一种分离检测氨基酸衍生物及其相关杂质的方法与流程

1.本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种分离检测氨基酸衍生物及其相关杂质的方法。


背景技术：

2.n-芴甲氧羰基-o-叔丁基-l-苏氨醇作为氨基酸衍生物的其中一种，是制备多肽产品的起始物料，然而，在制备多肽产品的生产过程中，n-芴甲氧羰基-o-叔丁基-l-苏氨醇的各种杂质氨基酸会影响最终产品的品质，若能够在短时间内检测出氨基酸衍生物中的杂质情况，对于控制终产品的质量至关重要。
3.n-芴甲氧羰基-o-叔丁基-l-苏氨醇fmoc-l-thr(tbu)-ol的起始物料苏氨醇l-thr-ol中常常含有d-苏氨醇d-thr-ol、l-别苏氨醇l-allo-thr-ol、d-别苏氨醇d-allo-thr-ol，从而导致生产出来的氨基酸衍生物中含有fmoc-d-thr(tbu)-ol,fmoc-l-allo-thr(tbu)-ol,fmoc-d-allo-thr(tbu)-ol3种手性杂质。由于这些手性杂质的化学性质相似，物理性质也相近，常规方法难以拆分和定量分析。加之杂质含量相对较低，检出难度加大。目前常见的氨基酸衍生物检测方法有薄层层析tlc检测法、荧光fs检测法、紫外uv检测法等。但是，薄层检测主要是半定量分析，不能确认其准确含量；荧光检测主要采用诱导剂，操作繁琐，容易出错；紫外检测法主要采用高效液相hplc检测，其操作方便，检测速度快，结果准确，是最常使用的检测方法。
4.对这种多个同分异构体的混合物的检测，现有技术采用的方式是对多个同分异构体分别单独进行分离检测，而这种检测方法会加大时间成本、检测成本，并且还会影响准确性。目前多肽等下游产业对fmoc-l-thr(tbu)-ol等保护氨基酸产品的质量要求很高(纯度≥99.5％，单杂≤0.1％等)，因此必需对产品中的相关杂质进行快速高效的分析，所以急需相应的检测方法。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种分离检测氨基酸衍生物及其相关杂质的方法，该方法能够在较短时间内一次性检测其各种杂质的情况，从而控制终产品的质量，具有良好的专属性和精密度。
6.一种分离检测氨基酸衍生物及其相关杂质的方法，包括：
7.将氨基酸衍生物与3种相关杂质加入容量瓶，用乙腈定容，摇动溶解，得到澄清透明溶液；
8.采用hplc对澄清透明溶液进行检测，利用lux-2手性柱作为分离载体，将流动相a和流动相b在不同的时间按照不同的比例混合，通过混合后的流动相对所述澄清透明溶液进行洗脱，并采用面积归一化法确定所述澄清透明溶液中每种物质的出峰位置以及每种物质对应的含量；
9.将流动相a和流动相b在不同的时间按照不同的比例混合得到对应不同的流动相
包括：以1.0ml/min的流速为为基准，将流动相a和流动相b以40:60的体积比作为初始体积比，在一定时间内，将所述流动相a和流动相b的体积逐渐调整至终极体积比。
10.进一步地，如上所述的分离检测氨基酸衍生物及其相关杂质的方法，所述一定时间为50min；所述终极体积比为20:80。
11.进一步地，如上所述的分离检测氨基酸衍生物及其相关杂质的方法，所述流动相a为0.10％tfa水溶液；所述流动相b为0.10％tfa乙腈溶液。
12.进一步地，如上所述的分离检测氨基酸衍生物及其相关杂质的方法，所述色谱柱的尺寸为5μm 4.6mm
×
250mm，柱温为35℃。
13.进一步地，如上所述的分离检测氨基酸衍生物及其相关杂质的方法，检测波长为220nm，进样体积5μl。
14.进一步地，如上所述的分离检测氨基酸衍生物及其相关杂质的方法，所述氨基酸衍生物与3种相关杂质分别为：fmoc-l-thr(tbu)-ol,fmoc-d-thr(tbu)-ol,fmoc-l-allo-thr(tbu)-ol,fmoc-d-allo-thr(tbu)-ol。
15.本发明提供的分离检测氨基酸衍生物及其相关杂质的方法，通过将流动相a和流动相b在不同的时间按照不同的比例混合，对所述澄清透明溶液进行洗脱，并采用面积归一化法确定澄清透明溶液中每种物质的出峰位置以及每种物质对应的含量，该方法能够一次性将氨基酸衍生物及其3种同分异构体进行有效分离，并且分离时间短，实现了检测的高标准要求。
