用于64Cu-DOTATATE放大规模的放射性标记和制剂的制作方法

用于64cu-dotatate放大规模的放射性标记和制剂
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求于2020年9月3日提交的美国临时申请第63/074,451号的优先权，所述申请的全文在法律允许的情况下全部范围内全文通过引用纳入本文中。
技术领域
3.本公开涉及用于放射性标记和纯化
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cu-dotatate的组合物和方法，
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cu-dotatate是一种含有发射正电子的放射性核素的生物共轭物(bioconjugate)化合物。


背景技术：

4.在医学诊断中具有极其重要意义的已知成像技术是正电子发射断层成像(positron emission tomography，pet)、计算机断层成像(computed tomography，ct)、磁共振成像(magnetic resonance imaging，mri)、单光子计算机断层成像(single photon computed tomography，spect)和超声(ultrasound，us)。尽管如今的成像技术已经得到了很好的发展，但其主要依赖于非特异性、宏观、物理、生理或代谢变化，这些变化将病理组织与正常组织区分开来。
5.靶向分子成像(targeting molecular imaging，mi)具有在医学诊断中达到一个新的维度的潜力。“靶向”一词与天然配体或合成配体(粘合剂)在体外或体内与感兴趣的分子(分子靶标)的选择性和高度特异性的结合有关。
6.mi是一门迅速兴起的生物医学研究学科，可以定义为完整生物体内细胞和亚细胞水平的生物过程的可视化表示、表征和量化。这是一个新的多学科领域，其中得到的图像反映在生理真实环境中存在的疾病的体内机制以及细胞和分子途径，而不是确定导致疾病的分子事件。
7.目前已知几种不同的对比度增强剂。它们可以用于功能成像，主要被开发用于pet和spect。经放射性标记的生物活性肽用于诊断成像的应用在核医学中越来越重要。选择性地与特定细胞类型相互作用的生物活性分子可用于将放射性递送到靶组织。例如，经放射性标记的肽具有将放射性核素输送到肿瘤、梗死和感染组织用于诊断成像和放射治疗的巨大潜力。
8.dota(1,4,7,10-四(羧甲基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷(1,4,7,10-tetrakis(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclo dodecane))及其衍生物构成了生物医学应用的一类重要螯合剂，这是因为它们非常稳定地容纳各种二价和三价金属离子。dota的衍生物之一是dotatate，[(4,7,10-三羧甲基-1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1-基)乙酰基]-(d)-苯丙氨酰基-(l)-半胱氨酰基-(l)-酪胺酰基-(d)-色氨酰基-(l)-赖氨酰基-(l)-苏氨酰基-(l)-半胱氨酰基-(l)-苏氨酸-酰基(2-7)二硫化物([(4,7,10-tricarboxymethyl-1,4,7,10-tetrazacyclododec-1-yl)acetyl]-(d)-phenylalanyl-(l)-cysteinyl-(l)-tyrosyl-(d)-tryptophanyl-(l)-lysyl-(l)-threoninyl-(l)-cysteinyl-(l)-threonine-cyclic(2-7)disulfide)，其可用作靶向试剂。dotatate的化学结构如下所示。
[0009][0010]
一个新兴的领域是在诊断和治疗核肿瘤学的不同领域中使用螯合剂缀合的(conjugated，或共轭的)生物活性肽来用于使用放射性金属进行标记。近年来，有几篇关于用放射性标记的生长抑素类似物进行靶向放射治疗的报道。
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ga-dotatate((dedden s.a.,et al.；j nucl med；2016vol.57no.6 872-878)、
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ga-dotatoc(nicolas,g.p.,et al.；j nucl med；2018vol.59no.6 915-921)、
68
ga-dotanoc(amdrosini v.,et al.；j nucl med；2010vol.51no.5 669-673)是已知的用于net可视化的pet示踪剂，而
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lu-dotatate用于放射性核素治疗(strosberg,j.et al.；n engl j med 2017；376:125-135)。然而，还需要对诊断成像技术(例如pet)具有实用性的进一步的基于肽的化合物。
[0011]
铜-64(
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cu)是一种发射正电子的放射性核素，非常适合用作正电子发射断层成像(pet)的诊断剂。铜-64的12.7小时的半衰期足够长，可以进行生产后的加工、标记和运输，铜-64的0.28mev的平均正电子能量提供了高分辨率图像。重要的是，
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ni(p,n)
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cu反应的大截面允许商业量的生产。pet放射性同位素铜-64(cu-64)已由被放射性标记为螯合肽缀合物dotatate，用于人类的神经内分泌肿瘤的诊断成像。
[0012]
cu-dotatate络合物的完整化学结构尚未通过x射线晶体结构分析确定，但cu-dota络合物已通过x射线结晶分析在结构上确定。在结晶形式中，cu-dota络合物已显示为利用4个氨基氮原子和2个羧酸酯氧原子的6配位的，如下所示。
[0013][0014]
两个羧酸基团是自由的(left free)并且不与铜金属离子配位。因此，预期经由其中一个羧酸以形成连接酰胺键(linking amide bond)的肽的连接不会改变铜与dotatate
肽的配位。
[0015]
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cu-dotatate与生长抑素受体结合，对2型受体(sstr2)具有最高亲和力。其与表达生长抑素受体的细胞(包括过度表达sstr2受体的恶性神经内分泌细胞)结合。
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cu是一种发射正电子(β
+
)的放射性核素，其发射量(emission yield，或发射产额)使得可以进行正电子发射断层摄影(pet)成像。当
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cu的成像能力与dotatate的受体靶向能力相结合时，结果是
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cu dotatate，其是一种放射性药物，能够对表达生长抑素受体的神经内分泌肿瘤(net)成像。
