来分别对应白带中的乳酸杆菌数量及功能、白细胞、细菌性阴道病bv、霉菌及滴虫感染已逐渐成为白带检测中的热点，该方法被称为“五联检检测”。五联检结果的判断，过氧化氢孔不显色提示阴道菌群失调，结果判断+，对应镜检结果为乳酸杆菌异常；白细胞酯酶阳性对应镜检白细胞+；唾液酸苷酶阳性对应镜检线索细胞；乙酰氨基葡萄糖苷酶阳性且 ph≥4.8 对应镜检查见滴虫+；乙酰氨基葡萄糖苷酶阳性且 ph≤4.6；则对应镜检查见真菌。
10.革兰氏染色一直被广泛用作诊断阴道炎的方法,但随着最近引入的非基于培养的基因检测方法,可以轻松快速地诊断阴道炎。 例如,有一种使用pcr(聚合酶链式反应)技术来检测引起阴道炎的微生物的方法。传统的pcr检测方法采用了如上所述的多种与性传播疾病相关的微生物的方法,它不是特定的检测阴道炎的话,费用高,而且要3-5天左右才能拿到检查结果,所以不能说是一种快速、简单、准确地只检查阴道炎的方法。
11.作为传统 pcr 测试方法的替代方法,已经提出了一种通过使用半定量多重 pcr 检测是否存在阴道炎诱导微生物和阴道菌群来诊断阴道炎的方法,但是半定量多重 pcr 测试方法准确地分析了微生物的丰度。存在结果错误可能性高的问题。换言之,如果单纯以阴道炎微生物的存在来诊断阴道炎,有可能出现误诊,而且即使是阴道炎,也可能存在阴道菌群,这并不容易,存在诊断问题错误。
12.另外，实时pcr反应，使用惰性乳酸杆菌l.iners、詹氏乳杆菌l.jensenii和阴道阿托波菌a.vaginae，有一项研究表明负相关,但此处应用的乳酸杆菌特异性引物(lactobacillus species-specific primer)可能经常与其他微生物物种发生交叉反应，并且样品的状况取决于引物二聚体(dimer)等可能发生,准确定量测定存在限度。
13.目前的检查手段检测的是疾病的症状，但未能对局部的微生物群落分布进行明确的区分。局部的微生物群落在免疫调节中扮演重要的角色。在基础研究工作中，研究者开发了利用高通量测序结合生物信息学分析探究阴道微生物生态的研究手段，但这些复杂的技术流程很难在临床诊断和治疗中推广应用。迄今为止，尚缺乏有效地通过微生物生态调整
进而增强女性生殖健康的临床治疗手段。
14.因此,在本发明所属的技术领域中,需要提供一种低成本、简便、快速、准确地对阴道菌群进行准确分型的方法，辅助得到阴道健康情况的方法。


技术实现要素：

15.本发明的一个目的在于：提供一种荧光定量pcr检测阴道微生物生态分子分型的试剂盒。在一些实施方案中，其包括细菌基因组提取试剂盒、荧光实时定量pcr检测试剂盒、9种在阴道中优势的细菌（3中阴道益生菌+6种阴道致病菌）的特异性引物和指示细菌总量的微生物16srdna的引物。
16.本发明的另一个目的在于：还提供所述的阴道菌群分子分型试剂盒的非诊断目的的检测方法，采用实时荧光定量pcr方法对阴道菌群进行准确的分子分型，其包括以下步骤：（1）细菌基因组提取，采用细菌基因组提取试剂盒从阴道分泌物中制备菌群核酸；（2）qpcr检测，使用试剂盒中的引物和实验条件进行检测，pcr扩增采用sybr green i实时定量pcr检测试剂盒进行；（3）生成数据报告，将荧光定量pcr检测结果用引物对10进行标准化，获得3种阴道益生菌和6种阴道致病菌在阴道总细菌中所占比例，对阴道菌群进行准确的分子分型。定义
17.术语“核酸”和“多核苷酸”在本文中可互换地使用来描述由核苷酸(例如脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸)组成的任何长度的聚合物，例如大于约2个碱基、大于约10个碱基、大于约100个碱基、大于约500个碱基、大于约1000个碱基，直至约10,000或更多个碱基，且所述“核酸”和“多核苷酸”可酶促或合成产生(例如美国专利 us5948902a和其中引用的参考文献中所述的pna)，其可以以类似于两个天然存在的核酸的序列特异性方式与天然存在的核酸杂交，例如可参与沃森-克里克碱基配对相互作用。天然存在的核苷酸包括鸟嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤和胸腺嘧啶(分别为g、c、a和t)。