附图说明
16.图1为实施例1样品1对应的色谱图；
17.图2为实施例1样品2对应的色谱图；
18.图3为实施例1样品3对应的色谱图；
19.图4为对比例1对应的色谱图；
20.图5为对比例2对应的色谱图；
21.图6为对比例3对应的色谱图；
22.图7为对比例4对应的色谱图；
23.图8为对比例5对应的色谱图；
24.图9为对比例6对应的色谱图；
25.图10为对比例7对应的色谱图；
26.图11为对比例8对应的色谱图。
具体实施方式
27.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
28.实施例1：
29.本实施例提供一种分离检测氨基酸衍生物及其相关杂质的方法，该方法包括以下
措施：
30.设备型号：赛默飞高效液相色谱仪u3000
31.色谱柱：lux-2 5μm 4.6mm
×
250mm；
32.流动相：0.10％tfa水溶液为流动相a，0.10％tfa乙腈溶液为流动相b；柱温：35℃；流速：1.0ml/min；检测波长为220nm，进样体积5μl
33.样品1制备：fmoc-l-thr(tbu)-ol 50mg，fmoc-d-thr(tbu)-ol 1mg加入10ml容量瓶，纯乙腈定容，摇动溶解，得到澄清透明溶液。
34.将该澄清透明溶液作为hplc的供试品溶液，利用lux-2手性柱作为分离载体，将0.10％tfa水溶液作为流动相a、0.10％tfa乙腈溶液作为流动相b，将流动相a和流动相b在不同的时间按照不同的比例进行混合，并控制流速为1.0ml/min，从而对样品进行洗脱，并采用面积归一化法确定澄清透明溶液中主成分和各种杂质的出峰位置及含量，其中，流动相a和流动相b在不同的时间按照不同的比例进行混合的具体形式见表1。
35.表1流动相随时间变化的体积比
[0036][0037]
采用表1的检测条件，获得样品1的色谱图，如图1所示，图1对应的峰表如表2所示。
[0038]
表2流动相随时间变化的峰表
[0039][0040]
从图1和表2发现，fmoc-l-thr(tbu)-ol的保留时间为25.598分钟，fmoc-d-thr(tbu)-ol的保留时间为28.930分钟，分离度4.52，出峰时间也比较合适。
[0041]
样品2制备：将fmoc-d-allo-thr(tbu)-ol 2mg加入10ml容量瓶，纯乙腈定容，摇动溶解，得到澄清透明溶液；按照实施例1的色谱条件进行分离检测。图2为样品2对应的色谱图；表3为图2对应的峰表。
[0042]
表3流动相随时间变化的峰表
[0043][0044]
从图2和表3中发现，fmoc-d-allo-thr(tbu)-ol的保留时间为39.332分钟。
[0045]
样品3制备：将fmoc-l-thr(tbu)-ol50mg,fmoc-d-thr(tbu)-ol20mg,fmoc-l-allo-thr(tbu)-ol 20mg,fmoc-d-allo-thr(tbu)-ol20mg加入10ml容量瓶，纯乙腈定容，摇动溶解，得到澄清透明溶液，按照实施例1的色谱条件进行运行，确认其分离度。图3为本实施例对应的色谱图；表4为图3对应的峰表。
[0046]
表4流动相随时间变化的峰表
[0047][0048]
从图3和表4中发现，fmoc-l-thr(tbu)-ol的保留时间为25.033分钟,fmoc-d-thr(tbu)-ol的保留时间为28.197分钟，fmoc-l-allo-thr(tbu)-ol的保留时间为24.195分钟，fmoc-d-allo-thr(tbu)-ol的保留时间为38.968分钟。4个成分间的分离度都达到1.5以上，达到预期分离标准。
[0049]
对比例1：
[0050]
设备型号：岛津高效液相色谱仪lc-16
[0051]
色谱柱：ic5μm4.6mm
×
250mm；
[0052]
流动相：0.01％tfa正己烷为流动相a；0.01％tfa乙醇为流动相b；
[0053]
柱温：30℃；流速：1.0ml/min；检测波长为254nm，进样体积10μl
[0054]
样品制备：称取fmoc-l-thr(tbu)-ol 10mg,fmoc-d-thr(tbu)-ol 5mg加入10ml容量瓶，用无水乙醇定容，摇动溶解，得到澄清透明溶液；