[0016]
如今，
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cu-dotatate在制备现场制备，以用于极少数患者的低总放射性使用。就其自身而言，仍然存在未满足的需求，即提供一种用于制备高纯度
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cu-dotatate的改进工艺，并扩大
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cu-dotatate的放射性标记生产，同时保持足够的稳定性以将药物产品运输到医院中的患者。


技术实现要素：

[0017]
本公开满足了上述需求，并且涉及这样的方法：其提供能够供应商业量的经铜标记的药物产品
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cu-dotatate的有用方法。
[0018]
本发明的目的是表明并证实以下发现：在较低温度(≤30℃)下标记铜具有提高药物产品纯度的优点，因为许多其他常见金属杂质实际标记螯合物(如dotatate)的速度明显慢于铜。先前关于铜放射性同位素(即
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cu、
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cu)放射性标记的研究通常在高温(例如40℃至95℃)下进行。高温(升高的温度)用于加快标记过程并确保铜对螯合物的最大放射性标记。一些文献综述已经表明，在室温下进行标记可以获得足够的标记。本公开教导了与其他金属的较慢标记动力学相比，可以使用更快速的铜标记动力学来获得更纯的产品。
[0019]
本文提供了：
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cu-dotatate的制备，监测最终制剂参数及其对
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cu-dotatate稳定性的影响的实验设计(design of experiment，doe)，放大用于制备500mci-2000mci的
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cu-dotatate的实验，
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cu-dotatate在其最终制剂中的稳定性，相对于用于放射性标记的总活性的所使用的dotatate的量的优化，以及
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cu氯化铜溶液的比活性对
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cu-dotatate纯度的影响。
[0020]
例如，本文提供用于放射性标记dotatate的方法，包括使铜-64与包含dotatate的缓冲溶液反应的步骤，其中反应在小于或等于30℃的温度下在少于15分钟内发生，并且反应溶液中dotatate与铜-64的摩尔比为约110:1至约90:1。
[0021]
本文进一步提供制备包含
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cu-dotatate的药物产品的方法，其中所述药物产品通过如下步骤制备：(i)以约0.6μg/ml(μgdotatate/mci铜-64)的浓度用铜-64放射性标记dotatate，并且所述药物产品中铜-64的放射性核素纯度为约99％。
[0022]
本文还提供用于正电子发射断层成像的包含64cu-dotatate的药物产品，其中所述
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cu-dotatate储存在含有148mbq的
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cu-dotatate的单剂量小瓶中，其中，所述药物产品的放射性浓度为约5-15mci/ml，且其中，所述药物产品在稀释后的放射化学纯度≥96％。
附图说明
[0023]
实施方案的前述特征通过参考下文的发明详述并参考附图将更容易理解，其中：
[0024]
图1(a)给出一种一般性放射性标记和配制方案。图1(b)给出本发明的一般性放射
性标记和配制方案。
[0025]
图2给出dotatate和龙胆酸标准溶液的代表性hplc色谱图。
[0026]
图3给出在室温下将等摩尔量的dotatate和cu混合5分钟后，粗(crude)cu-dotatate反应混合物的代表性hplc色谱图。
[0027]
图4给出经分馏的加载溶液(总计12ml)和最终50％etoh洗脱液中的dotatate在12ml/min流速下的回产率。
[0028]
图5给出经分馏的加载溶液(总计18ml)和最终50％etoh洗脱液中的dotatate在18ml/min流速下的回产率。
[0029]
发明详述
[0030]
现在将在本文中全面描述各个方面和实施方案。然而，这些方面和实施方案可以以许多不同的形式体现，并且不应被解释为限制性的；相反，提供这些方案使得本公开将是全面和完整的，并将本公开主题的范围完全传达给本领域技术人员。本文引用的所有出版物、专利和专利申请，无论是在上文还是下文提及，其全文均通过引用的方式纳入本文中。
[0031]
a.定义
[0032]
除非另有定义，否则本文中使用的所有术语和短语都包括该术语和短语在本领域中已经获得的含义，除非从使用该术语或短语的上下文中清楚地表明或明显地表明相反的含义。尽管在本发明的实践或测试中可以使用与本文所述方法和材料类似或等效的任何方法和材料，但现在描述特定的方法和材料。
[0033]
除非另有说明，否则单个数值的使用称为近似值，就好像这些数值前面有“约”或“近似”一词修饰一样。同样，除非另有明确说明，否则本技术中规定的各种范围内的数值，表示为近似值，就好像在所述范围内的最小值和最大值之前都加上了“约”或“近似”。通过这种方式，可以使用高于和低于所述范围的变化来获得与所述范围中的值基本相同的结果。如本文所使用的，当提及数值时，术语“约”和“近似”应具有与所公开的主题最密切相关的本领域的普通技术人员或与所讨论的范围或元素相关的本技术人员为说其具有的简单和普通的含义。从严格的数值边界加宽的量取决于许多因素。例如，可以考虑的一些因素包括元素的关键性和/或给定量的变化将对所要求保护的主题的性能产生的影响，以及本领域技术人员已知的其他考虑因素。本文中使用时，对于不同的数值使用不同的有效数字并不意味着对使用“约”或“近似”这两个词如何起到拓宽特定的数值或范围的作用产生限制。因此，一般来说，“约”或“近似”会拓宽数值。此外，范围的公开旨在作为一个连续的范围，包括最小值和最大值之间的每个值，加上使用术语“约”或“近似”所提供的范围的拓宽作用。因此，本文中对值的范围的叙述仅旨在用作单独引用落在该范围内的每个单独值的简写方法，并且每个单独值纳入说明书中，就好像其在本文中单独叙述每个单独数值一样。
[0034]
术语“药物产品(drug product)”或“64
cu-dotatate注射液”在本文中可互换使用，是指用作放射性诊断剂的最终制剂中的
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cu-dotatate。