18.术语“寡核苷酸”表示约2至200个或更多个，直至约500个核苷酸或更多个核苷酸的单链多聚体。寡核苷酸可以是合成的或酶促制得的，且在一些实施方案中，其长度少于10至50个核苷酸。寡核苷酸可包含核糖核苷酸单体(即可以是寡核糖核苷酸)或脱氧核糖核苷酸单体。例如，寡核糖核苷酸的长度可以是10至20个、11至30个、31至40个、41至50个、51-60个、61至70个、71至80个、80至100个、100至150个或150至200个核苷酸。
19.术语“测定(determining)”、“测量(measuring)”、“评估(evaluating)”、“评价(assessing)”、“分析(analyzing)”和“测定(assaying)”在本文中可互换使用，其是指任何形式的测量，且包括测定某一要素是否存在。这些术语包括定量和/或定性测定。评价可以是相对的或绝对的。“评价存在”包括确定存在的某物的数量，以及确定其是否存在。
20.除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
21.在本发明的一些实施方式中，提供一种荧光定量pcr检测阴道微生物生态分子分型的试剂盒。在一些实施方案中，其包括细菌基因组提取试剂盒、荧光实时定量pcr检测试
剂盒、9种在阴道中优势的细菌（3中阴道益生菌+6种阴道致病菌）的特异性引物和指示细菌总量的微生物16srdna的引物。
22.在本发明的一些实施方式中，所述引物如下所示：。
23.在本发明的一些实施方式中，提供一种荧光定量pcr检测阴道微生物生态分子分型的试剂盒的使用方法，采用实时荧光定量pcr方法对阴道菌群进行准确的分子分型，其包括以下步骤：（1）细菌基因组提取，采用细菌基因组提取试剂盒从阴道分泌物中制备菌群核酸；（2）qpcr检测，使用试剂盒中的引物和实验条件进行检测，见下表
pcr扩增采用sybr green i实时定量pcr检测试剂盒进行；（3）生成数据报告，将荧光定量pcr检测结果用引物对10进行标准化，获得3种阴道益生菌和6种阴道致病菌在阴道总细菌中所占比例，对阴道菌群进行准确的分子分型。
24.本试剂盒采用实时荧光定量pcr进行分子分型。实时定量pcr是在常规pcr技术基础上发展的新兴核酸定量技术，与常规pcr相比优点是:a）实现了初始模板的绝对定量；b）检测灵敏度高,可以检测到低拷贝的目的基因；c）可以区分微小拷贝数的差异；d）对初始模板含量差异较大的样品能同时定量；
e）检测设计灵活；省时省力。
25.本试剂盒包含标准化的试剂和操作流程，技术稳定可靠，易于临床实验室操作，相比现有技术，最低检测限达到102拷贝/微升，为普通pcr灵敏度100倍以上，检测准确率100%。对反应条件和设备要求低，可以直接提取阴道分泌物制备菌群核酸，无需对感染病菌进一步分离和培养，因此，使用上述引物组合对阴道微生物进行分子分型。
26.显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
27.以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
28.图1是本发明实施例中l.crispatus检测ct值。
29.图2是本发明实施例中l.crispatus的扩增曲线。
30.图3是本发明实施例中l.crispatus的扩增熔解曲线图。
31.图4是本发明实施例中l.crispatus的扩增单位时间内熔解峰值图。
32.图5是本发明实施例中l.jensenii检测ct值。
33.图6是本发明实施例中l.jensenii的扩增曲线。