[0055]
将该澄清透明溶液作为hplc的供试品溶液，将流动相a和流动相b在不同的时间按照不同的比例进行混合，从而对供试品进行洗脱，并采用面积归一化法确定所述供试品中成分的出峰位置和含量；其中，流动相a和流动相b在不同的时间段按照不同比例进行混合的具体形式见表5。
[0056]
表5流动相随时间变化的体积比
[0057][0058]
采用表5的检测条件，获得对应的色谱图，如图4所示，图4对应的峰表如表6所示。
[0059]
表6流动相随时间变化的峰表
[0060]
峰表
[0061]
检测器a 254nm
[0062]
峰#保留时间面积高度面积％高度％分离度(usp)16.29229215893124789.28215.454
‑‑
26.51128554158170950290.71884.546
‑‑
总计 3147574720211980100.000100.000 [0063]
从图4以及表6发现，fmoc-l-thr(tbu)-ol与fmoc-d-thr(tbu)-ol出现重合，不用再继续添加fmoc-l-allo-thr(tbu)-ol及fmoc-d-allo-thr(tbu)-ol作为制备样品。因此，本对比例方法不能达到预期效果。
[0064]
对比例2：
[0065]
设备型号：岛津高效液相色谱仪lc-16
[0066]
色谱柱：ic 5μm4.6mm
×
250mm；
[0067]
流动相：0.01％tfa正己烷溶液为流动相a；0.01％tfa异丙醇溶液为流动相b；
[0068]
柱温：30℃；流速：1.0ml/min；检测波长为254nm，进样体积10μl
[0069]
样品制备：称取fmoc-l-thr(tbu)-ol 10mg，fmoc-d-thr(tbu)-ol 1mg，fmoc-l-allo-thr(tbu)-ol 1mg，fmoc-d-allo-thr(tbu)-ol 1mg加入10ml容量瓶，用无水乙醇定容，摇动溶解，得到澄清透明溶液；
[0070]
将该澄清透明溶液作为供试品溶液，将流动相a和流动相b在不同的时间采用不同的比例进行，从而对供试品中各成分进行洗脱，并采用面积归一化法确定所述供试品中成分的出峰位置和含量；其中，流动相a和流动相b在不同的时间按照不同比例进行混合的具体形式见表7。
[0071]
表7流动相随时间变化的体积比
[0072][0073]
采用表7的检测条件，获得对应的色谱图，如图5所示，图5对应的峰表如表8所示。
[0074]
表8流动相随时间变化的峰表
[0075]
峰表
[0076]
检测器a 254nm
[0077]
峰#保留时间面积高度面积％高度％分离度(usp)17.899314071051681253100.000100.000
‑‑
总计314071051681253100.000100.000
[0078]
从图5以及表8发现，供试品中含有4个成分，只有1个样品峰，出现重合。因此，该对比例方法不能达到预期效果。
[0079]
对比例3：
[0080]
色谱柱：ic 5μm 4.6mm
×
250mm；
[0081]
流动相：0.01％tfa正己烷溶液为流动相a；0.01％tfa异丙醇溶液为流动相b；
[0082]
柱温：30℃；流速：1.0ml/min；检测波长为254nm，进样体积10μl
[0083]
样品制备：称取fmoc-thr(tbu)-ol 10mg，fmoc-d-thr(tbu)-ol 1mg，fmoc-l-allo-thr(tbu)-ol 1mg，fmoc-d-allo-thr(tbu)-ol 1mg加入10ml容量瓶，用无水乙醇定容，摇动溶解，得到澄清透明溶液；
[0084]
将该澄清透明溶液作为供试品溶液，将流动相a和流动相b以不同的时间按照不同的比例进行混合，从而对供试品各成分进行洗脱，并采用面积归一化法确定所述供试品中成分的出峰位置和含量，其中，流动相a和流动相b在不同的时间按照不同比例进行混合的具体形式见表9。
[0085]
表9流动相随时间变化的体积比
[0086]
[0087]
采用表9的检测条件，获得对应的色谱图，如图6所示，图6对应的峰表如表10所示。
[0088]
表10流动相随时间变化的峰表
[0089]