[0035]“可选的(optional)”或“可选地(optionally)”或“任选地”是指随后描述的元素、组件或环境可能发生也可能不发生，因此描述包括元素、组件或环境发生的实例和不发生的实例。
[0036]
术语“受试者”或“患者”在本文中可互换使用，是指人类或其他哺乳动物。
[0037]
b.简介
[0038]
本公开涉及用于
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cu-dotatate大规模制备的改进的放射性标记和制剂；图1(a)。
[0039]
正电子发射断层成像(pet)的高分辨率成像模式可用于肿瘤学，以帮助临床医生更好地了解患者的疾病状态并监测治疗效果，从而提供更有效和个性化的护理。一种这样的pet试剂是
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cu-dotatate，其靶向于过度表达生长抑素受体亚型2(sstr2)的神经内分泌肿瘤(net)并使其成像，这可以帮助识别可能受益于受体靶向治疗的患者。成像能力由
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cu提供，
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cu是一种可以使用pet成像的发射正电子的放射性核素(t
1/2
＝12.7h，β
+avg
＝0.28mev，i＝17.6％[表示强度(i)，有时报道为分支比(branching ratio，br)]，而分子的靶向部分是octreotate的改性版本(dota-d-phe-cys-tyr-d-trp-lys-thr-cys-thr，二硫化物环化的cys2-cys7)，一种模拟天然sstr2配体生长抑素的环状肽。这两种功能通过dota连接在一起，dota是一种双功能螯合剂，在捕获
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cu的同时，仍与肽的n末端结合(形成dotatate)。
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cu-dotatate(铜cu 64dotatate)的结构如下。
[0040][0041]
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cu-dotatate的结构(铜cu 64dotatate)
[0042]
dotatate与放射性同位素
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cu的放射性标记最初是在几十年前进行的。在过去的研究中，小批量的
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cu-dotatate仅制备用在低总放射性的制备地点，用于非常有限的用途和数量的患者。最近，放射性标记得到了改进，具有更高的放射性，可扩大(scale up)为商业产品。最终纯化的产物是在高得多的初始总放射性水平下制备的，并且采用改进的配方和纯化方法防止了放射性分解。
[0043]
需要扩大放射性标记和大批量药物的配方，以便能够在全国各地分销所述药物。扩大规模带来了新的问题和难题，以及新的发现和解决方案，以实现大批量的药物。本公开(i)解释了对过去的研究和结果的改进和变化，以及(ii)教导了所进行的研究并将规模扩大至高活性的大批量。
[0044]
已使用的一般放射性标记和配制方案如图1(b)所示。
[0045]
具体而言，本公开教导
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cu的总放射性的显著放大，
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cu可以放射性标记并纯化用于
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cu-dotatate注射药物产品。
[0046]
先前的研究是
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cu的低至中等放射性水平(mci)。本公开将放射性标记时的总放射性放大到》5400mci。挑战在于，实现放射性标记，而不因放射性分解和由于dotatate与除
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cu以外的其他金属的竞争而降解。然后，放射性标记的产物必须迅速纯化并立即稀释到稳定溶液中，以防止放射性分解造成的降解，从而保持所需要的高放射化学纯度
(radiochemical purity，rcp)。
[0047]
在标记后最高达48小时，对纯化的
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cu-dotatate在其最终制剂(在45mg/ml抗坏血酸钠中的5％乙醇)中的稳定性进行评估，并且显示
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cu没有从络合物中显著降解或损失。
[0048]
为了制备
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cu-dotatate，将在稀hcl中的
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cucl2与在含有龙胆酸的乙酸钠缓冲液中的dotatate反应，比例为2μgdotatate/mci。将反应混合物培养，然后纯化到抗坏血酸钠(naoasc)缓冲液中。将得到的
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cu-dotate溶液无菌过滤并用作最终制剂。本文公开的开发工作集中在改进生产设计空间和扩大放射性标记反应以制备≥2ci的
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cu-dotatate。已证实即使在15℃也能在5分钟内进行放射性标记。纯化的产物在高达10000mci的
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cu-dotatate下完成。纯化的产物是用在水中的50％的乙醇获得的(以前的文献表明只有纯乙醇)。事实上，与使用100％乙醇相比，使用在水中的50％的乙醇提高了纯化产物的产率。
[0049]
将纯化的药物产品(2ml)立即稀释成大体积(》20ml；但通常情况下，对于2000-10000mci产物来说在》100ml中)，以防止降解(放射性分解)并保持所要求的rcp》95％。先前的文献将纯化产物稀释至《20ml。
[0050]
最终药物产品在纯化后使用28-122mg/ml抗坏血酸钠和1-5％乙醇稳定长达48小时，rcp》95％。先前的48小时的rcp稳定仅用45mg/ml抗坏血酸钠/5％乙醇实现。
[0051]
初始标记(放射性标记步骤)可以在抗坏血酸钠的存在下实现。
[0052]
令人惊讶的是发现，当在较低的温度(即≤30℃)下标记dotatate时，dotatate对铜的螯合作用比其他金属发生得更快。这种现象可以用来减少最终药物产品中存在的金属杂质的数量。
[0053]
c.
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cu-dotatate本体溶液的制备
[0054]
i.配体
[0055]