34.图7是本发明实施例中l.jensenii的扩增熔解曲线图。
35.图8是本发明实施例中l.jensenii的扩增单位时间内熔解峰值图。
36.图9是本发明实施例中l.jensenii检测ct值。
37.图10是本发明实施例中l.iners的扩增曲线。
38.图11是本发明实施例中l.iners的扩增熔解曲线图。
39.图12是本发明实施例中l.iners的扩增单位时间内熔解峰值图。
40.图13是本发明实施例中g.vaginalis检测ct值。
41.图14是本发明实施例中g.vaginalis的扩增曲线。
42.图15是本发明实施例中g.vaginalis的扩增熔解曲线图。
43.图16是本发明实施例中g.vaginalis的扩增单位时间内熔解峰值图。
44.图17是本发明实施例中a.vaginae检测ct值。
45.图18是本发明实施例中a.vaginae的扩增曲线。
46.图19是本发明实施例中a.vaginae的扩增熔解曲线图。
47.图20是本发明实施例中a.vaginae的扩增单位时间内熔解峰值图。
48.图21是本发明实施例中eggerthella检测ct值。
49.图22是本发明实施例中eggerthella的扩增曲线。
50.图23是本发明实施例中eggerthella的扩增熔解曲线图。
51.图24是本发明实施例中eggerthella的扩增单位时间内熔解峰值图。
52.图25是本发明实施例中megasphaera检测ct值。
53.图26是本发明实施例中megasphaera的扩增曲线。
54.图27是本发明实施例中megasphaera的扩增熔解曲线图。
55.图28是本发明实施例中megasphaera的扩增单位时间内熔解峰值图。
56.图29是本发明实施例中leptotrichia /sneathia检测ct值。
57.图30是本发明实施例中leptotrichia /sneathia的扩增曲线。
58.图31是本发明实施例中leptotrichia /sneathia的扩增熔解曲线图。
59.图32是本发明实施例中leptotrichia /sneathia的扩增单位时间内熔解峰值图。
60.图33是本发明实施例中prevotella检测ct值。
61.图34是本发明实施例中prevotella的扩增曲线。
62.图35是本发明实施例中prevotella的扩增熔解曲线图。
63.图36是本发明实施例中prevotella的扩增单位时间内熔解峰值图。
64.图37是本发明实施例中prevotella检测ct值。
65.图38是本发明实施例中all bacteria的扩增曲线。
66.图39是本发明实施例中all bacteria的扩增熔解曲线图。
67.图40是本发明实施例中all bacteria的扩增单位时间内熔解峰值图。
68.图41是本发明实施例中的实时荧光定量pcr方法的特异性检测10种菌群的图谱，代表10种菌群的扩增曲线。
具体实施方式
69.为了具体阐述本技术具有普适性的设计思路，下面以具体的实验参数为例进行展示，但不应当反而成为限制本技术保护范围的理由。
70.下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
71.图1至图4为本发明实施例中的实时荧光定量pcr方法的特异性检测l.crispatus图谱。
72.图5至图8为本发明实施例中实时荧光定量pcr方法的特异性检测l.jensenii图谱。
73.图9至图12为本发明实施例中的实时荧光定量pcr方法的特异性检测l.iners图谱。
74.图13至图16为本发明实施例中的实时荧光定量pcr方法的特异性检测g.vaginalis图谱。
75.图17至图20为本发明实施例中的实时荧光定量pcr方法的特异性检测a.vaginae图谱。
76.图21至图24为本发明实施例中的实时荧光定量pcr方法的特异性检测eggerthella图谱。