峰表
[0090]
检测器a 254nm
[0091]
峰#保留时间面积高度面积％高度％分离度(usp)18.311268325341367475100.000100.000
‑‑
总计 268325341367475100.000100.000 [0092]
从图6以及表10发现，运行60分钟，供试品中含有4个成分，只有1个样品峰，出现重合。因此，该对比例方法不能达到预期效果。
[0093]
对比例4：
[0094]
设备型号：岛津高效液相色谱仪lc-16
[0095]
色谱柱选择：lux-2 5μm 4.6mm
×
250mm；
[0096]
流动相：0.10％tfa水溶液为流动相a，0.10％tfa乙腈溶液为流动相b；
[0097]
柱温：40℃；流速：1.0ml/min；检测波长为220nm，进样体积5μl
[0098]
样品处理：称取fmoc-l-thr(tbu)-ol 5mg，fmoc-d-thr(tbu)-ol 8mg，fmoc-l-allo-thr(tbu)-ol 8mg,fmoc-d-allo-thr(tbu)-ol 8mg加入10ml容量瓶，用乙腈定容，摇动溶解，得到澄清透明溶液；
[0099]
将该澄清透明溶液作为供试品溶液，流动相a和流动相b以不同的时间按照不同的比例进行混合，从而对供试品中各成分进行洗脱，并采用面积归一化法确定所述供试品中成分的出峰位置和含量，其中，流动相a和流动相b在不同的时间按照不同比例进行混合的具体形式见表11。
[0100]
表11流动相随时间变化的体积比
[0101][0102]
采用表11的检测条件，获得对应的色谱图，如图7所示，图7对应的峰表如表12所示。
[0103]
表12流动相随时间变化的峰表
[0104]
峰表
[0105]
检测器a ch1 220nm
[0106]
峰#保留时间面积高度面积％高度％分离度129.195388391816506415.48617.9160.000229.7802119658775626684.51482.0840.554总计 25080505921330100.000100.000 [0107]
从图7以及表12发现，供试品中含有4个成分，只有2个样品峰，出现重合，且分离度只有0.55。因此，该对比例方法无效，不能达到预期效果。
[0108]
对比例5：
[0109]
设备型号：岛津高效液相色谱仪lc-16
[0110]
色谱柱：lux-2 5μm 4.6mm
×
250mm；
[0111]
流动相：0.10％tfa水溶液为流动相a，0.10％tfa乙腈溶液为流动相b；
[0112]
柱温：35℃；流速：1.0ml/min；检测波长为220nm，进样体积5μl
[0113]
样品制备：fmoc-l-thr(tbu)-ol 5mg，fmoc-d-thr(tbu)-ol 10mg，fmoc-l-allo-thr(tbu)-ol 10mg,fmoc-d-allo-thr(tbu)-ol 10mg加入10ml容量瓶，用乙腈定容，摇动溶解，得到澄清透明溶液；
[0114]
将该澄清透明溶液作为供试品溶液，将流动相a和流动相b以不同的时间按照不同的比例进行混合，从而对供试品中的各成分进行洗脱，并采用面积归一化法确定所述供试品中各成分的出峰位置和含量。其中，流动相a和流动相b在不同的时间按照不同比例进行混合的具体形式见表13。
[0115]
表13流动相随时间变化的体积比
[0116][0117]
采用表13的检测条件，获得对应的色谱图，如图8所示，图8对应的峰表如表14所示。
[0118]
表14流动相随时间变化的峰表
[0119]
峰表
[0120]
检测器a ch1 220nm
[0121][0122]
从图8以及表14发现，供试品中含有4个成分，只有2个样品峰，出现重合，且分离度只有0.624。因此，该对比例方法无效，不能达到预期效果。
[0123]
对比例6：
[0124]
设备型号：岛津高效液相色谱仪lc-16
[0125]
色谱柱：lux-2 5μm 4.6mm
×
250mm；
[0126]
流动相：0.10％tfa水溶液为流动相a，0.10％tfa乙腈溶液为流动相b；
[0127]
柱温：35℃；流速：0.8ml/min；检测波长为220nm，进样体积5μl