在一个实施方案中，配体是dotatate；1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸(1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tretraacetic acid，dota)；3,6,9,15-四氮杂双环[9.3.1]十五碳-1(15),11,13-三烯-3,6,9-三乙酸(3,6,9,15-tetraazabicyclo[9.3.1]pentadeca-1(15),11,13-triene-3,6,9-triacetic acid，pcta)；1,4,7-三氮杂环壬烷-1,4,7-三基三乙酸(1,4,7-triazacyclononane-1,4,7-triyltriacetic acid，nota)或其衍生物。
[0056]
在一个实施方案中，配体以如下量加入反应混合物中：约1μg至约6000μg、约50μg至5000μg、约100μg至4500μg、约200μg至4000μg、约300μg至3000μg、约400μg至2000μg、约500μg至1000μg。在另一个实施方案中，配体以如下量加入反应混合物中：约100μg、约200μg、约300μg、约400μg、约500μg、约600μg、约700μg、约800μg、约900μg、约1000μg、约1100μg、约1200μg、约1300μg、约1400μg、约1500μg、约1600μg、约1700μg、约1800μg、约1900μg、约2000μg、约2100μg、约2200μg、约2300μg、约2400μg、约2500μg、约2600μg、约2700μg、约2800μg、约2900μg、约3000μg、约3100μg、约3200μg、约3300μg、约4400μg、约4500μg、约5000μg、约5500μg或约6000μg。在另一个实施方案中，配体以如下量加入反应混合物：小于约100μg、小于约200μg、小于约300μg、小于约400μg、小于约500μg、约600μg、小于约700μg、小于约800μg、小于约900μg、小于约1000μg、小于约1100μg、小于约1200μg、小于约1300μg、小于约1400μg、小于约1500μg、小于约1600μg、小于约1700μg、小于约1800μg、小于约1900μg、小于约2000μg、小于约2100μg、约2200μg、小于约2300μg、小于约2400μg、小于约2500μg、小于约2600μg、
小于约2700μg、小于约2800μg、小于约2900μg、小于约3000μg、小于约3100μg、小于约3200μg、小于约3300μg、小于约4400μg、小于约4500μg、小于约5000μg、小于约5500μg或小于约6000μg。
[0057]
在另一个实施方案中，配体以如下量使：约0.1ug/mci至约20ug/mci、约0.5ug/mci至约15ug/mci、约1ug/mci-约11ug/mci、约1ug/mci至约8ug/mci、约1ug/mci到约5ug/mci、约1ug/m ci至约3ug/mci或约0.1ug/mci-约1.5ug/mci。在另一个实施方案中，配体以如下量使：约0.1ug/mci、约0.25ug/mci、约0.4ug/mci、约0.5ug/mci、约0.6ug/mci、约0.75ug/mci、约0.8ug/mci、约1ug/mci、约1.25ug/mci、约1.5ug/mci、约1.75ug/mci、约2ug/mci、约2.5ug/mci、约3ug/mci、约3.5ug/mci或约4ug/mci。
[0058]
在一个实施方案中，放射性标记步骤中配体/ml的浓度大于约200ug/ml，大于约250ug/ml、大于约300ug/ml、大于约333ug/ml或大于约400ug/ml。
[0059]
在另一个实施方案中，标记的总配体为约200μg至约6000μg，约500μg至约5000μg、约1000μg至4000μg、约1500μg至3000μg、约2000μg至25000μg、约2000μg-约4000μg、约3000μg-约4000μg。在另一个实施方案中，标记的总配体为约200μg、约300μg、约400μg、约500μg、约600μg、约700μg、约800μg、约900μg、约1000μg、约1100μg、约1200μg、约1300μg、约1400μg、约1500μg、约1600μg、约1700μg、约1800μg、约1900μg、约2000μg、约2100μg、约2200μg、约2300μg、约2400μg、约2500μg、约2600μg、约2700μg、约2800μg、约2900μg、约3000μg、约3100μg、约3200μg、约3300μg、约4000μg、约4500μg、约5000μg、约5500μg或约6000μg。在另一个实施方案中，标记的总配体为小于约500μg、小于约1000μg、小于约1500μg、小于约2000μg、小于约2500μg、小于约3000μg、小于约3500μg、小于约4000μg、小于约约45000μg、小于约5000μg、小于约5500μg、小于约6000μg、小于约6500μg、小于约7000μg、小于约8000μg、小于约9000μg或小于约10000μg。
[0060]
ii、放射性核素
[0061]
在另一个实施方案中，放射性核素是铋-213、铬-51、钴-60、镝-165、铒-169、钬-166、铱-192、铁-59、铅-212、镥-177、钼-99、钯-103、铼-186、铼-188、钐-153、锶-89、锝-99m、氙-133、镱-169、镱-177、钇-90、碳-11、钴-57、铜-64、铜-67、氟-18、镓-67、镓-68、锗-68、铟-111、铷-81、铷-82、锶-82、铊-201等。
[0062]
在另一个实施方案中，
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cucl2以如下量加入反应混合物中(作为
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cu源)：约100mci至约5000mci、约200mci至至约4000mci，从约300mci至约3500mci、约400mci至3000mci的量、约500mci至2500mci或最高达约10000mci。在一个实施方案中，
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cucl2以如下量加入反应混合物中(作为
64
cu源)：约100mci、约200mci，约300mci、约400mci、约500mci、约600mci、约700mci、约800mci、约900mci、约1000mci、约1500mci、约2000mci、约2500mci、约3000mci、约3500mci、约4000mci、约4500mci、约5000mci、约5500mci、约6000mci，约6500mci、约7000mci、约7500mci、约8000mci、约8500mci、约9000mci、约9500mci或约10000mci。在另一个实施方案中，
64
cucl2以如下量加入反应混合物中(作为
64
cu源)：小于约100mci、小于约200mci、小于约300mci、小于约400mci、小于约500mci、小于约600mci、小于约700mci、小于约800mci、小于约900mci、小于约1000mci、小于约1500mci、小于约2000mci、小于约2500mci、小于约3000mci、小于约3500mci，小于约4000mci、小于约4500mci、小于约5000mci、小于约5500mci、小于约6000mci、小于约6500mci、小于约7000mci、小于约