77.图25至图28为本发明实施例中的实时荧光定量pcr方法的特异性检测megasphaera图谱。
78.图29至图32为本发明实施例中的实时荧光定量pcr方法的特异性检测leptotrichia /sneathia图谱。
79.图33至图36为本发明实施例中的实时荧光定量pcr方法的特异性检测prevotella图谱。
80.图37至图40为本发明实施例中的实时荧光定量pcr方法的特异性检测all bacteria图谱。实施例1
81.提供一种荧光定量pcr检测阴道微生物生态分子分型的试剂盒，其包括细菌基因组提取试剂盒、荧光实时定量pcr检测试剂盒、9种在阴道中优势的细菌（3中阴道益生菌+6种阴道致病菌）的特异性引物和指示细菌总量的微生物16srdna的引物，具有高特异性和灵敏性，根据现有文献和genbank基因序列选择目的基因。
82.参照genbank中序列，通过序列同源性分析，设计了可特异性识别并扩增反应产物的引物组，引物委托华大基因合成，所述引物组表1所示：
83.采用实时荧光定量pcr方法对阴道菌群进行准确的分子分型，其包括以下步骤：（1）细菌基因组提取，采用细菌基因组提取试剂盒从阴道分泌物中制备菌群核酸，每个细菌样本设3组平行实验：102拷贝/微升、103拷贝/微升、104拷贝/微升；（2）qpcr检测，使用试剂盒中的引物和实验条件进行检测，先使用表1中各个细菌的引物对进行实时荧光定量pcr，对扩增条件进行摸索，之后使用表1中全部引物进行多重实时荧光定量pcr。使用的设备为pikoreal 96 实时 pcr 设备(thermo scientific,马萨诸塞州,美国)进行实时 pcr。建立了与其他微生物菌株无交叉反应的特异性检测阴道菌群的实时pcr条件，并将已建立的实时定量荧光pcr扩增条件中获得最佳结果的条件应用于本实施例。
84.使用dna提取试剂盒提取的标准菌种的基因组dna(模板)1ng、100pmol引物(本发明表1中的引物对)1.5μl,加入pcr反应液中。另外,在pcr反应液中加入10μl 2x 实时qpcr主混合物(real-time qpcr master mixture)，然后加入三级蒸馏水至pcr反应液达到20μl。
85.然后,使用pikoreal 96实时pcr设备在95℃变性7分钟,并通过40个循环重复95℃5秒和60℃30秒的条件进行实验。
86.另一方面,为了确认实时pcr扩增反应结果并对其进行定量分析,用荧光材料sybr green i进行标记。同时,用于标记的荧光材料不限于上述示例,可以使用本领域已知的各种荧光材料。pcr扩增采用sybr green i实时定量pcr检测试剂盒进行；
87.（3）生成数据报告，将荧光定量pcr检测结果用引物对10进行标准化，获得3种阴道益生菌和6种阴道致病菌在阴道总细菌中所占比例，对阴道菌群进行准确的分子分型。
88.real-timepcr中的定量是一种在pcr过程中监测每个循环的进程,实时测量指数期范围内扩增产物的方法。这时,一个重要的概念就是ct(threshold cycle)是一个数字。该值是上述引物组扩增产生的荧光强度明显增加到可检测到超过基线水平的循环次数,即通过与指示细菌总量的微生物16srdna进行对比，分析得到荧光强度标准曲线后，将荧光定量pcr检测结果用引物对10进行标准化，获得3种阴道益生菌和6种阴道致病菌在阴道总细菌中所占比例，对阴道菌群进行准确的分子分型，定量分析3种阴道益生菌和6种阴道致病菌在阴道总细菌中所占比例。
89.由图1-图41可见，使用本发明的引物荧光定量pcr可以成功扩增出3种阴道益生菌和6种阴道致病菌以及对照总细菌。摸索后的pcr扩增条件为：95℃变性7分钟,并通过40个循环重复95℃5秒和60℃30秒。最低检测限达到102拷贝/微升。实施例2