[0128]
样品制备：fmoc-l-thr(tbu)-ol 5mg，fmoc-d-thr(tbu)-ol 8mg，fmoc-l-allo-thr(tbu)-ol 8mg，fmoc-d-allo-thr(tbu)-ol 8mg加入10ml容量瓶，用乙腈定容，摇动溶解，得到澄清透明溶液。
[0129]
将该澄清透明溶液作为供试品溶液，将流动相a和流动相b在不同的时间按照不同的比例进行混合，从而对供试品中各成分进行洗脱，并采用面积归一化法确定所述供试品中各成分的出峰位置和含量，其中，流动相a和流动相b在不同的时间按照不同比例进行混
合的具体形式见表15。
[0130]
表15流动相随时间变化的体积比
[0131][0132]
采用表15的检测条件，获得对应的色谱图，如图9所示，图9对应的峰表如表16所示。
[0133]
表16流动相随时间变化的峰表
[0134]
峰表
[0135]
检测器a ch1 220nm
[0136]
峰#保留时间面积高度面积％高度％分离度145.046810707832677917.18719.0380.000245.67939062329138968082.81380.9620.780总计471694071716459100.000100.000
[0137]
从图9以及表16发现，供试品中含有4个成分，只有2个样品峰，出现重合，且分离度只有0.78。因此，该对比例方法无效，不能达到预期效果。
[0138]
对比例7：
[0139]
设备型号：岛津高效液相色谱仪lc-16
[0140]
色谱柱：lux-2 5μm 4.6mm
×
250mm；
[0141]
流动相：0.10％tfa水溶液为流动相a，0.10％tfa乙腈溶液为流动相b；
[0142]
柱温：35℃；流速：0.5ml/min；检测波长为220nm，进样体积5μl
[0143]
样品制备：fmoc-l-thr(tbu)-ol 5mg，fmoc-d-thr(tbu)-ol 8mg，fmoc-l-allo-thr(tbu)-ol 8mg，fmoc-d-allo-thr(tbu)-ol 8mg加入10ml容量瓶，用乙腈定容，摇动溶解，得到澄清透明溶液。
[0144]
将该澄清透明溶液作为供试品溶液，将流动相a和流动相b在不同的时间按照不同的比例进行混合，从而对供试品中各成分进行洗脱，并采用面积归一化法确定所述供试品中各成分的出峰位置和含量，其中，流动相a和流动相b在不同的时间按照不同比例进行混合的具体形式见表17。
[0145]
表17流动相随时间变化的体积比
[0146][0147]
采用表17的检测条件，获得对应的色谱图，如图10所示，图10对应的峰表如表18所示。
[0148]
表18流动相随时间变化的峰表
[0149]
峰表
[0150]
检测器a ch1 220nm
[0151]
峰#保留时间面积高度面积％高度％分离度133.661893295024346516.51118.7180.000234.57645169758105724383.48981.2820.697总计541027081300708100.000100.000
[0152]
从图10以及表18发现，供试品中含有4个成分，只有2个样品峰，出现重合，且分离度只有0.697。因此，该对比例方法无效，不能达到预期效果。
[0153]
对比例8：
[0154]
设备型号：岛津高效液相色谱仪lc-16
[0155]
色谱柱：lux-2 5μm 4.6mm
×
250mm；
[0156]
流动相：0.10％tfa水溶液为流动相a，0.10％tfa乙腈溶液为流动相b；
[0157]
柱温：35℃；流速：0.4ml/min；检测波长为254nm，进样体积5μl
[0158]
样品制备：fmoc-l-thr(tbu)-ol 6mg，fmoc-d-thr(tbu)-ol 10mg，fmoc-l-allo-thr(tbu)-ol 10mg，fmoc-d-allo-thr(tbu)-ol 10mg加入10ml容量瓶，纯乙腈定容，摇动溶解，得到澄清透明溶液。
[0159]
将该澄清透明溶液作为供试品溶液，将流动相a和流动相b以不同的时间按照不同的比例进行混合，从而对供试品中各成分进行洗脱，并采用面积归一化法确定所述供试品中各成分的出峰位置和含量；其中，流动相a和流动相b在不同的时间采用不同比例进行混合的具体形式见表19。