7500mci、小于约8000mci、小于约8500mci、小于约9000mci、小于约9500mci或小于约10000mci。
[0063]
在一个实施方案中，放射性核素以如下量加入反应混合物中：约0.1μg、约0.2μg、约0.3μg、约0.39μg、约0.4μg、约0.44μg、约0.5μg、约0.6μg、约0.7μg、约0.8μg、约0.9μg、约1μg、约1.12μg、约2μg、约3μg、约4μg、约5μg、约6μg、约7μg、约8μg、约9μg或约10μg。
[0064]
在另一个实施方案中，
64
cu以如下量加入反应混合物中：约0.1μg、约0.2μg、约0.3μg、约0.4μg、约0.44μg、约0.5μg、约0.6μg、约0.7μg、约0.8μg、约0.9μg、约1μg、约2μg、约3μg、约4μg、5μg、约6μg、约7μg、约8μg、约9μg或10μg。
[0065]
iii.缓冲溶液
[0066]
在一个实施方案中，用于制备药物产品的本体溶液(bulk solution)的缓冲溶液是乙酸钠缓冲剂、乙酸钠/龙胆酸缓冲剂、抗坏血酸钠缓冲剂、抗坏血酸钠/乙醇缓冲剂、乙酸铵缓冲剂、乙酸铵/龙胆酸缓冲剂、抗坏血酸铵缓冲剂或抗坏血酸铵/乙醇缓冲剂，或任何其他合适的缓冲剂。
[0067]
在一个实施方案中，缓冲剂的浓度为约0.1m、约0.2m、约0.3m、约.4m、约0.5m、约0.6m、约0.7m、约0.8m、约0.9m或约1.0m。在另一个实施方案中，缓冲剂的浓度为约20mg/ml至约200mg/ml、约25mg/ml至约190mg/ml、约30mg/ml至约170mg/ml、约35mg/ml至约160mg/ml、约40mg/ml至约150mg/ml、约45mg/ml至约140mg/ml、约45mg/ml至约122mg/ml、约50mg/ml至约130mg/ml、约60mg/ml到120mg/ml，或约70mg/ml到100mg/ml。在另一个实施方案中，缓冲液的浓度为约4mg/ml、约10mg/ml、约20mg/ml、约25mg/ml、约30mg/ml、约35mg/ml、约40mg/ml、约45mg/ml、约50mg/ml、约60mg/ml、约65％mg/ml、约66％mg/ml、约70mg/ml、约80mg/ml、约90mg/ml、约95％、约100mg/ml、约110mg/ml、约120mg/ml、约122mg/ml、约130mg/ml，约132mg/ml、约140mg/ml、约150mg/ml、约160mg/ml、约170mg/ml、约180mg/ml、约190mg/ml或约200mg/ml。
[0068]
在另一个实施方案中，缓冲剂包含约4mg/ml、约10mg/ml、约15mg/ml、约20mg/ml、约25mg/ml、约30mg/ml、约35mg/ml、约40mg/ml、约45mg/ml、约50mg/ml、约60mg/ml、约70mg/ml、约80mg/ml、约90mg/ml或100mg/ml龙胆酸和约0.1m、约0.2m、约0.3m、约0.33m、约0.4m、约0.5m、约0.6m、约0.7m、约0.8m、约0.9m或约1.0m的乙酸钠。
[0069]
在一个具体实施方案中，缓冲剂是4mg/ml龙胆酸和0.4m乙酸钠的溶液。
[0070]
在另一个实施方案中，缓冲剂包含约4mg/ml、约10mg/ml、约20mg/ml、约25mg/ml、约30mg/ml、约35mg/ml、约40mg/ml、约45mg/ml、约46％mg/ml、约50mg/ml、约60mg/ml、约64.8mg/ml、约66％mg/ml、约70mg/ml、约80mg/ml、约90mg/ml、约100mg/ml抗坏血酸钠和约1％、约2％、约2.8％、约3％、约3.5％，约4％、约5％、约8％、约10％、约15％、约20％、约25％或约30％的etoh。在一个具体实施方案中，缓冲剂是具有45mg/ml抗坏血酸钠和5％etoh的溶液。
[0071]
在另一个实施方案中，缓冲剂包含约4mg/ml、约10mg/ml、约15mg/ml、约20mg/ml、约25mg/ml、约30mg/ml、约35mg/ml、约40mg/ml、约45mg/ml、约50mg/ml、约60mg/ml、约70mg/ml、约80mg/ml、约90mg/ml或100mg/ml龙胆酸和约0.1m、约0.2m、约0.3m、约0.33m、约0.4m、约0.5m、约0.6m，约0.7m、约0.8m、约0.9m或约1.0m的抗坏血酸钠。
[0072]
iv.稳定剂
[0073]
在一个实施方案中，稳定剂是龙胆酸。在另一个实施方案中，稳定剂是抗坏血酸钠。然而，可以使用任何合适的稳定剂。
[0074]
在另一个实施方案中，使用了超过一种的稳定剂。在另一个实施方案中，在放射性标记过程中使用一种稳定剂，例如龙胆酸，并且在最终配制的产品中使用另一稳定剂，例如抗坏血酸钠。
[0075]
在一个实施方案中，稳定剂以约1.0g至约9.0g的量加入。在一个方案中，稳定剂以约2.0mg至约8.0mg的量加入。在另一个实施方案中，稳定剂以约3.0mg至约7.0mg的量加入。在另一个实施方案中，稳定剂以约3.0mg至约5.0mg的量加入。在另一个实施方案中，稳定剂以约4.0mg至约6.0mg的量加入。在一个具体实施方案中，稳定剂以约4.0mg的量加入反应混合物中。
[0076]
在另一个实施方案中，稳定剂以约1.0g至约9.0g的量加入。在另一个实施例中，龙胆酸以约2.0mg至约8.0mg的量加入。在另一实施方案中，龙胆酸以约3.0mg至约7.0mg的量加入。在另一实施方案中，龙胆酸以约3.0mg至约5.0mg的量加入。在另一实施方案中，龙胆酸以约4.0mg至约6.0mg的量加入。在一个具体实施方案中，龙胆酸以约4.0mg的量的加入到反应混合物中。
[0077]
在另一个实施方案中，抗坏血酸钠以约2.0mg至约8.0mg的量加入。在另一种实施方式中，抗坏血酸钠以约3.0mg至约7.0mg的量加入。在另一种实施方案中。抗坏血酸钠以约3.0mg至约5.0mg的量加入。在另一种实施方案中，抗坏血酸酸钠以约4.0mg至约6.0mg的量加入。在一个具体实施方案中，抗坏血酸钠以约4.0mg的量加入到反应混合物中。
[0078]
v.放射性标记条件
[0079]
在一个实施方案中，放射性标记在500mci至15000mci的放射性核素下进行。放射性标记时的放射性浓度≥250mci/ml、≥300ug/ml、≥333mci/ml、≥350mci/ml、≥400mci/ml、≥421mci/ml或≥460mci/ml。标记的总配体为1000-4000μg或浓度≥333μg/ml。
[0080]
在一个实施方案中，放射性标记在500mci至10000mci的放射性核素下进行。放射性标记时的放射性浓度≥333mci/ml。标记的总配体为1000-4000μg或浓度≥333μg/ml。
[0081]
在另一个实施方案中，放射性标记在500mci至2500mci的放射性核素下进行。放射性标记时的放射性浓度≥250mci/ml、≥300ug/ml、≤333mci/ml、≥350mci/ml、≥400mci/ml、≥421mci/ml.或≥460mci/ml。标记的总配体为1000-4000μg或浓度≥333μg/ml。
[0082]
在一个实施方案中，放射性标记在500mci至15000mci 64
cu下进行。放射性标记时的放射性浓度≥250mci/ml、≥300mci/ml、≥333mci/ml、≥350ug/ml、≥400mci/ml、≥421mci/ml或≥460mci/mk。标记的dotatate总量为1000-4000μg或浓度≥333μg/ml。
[0083]
在一个实施方案中，放射性标记在500mci至10000mci 64