90.用于样品的定量 pcr (qpcr) 检测是否存在6种阴道致病菌，基于对已发表的 16s rrna 基因序列的计算机分析,为每种生物开发了引物设计,如表 1 所示。针对多重 qpcr 兼容性和缺乏交叉反应性对引物进行了筛选。对 pcr 产物进行特异性扩增,以监测荧光的浓度依赖性降低,并确认所需产物的扩增完成后通过测定峰解链温度 (tm) 的扩增产物。
91.采用实施例1给出的方法对阴道菌群进行准确的分子分型，qpcr检测，使用试剂盒中的引物和实验条件进行多重荧光定量pcr检测，使用表1中细菌的引物对进行实时荧光定
量pcr，将荧光定量pcr检测结果用引物对10进行标准化，获得3种阴道益生菌和6种阴道致病菌在阴道总细菌中所占比例。
92.使用实时pcr对材料进行研究。获得了以下结果:由图41可见，3种阴道益生菌和6种阴道致病菌以及总细菌均可同时有效被扩增，总细菌量100%/样品。 l.crispatus 15%/样品，l.jensenii 20%/样品，l.iners 30%/样品，g.vaginalis 5%/样品, a.vaginae 10%/样品，eggerthella 5%/样品，megasphaera 5%/样品,leptotrichia /sneathia 5%/样品, prevotella 5%/样品。由此可以初步判断，该样品以阴道益生菌为主导菌株。
93.显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

技术特征：
1.一种阴道菌群分子分型试剂盒，其特征在于，包含：细菌基因组提取试剂盒、荧光实时定量pcr检测试剂盒、9种在阴道中优势的细菌的特异性引物和指示细菌总量的微生物16srdna的引物，其中9种在阴道中优势的细菌包括3种阴道益生菌及6种阴道致病菌，所述引物如下所示：。2.根据权利要求1所述的一种阴道菌群分子分型试剂盒，其特征在于，其还包括dna聚合酶、dntp、pcr缓冲液和pcr扩增产物的标记材料sybr green i。3.一种使用方法，应用于权利要求1-2所述的一种阴道菌群分子分型试剂盒，其特征在于，采用实时荧光定量pcr方法对阴道菌群进行准确的分子分型，其包括以下步骤：（1）细菌基因组提取，采用细菌基因组提取试剂盒从阴道分泌物中制备菌群核酸；（2）qpcr检测，使用试剂盒中的引物和实验条件进行检测，见下表
pcr扩增采用标记材料sybr green i实时定量pcr检测试剂盒进行；（3）生成数据报告，将荧光定量pcr检测结果用引物对10进行标准化，获得3种阴道益生菌和6种阴道致病菌在阴道总细菌中所占比例，对阴道菌群进行准确的分子分型。4.根据权利要求3所述的使用方法，其特征在于，3种阴道益生菌为l.crispatus、l.jensenii、l.iners。5.根据权利要求3所述的使用方法，其特征在于，6种阴道益生菌为g.vaginalis、a.vaginae、eggerthella、megasphaera、leptotrichia /sneathia、prevotella。

技术总结
本发明提供一种阴道细菌微生态分子分型试剂盒以及使用所述试剂盒进行非诊断目的的阴道细菌微生态分子分型的方法。在一些实施方案中，所述分子分型试剂盒可包含：扩增卷曲乳杆菌L.crispatus、詹氏乳杆菌L.jensenii、惰性乳酸杆菌L.iners、阴道加特纳菌G.vaginalis、阴道阿托波菌A.vaginae、伊格尔兹氏菌Eggerthella、巨球型菌Megasphaera、纤毛菌Leptotrichia/Sneathia、普雷沃氏菌Prevotella、all bacteria的引物序列、SYBR Green I，通过荧光定量PCR检测从而对阴道菌群进行准确的分子分型，进而增强女性生殖健康。进而增强女性生殖健康。进而增强女性生殖健康。


技术研发人员：刘忱 刘亦金
受保护的技术使用者：天津市玖亦源科技发展有限公司
技术研发日：2023.07.07
技术公布日：2023/8/13