[0160]
表19流动相随时间变化的体积比
[0161][0162]
采用表19的检测条件，获得对应的色谱图，如图11所示，图11对应的峰表如表20所示。
[0163]
表20流动相随时间变化的峰表
[0164]
峰表
[0165]
检测器a ch1 220nm
[0166]
峰#保留时间面积高度面积％高度％分离度154.4171174644517162816.46917.9890.000256.2545957781778241783.53182.0110.892总计71324262954044100.000100.000
[0167]
从图11以及表20发现，供试品中含有4个成分，只有2个样品峰，出现重合，且分离度只有0.892。因此，该对比例方法无效，不能达到预期效果。
[0168]
综上，本发明提供的分离检测方法，能有效分离开fmoc-l-thr(tbu)-ol，fmoc-d-thr(tbu)-ol，fmoc-allo-thr(tbu)-ol，fmoc-d-allo-thr(tbu)-ol，并且分离度达到1.5以上；该方法的精密度良好，检测结果准确可靠；而且，本发明提供的方法能够在较短时间内一次性检测出n-芴甲氧羰基-o-叔丁基-l-苏氨醇及其相关的手性杂质，该方法能够节约检测时间和成本，能够更好地控制产品质量，从而为企业创造更大收益。
[0169]
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

技术特征：
1.一种分离检测氨基酸衍生物及其相关杂质的方法，其特征在于，包括：将氨基酸衍生物与3种相关杂质加入容量瓶，用乙腈定容，摇动溶解，得到澄清透明溶液；采用hplc对澄清透明溶液进行检测，利用lux-2手性柱作为分离载体，将流动相a和流动相b在不同的时间按照不同的比例混合得到对应不同的流动相，对所述澄清透明溶液进行洗脱，并采用面积归一化法确定所述澄清透明溶液中每种物质的出峰位置以及每种物质对应的含量；将流动相a和流动相b在不同的时间按照不同的比例进行混合，包括以1.0ml/min的流速为基准，将流动相a和流动相b以40:60的体积比作为初始体积比，在一定时间内，将所述流动相a和流动相b的体积逐渐调整至终极体积比，以所述终极体积比对应的流动相作为终极流动相。2.根据权利要求1所述的分离检测氨基酸衍生物及其相关杂质的方法，其特征在于，所述一定时间为50min，所述终极体积比为20:80。3.根据权利要求1或2所述的分离检测氨基酸衍生物及其相关杂质的方法，其特征在于，所述流动相a为0.10％tfa水溶液，所述流动相b为0.10％tfa乙腈溶液。4.根据权利要求3所述的分离检测氨基酸衍生物及其相关杂质的方法，其特征在于，所述色谱柱的尺寸为5μm4.6mm
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250mm，柱温为35℃。5.根据权利要求3所述的分离检测氨基酸衍生物及其相关杂质的方法，其特征在于，检测波长为220nm，进样体积5μl。6.根据权利要求1所述的分离检测氨基酸衍生物及其相关杂质的方法，其特征在于，所述氨基酸衍生物与3种相关杂质分别为：fmoc-l-thr(tbu)-ol、fmoc-d-thr(tbu)-ol、fmoc-l-allo-thr(tbu)-ol、fmoc-d-allo-thr(tbu)-ol。

技术总结
本发明提供一种分离检测氨基酸衍生物及其相关杂质的方法，包括：将氨基酸衍生物与3种相关杂质加入容量瓶，用乙腈定容，摇动溶解，得到澄清透明溶液；采用HPLC对澄清透明溶液进行检测，利用LUX-2手性柱作为分离载体，将流动相A和流动相B在不同的时间按照不同的比例进行混合，对所述澄清透明溶液进行洗脱，并采用面积归一化法确定所述澄清透明溶液中每种物质的出峰位置以及每种物质对应的含量；该方法能够在短时间内一次性将主成分与3种相关杂质进行有效分离检测。行有效分离检测。行有效分离检测。


技术研发人员：郑征 白彩红 杨强 胡俊华 苟莉 谢波
受保护的技术使用者：成都郑源生化科技有限公司
技术研发日：2023.03.29
技术公布日：2023/8/14