cu下进行。放射性标记时的放射性浓度≥333mci/ml。标记的dotatate总量为1000-4000ug或浓度≥333ug/ml。
[0084]
在另一个实施方案中，放射性标记在500mci至2500mci 64
cu下进行。放射性标记时的放射性浓度≥250mci/ml、≥300ug/ml、≥333mci/ml、≥350ug/ml、≥400mci/ml、≥421mci/ml或≥460mci/ml。标记的dotatate总量为1000
–
4000μg或浓度≥333μg/ml。
[0085]
在另一个实施方案中，反应混合物的ph为4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9或7.0。在另一个实施方案中，反应混合物的ph为约4.5至约7.0、约4.6至约6.9、约4.7至约6.8、约4.8至
约6.7、约4.9至约6.6、约5.0至约6.6、约5.1至约6.5、约5.2至约6.3、约5.3至约6.2、约5.4至约6.1或约5.5至约6.0。在一个具体实施方案中，反应混合物的ph为约5至约6。
[0086]
生物共轭物螯合物(例如dota-tate)通常在50-95℃的温度下络合，以确保高的放射化学标记和放射性标记产率。然而，本公开教导，通过在较低的温度(即室温或更低的温度)下进行标记，铜
64
cu-dotatate的纯度得到了改善，这是因为与其他常见金属杂质相比，铜(2+)离子更快地标记到dotatate上。
[0087]
在另一个实施方案中，反应混合物的温度为约10℃至约50℃、约15℃至约45℃、约20℃至约40℃、约10℃至约30℃、约10℃至约20℃、约20℃至约50℃、约20℃至约40℃或约20℃至约30℃。在一个实施方案中，反应混合物的温度为约10℃、约15℃、约20℃、约22℃、约25℃、约30℃、约35℃、约40℃、约45℃或约50℃。在另一个实施方案中，反应混合物的温度是环境温度。
[0088]
在另一个实施方案中，反应混合物的温度低于或等于50℃，低于50℃，低于或等于45℃，低于45℃，低于或等于40℃，低于40℃，低于或等于35℃，低于35℃，低于或等于30℃，低于30℃，低于或等于25℃，低于25℃，低于或等于20℃，低于20℃，低于或等于15℃，低于15℃，低于或等于10℃，或者低于10℃。
[0089]
在一个具体实施方案中，反应混合物中配体与放射性核素的摩尔比为约125:1、约120:1、约115:1、约110:1、约105:1、约100:1、约95:1、约90:1、约85:1、约80:1、约75:1、约70:1、约65:1、约60:1、约55:1、约50:1、约45:1、约40:1、约35:1、约30:1、约25:1、约20:1、约15:1、约10:1、约5:1、约4:1、约3:1、约2:1、约2.5:1或1:1。在另一个实施方案中，反应混合物中配体与放射性核素的摩尔比为约125:1至约75:1。在另一个实施方案中，反应混合物中配体与放射性核素的摩尔比为约105:1至约95:1。在另一个实施方案中，反应混合物中配体与放射性核素的摩尔比为约110:1至约90:1。在另一个实施方案中，反应混合物中配体与放射性核素的摩尔比为约102:1至约99:1。在另外一个实施方案中，反应混合物中配体与放射性核素的摩尔比为约125:1至约1:1、约105:1至约10:1、约102:1至约10:1、约110:1至约50:1、约90:1至约70:1、或约60:1至约1:1、或约110.1至约90:1。
[0090]
在一个具体的实施方案中，反应混合物中dotatate与
64
cu的摩尔比为约125:1、约120:1、约115:1、约110:1、约105:1、约100:1、约95:1、约90:1、约85:1、约80:1、约75:1、约70:1、约65:1、约60:1、约55:1、约50:1、约45:1、约40:1、约35:1、约30:1、约25:1、约20:1、约15:1、约10:1、约5:1、约4:1、约3:1、约2:1、约2.5:1或约1:1。在另一个实施方案中，反应混合物中dotatate与
64
cu的摩尔比为约约105:1至约95:1。在另一个实施方案中，反应混合物中dotatate与
64
cu的摩尔比为约102:1至约99:1。在另外一个实施方案中，反应混合物中dotatate与
64
cu的摩尔比为约125:1至约1:1、约105:1至约10:1、约102:1至约10:1、约110:1至约50:1、约90:1至约70:1或约60:1至约1:1或约110.1至约90:1。
[0091]
在一个实施方案中，配体的质量(μg)与放射性核素的放射性(mci)之比为约5:1、约4:1、约3:1、约2:1或约1:1。在另一个实施方案中，对于每个反应，配体的质量(μg)与放射性核素(mci)浓度的放射性之比为约1.0μg/mci、约0.9μg/mci、约0.8μg/mci、约0.7μg/mci、约0.6μg/mci、约0.5μg/mci、约0.4μg/mci、约0.3μg/mci、约0.2μg/mcis或0.1μg/mci。在另一个实施方案中，对于每个反应，配体的质量(μg)与放射性核素的放射性(mci)之比为约0.6μg/mci。
[0092]
在一个实施方案中，配体质量(μg):
64
cu(mci)的放射性之比约为5:1、约4:1、约3:1、约2:1或约1:1。在另一个实施方案中，对于每个反应，配体的质量(μg)与放射性核素的放射性(mci)之比为约1.0μg/mci、约0.9μg/mci、约0.8μg/mci、约0.7μg/mci、约0.6μg/mci、约0.5μg/mci、约0.4μg/mci、约0.3μg/mci、约0.2μg/mci或0.1μg/mci。在另一个实施方案中，对于每个反应，配体的质量(μg)与放射性核素的放射性(mci)之比为约0.6μg/mci。
[0093]
在一个实施方案中，dotatate的质量(μg)与
64
cu(mci)的放射性之比为约5:1、约4:1、约3:1、约2:1或约1:1。在另一个实施方案中，对于每个反应，dotatate的质量(μg)与
64
cu(mci)浓度的放射性之比为约1.0μg/mci、约0.9μg/mci、约0.8μg/mci、约0.7μg/mci、约0.6μg/mci、约0.5μg/mci、约0.4μg/mci、约0.3μg/mci、约0.2μg/mci或约0.1μg/mci。在另一个实施方案中，对于每个反应，dotatate的质量(μg)与
64
cu(mci)浓度的放射性之比为约0.6μg/mci。
[0094]
在一个实施方案中，药物物质(drug substance)本体溶液的放射性为约1mci至约10000mci、约1mci至约9,900mci、约1mci至约9,800mci、约1mci至约9,700mci、约1mci至约9600mci、约1mci至约9,500mci、约1mci至约9,400mci、约1mci至约9,300mci、约1mci至约9,200mci、约1mci至约9,100mci、约1mci至约9,000mci、约1mci至约8,900mci、约1mci至约8,800mci、约1mci至约8,700mci、约1mci至约8,600mci、约1mci至8,500mci、约1mci至约8,400mci、约1mci约8,300mci、约1mci至约8,200mci、约1mci至约8,100mci、约1mci至约8,000mci、约1mci至约7,900mci、约1mc1至约7,800mci、约1mci至约7,700mci、约1mci至约7,600mci、约1mci至约7,500mci、约1mci至约7,400mci、约1mci至约7,300mci、约1mci至约7,200mci、约1mci至约7,100mci、约1mci至约7,000mci、约1mci至约6,900mci、约1mci至约6,800mci、约1mci至约6,700mci、约1mci至约6,600mci、约1mci至约6,500mci、约1mci至约6,400mci、约1mci至约6,300mci、约1mci至约6,200mci、约1mci至约6,100mci、约1mci至约6,000mci、约1mci至约5,900mci、约1mci至约5,800mci、约1mci至约5,700mci、约1mci至约5,600mci、约1mci至5,500mci、约1mci至约5,400mci、约1mci约5,300mci、约1mci至约5,200mci、约1mci至约5,100mci、约1mci至约5,000mci、约1mci至约4,900mci、约1mci至约4,800mci、约1mci至约4,700mci、约1mci至约4,600mci、约1mci至约4,500mci、约1mci至约4,400mci、约1mci到约4,300mci、约1mci至约4,200mci、约1mci至约4,100mci、约1mci至约4,000mci、约1mci至约3,900mci、约1mci至约3,800mci、约1mci至约3,700mci、约1mci至约3,600mci至、约1mci约3,500mci、约1mci至约3,400mci、约1mci至约3,300mci、约1mci至约3,200mci、约1mci至约3,100mci、约1mci至约3,000mci、约10mci至约2,900mci、约20mci至约2,800mci、约30mci至约2,700mci、约40mci至2,600mci、约50mci至2,500mci、约60mci至2,400mci、约70mci至2,300mci、约80mci至约2,200mci、约90mci至约2,100mci、约100mci至约2,000mci、约150mci至约3,000mci、约200mci至约2,500mci、约250mci至约2,000mci、约300mci至约1,500mci、约400mci至约1,000mci或约500mci至约750mci。
[0095]
在另一个实施方案中，药物物质的本体溶液的放射性为约1mci、约20mci、约40mci、约60mci、约80mci、约100mci、约120mci、约140mci、160mci、约200mci、约220mci、约240mci、约260mci、约280mci、约300mci、约320mci、约340mci、约360mci、约380mci、约400mci、约420mci、约440mci、约460mci、约480mci、约500mci、约550mci、约600mci、约650mci、约700mci、约750mci、约800mci、约850mci、约900mci、约950mci、约1,000mci、约1,
100mci、约1,200mci、约1,300mci、约1,400mci、约1,500mci、约1,600mci、约1,700mci、约1,800mci、约1,900mci、约2,000mci、约2,100mci、约2,200mci、约2,300mci，约2,400mci、约2,500mci、约2,600mci、约2,700mci、约2,800mci、约2,900mci、约3,000mci、约3,100mci、约3,200mci、约3,300mci、约3,400mci、约3,500mci、约3,600mci、约3,700mci、约3,800mci、约3,900mci、约4,000mci、约4,100mci、约42,00mci、约4,300mci、约4,400mci、约4,500mci、约4,600mci、约4,700mci、约4,800mci、约4,900mci、约5,000mci、约5,100mci、约5,200mci、约5,300mci、约5,400mci、约5,500mci、约5,600mci、约5,700mci、约5,800mci、约5,900mci、约6,000mci、约6,100mci、约6,200mci、约6,300mci、约64,00mci、约6,500mci、约6,600mci、约6,700mci、约6,800mci、约6,900mci、约7,000mci、约7,100mci、约7,200mci、约7,300mci、约7,400mci、约7,500mci、约7,600mci、约7,700mci、约7,800mci、约7,900mci、约8,000mci、约8,100mci、约8,200mci、约8,300mci、约8,400mci、约8,500mci、约,8600mci、约8,700mci、约8,800mci、约8,900mci、约9,000mci、约9,100mci、约9,200mci、约9,300mci、约9,400mci、约9,500mci、约9,600mci、9,700mci、约9,800mci、约9,900mci或约10,000mci。在一个具体的实施方案中，药物物质的本体溶液的放射性为约100mci、约500mci、约1,000mci、约2,000mci、约3,000mci、约4,000mci、约5,000mci、约6,000mci、约7,000mci、约8,000mci、约9,000mci或约10,000mci。
[0096]
在一个实施方案中，放射性核素溶液的体积为约0.1ml至约10ml、约0.2ml至约9ml、约0.3ml至约8ml、约0.4ml至约7ml、约0.5ml至约6ml、约1ml至约5ml、约2ml至约4ml。在另一个实施方案中，放射性核素溶液的体积为约0.1ml、约0.2ml、约0.3ml、约0.4ml、约0.5ml、约1ml、约2ml、约3ml、约4ml、约5ml、约6ml、约7ml、约8ml、约9ml或约10ml。在一个实施方案中，
64
cu溶液的体积为约0.1ml至约10ml，约0.2ml至约9ml，约0.3ml至约8ml，约0.4ml至约7ml，约0.5ml至约6ml，约1ml至约5ml，约2ml至约4ml。在另一个实施方案中，
64
cu溶液的体积为约0.1ml、约0.2ml、约0.3ml、约0.4ml、约0.5ml、约1ml、约2ml、约3ml、约4ml、约5ml、约6ml、约7ml、约8ml、约9ml或约10ml。
[0097]
在另一个实施方案中，放射性标记溶液中的体积为约0.1ml至约10ml、约0.5ml至约9ml、约1ml至约7ml、约1.5ml至约6ml、约0.5ml至约6ml、约1ml至约5ml、约2ml至约4ml。在另一个实施方案中，放射性标记溶液中的体积为约0.1ml、约0.2ml、约0.3ml、约0.4ml、约0.5ml、约1ml、约1.5ml、约2ml、约3ml、约4ml、约5ml、约6ml、约7ml、约8ml、约9ml或约10ml。
[0098]
在另一个实施方案中，反应时间为约1分钟、约2分钟、约3分钟、约4分钟、约5分钟、约6分钟、约7分钟、约8分钟、约9分钟、约10分钟、约15分钟、约20分钟、约25分钟、约30分钟、约45分钟、约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时或约10小时，反应时间为约1分钟至约24小时、约1分钟至约18小时、约1分钟至约12小时或约1分钟至约6小时。在另一个实施方案中，反应时间为约1分钟至约60分钟、约2分钟至约45分钟或约5分钟至约30分钟。
[0099]
在另一个实施方案中，最终制剂中抗辐解剂的浓度为29-122mg/ml+1-5％乙醇。
[0100]
在另一个实施方案中，加入反应混合物中的非放射性铜的量为0-30μg/ml(ppm)。在另一个实施方案中，加入反应混合物中的非放射性铜的量为0.1-30μg/ml(ppm)。
[0101]
d.
64
cu-dotatate本体溶液的纯化
[0102]
在另一个实施方案中，金属配体本体溶液使用c-18light sep pak或任何合适的
纯化系统/柱。
[0103]
在一个实施方案中，纯化中的洗脱溶剂为乙醇，约5％乙醇(95％水)、约10％乙醇(90％水)、约15％乙醇(85％水)、约20％乙醇(80％水)、约25％乙醇(75％水)、约30％乙醇(70％水)、约35％乙醇(65％水)、约40％乙醇(60％水)、约45％乙醇(55％水)、约50％乙醇(50％水)、约55％乙醇(45％水)、约60％乙醇(40％水)、约65％乙醇(35％水)，70％乙醇(30％水)、约75％乙醇(25％水)、约80％乙醇(20％水)、约85％乙醇(15％水)、约90％乙醇(10％水)、约95％乙醇(5％水)或100％乙醇。
[0104]
在另一个实施方案中，来自纯化步骤的溶剂的体积为约0.1ml至约10ml、约0.5ml至约9ml、约1ml至约7ml、约1.5ml至约6ml、约0.5ml至约6ml、约1ml至约5ml、约2ml至约4ml。在另一个实施方案中，来自纯化步骤的溶剂的体积为约0.1ml、约0.2ml、约0.3ml、约0.4ml、约0.5ml、约1ml、约1.5ml、约2ml、约3ml、约4ml、约5ml、约6ml、约7ml、约8ml、约9ml或约10ml。
[0105]
在另一个实施方案中，药物产品中
64
cu的放射性核素纯度为≥99％、≥99.1％、≥99.2％、≥99.3％、≥99.4％、≥99.5％、≥99.6％、≥99.7％、≥99.8％或≥99.9％。
[0106]
在另外一个实施方案中，药物产品中放射性核素杂质的量为≤1％、≤0.9％、≤0.8％、≤0.7％、≤0.6％、≤0.5％、≤0.4％、≤0.3％、≤0.2％或≤0.1％。在另一个实施方案中，药物产品中一种单一(one single)放射核素杂质的量为≤0.1％、≤0.09％、≤0.08％、≤0.07％、≤0.06％、≤0.05％、≤0.04％、≤0.03％、≤0.02％或≤0.01％。
[0107]
在一个实施方案中，药物产品中放射化学纯度为作为铜cu 64dotatate的≥90％、≥91％、≥92％、≥93％、≥94％、≥95％、≥96％、≥97％、≥98％、≥99％、≥99.1％、≥99.2％、≥99.3％、≥99.4％、≥99.5％、≥99.6％、≥99.7％、≥99.8％或≥99.9％。
[0108]
在一个实施方案中，纯度是使用高效液相色谱仪(high performance liquid chromatograph，hplc)或任何其他可接受或合适的技术测量的。
[0109]
在另一个实施方案中，龙胆酸以≤50ppm、≤40ppm、≤30ppm、≤20ppm、≤10ppm、≤5ppm或≤1ppm的量存在于药物产品中。
[0110]
在一个实施方案中，单一杂质以药物产品中dotatate和相关物质的≤1％、≤0.9％、≤0.8％、≤0.7％、≤0.6％、≤0.5％、≤0.4％、≤0.3％、≤0.2％或≤0.1％的量存在。
[0111]
在另一个实施方案中，总杂质以药物产品中dotatate和相关物质的≤10％、≤9％、≤8％、≤7％、≤6％、≤5％、≤4％、≤3％、≤2％、≤1％、≤0.9％、≤0.8％、≤0.7％、≤0.6％、≤0.5％、≤0.4％、≤0.3％、≤0.2％或≤0.1％的量存在。
[0112]
在另一个实施方案中，药物产品中存在的细菌内毒素的量为≤100eu/ml、≤90eu/ml、≤80eu/ml、≤70eu/ml、≤60eu/ml、≤50eu/ml、≤40eu/ml、≤39eu/ml、≤30eu/ml、≤20eu/ml、≤10eu/ml、≤9eu/ml、≤8eu/ml、≤7eu/ml、≤6eu/ml、≤5eu/ml、≤4eu/ml、≤3eu/ml、≤2eu/ml或≤1eu/ml。
[0113]
f.药物产品(
64
cu-dotatate注射液)
[0114]
本文公开的药物产品适用于正电子发射断层成像(pet)，用于成年患者中生长抑素受体阳性神经内分泌肿瘤(net)的定位。
[0115]
i.化学特性
[0116]
本文所述的药物产品含有
64
cu-dotatate铜，这是一种用于pet成像的放射性诊断药物。在化学上，
64
cu-dotatate描述为铜(cu64)-n-[(4,7,10-三羧甲基-1,4,7,10-四氮杂环十二烷基-1-基)乙酰基]-d苯丙氨酰基-l-半胱氨酰基-l-酪胺酰基-d-色氨酰基-l-赖氨酰基-l-苏氨酰基-l-半胱氨酰基-l-苏氨酰基-环(2-7)二硫化物(copper(cu64)-n-[(4,7,10-tricarboxymethyl-1,4,7,10-tetraazacyclododec-1-yl)acetyl]-dphenylalanyl-l-cysteinyl-l-tyrosyl-d-tryptophanyl-l-lysyl-l-threoninyl-l-cysteinyl-l-threonine-cyclic(2-7)disulfide)。分子量为1497.2道尔顿，以下为一种异构形式的结构式：
[0117][0118]
该药物产品是一种无菌、透明、无色至黄色的静脉注射用溶液。在校准日期和时间，每个10ml单剂量小瓶在4ml溶液体积中含有148mbq(4mci)的
64
cu-dotatate。此外，每ml溶液含有40mg抗坏血酸、0.05ml无水酒精，注射用无菌水中的usp(乙醇)、usp。ph用氢氧化钠、盐酸调节，ph在约5.5至7.5之间。
[0119]
ii.物理特性
[0120]
表1和表2提供
64
cu的主要辐射发射数据和物理衰变。
64
cu半衰期t
1/2
＝12.7小时，通过以下组合衰变：(a)17.6％的正电子发射到
64
ni，这使得两个511kev湮灭光子发射(35.7％)，(b)38.5％的β衰变至
64
zn，和(c)43.8％的电子捕获至
64
ni。cu-64的衰变还使得强度为约0.48％的特征1346kev伽马射线的发射。
[0121]
药物产品的伽马发射谱在约511kev和约1346kev处显示峰。
[0122]
表1.主要辐射发射数据(》1％)
[0123][0124]
表2.
64
cu的物理衰变表
[0125]
小时剩余份数小时剩余份数01180.374
1.0.94724(1天)0.2703.0.84936(1.5天)0.1406.0.72148(2天)0.07390.61272(3天)0.020120.52096(4天)0.005
[0126]
iii.外部辐射
[0127]
伽马常数：在1米处3.6x10-5
msv/hr/mbq(在1米处0.133mrem/hr/mci)。表3示出铅屏蔽
64
cu的辐射衰减。
[0128]
表3.铅屏蔽
64
cu的辐射衰减
[0129][0130]
在一个实施方案中，药物产品在约15℃至约30℃、约15℃至约25℃、约15℃至约20℃或约20℃至约30℃的温度下储存。在另一个实施方案中，药物产品在约10℃、约15℃、约20℃、约22℃、约25℃或约30℃的温度下储存。在另一个实施方案中，将药物产品在约20℃至约25℃的受控室温下储存。
[0131]
在另一个实施方案中，药物产品在约30℃至约60℃、约35℃至约55℃、约40℃至约50℃或约50℃至约60℃的温度下储存。在另一个实施方案中，药物产品在约30℃、约35℃、约40℃、约45℃、约50℃、约55℃或约60℃的温度下储存。在另一个实施方案中，药物产品在约50℃至约55℃的温度下储存。
[0132]
放射化学特性可以使用hplc确认。
64
cu-dotatate的hplc相对保留时间(relative retention time，rrt)与dotatate标准品的相对保留时间相关。在一个实施方案中，
64
cu-dotatate的hplc rrt为约1至约2或约1.15至约1.25。
[0133]
放射性核素的特性可以使用伽马发射光谱法确认。药物产品的伽马发射光谱在约511kev和约1346kev处显示峰。
[0134]
在一个实施方案中，药物产品的溶液体积为约1ml至约10ml、约2ml至约9ml、约3ml至约7ml、约4ml至约6ml或约3ml至约6ml。在另一个实施方案中，药物产品的溶液体积为约1ml、约2ml、约3ml、约4ml、约5ml、约6ml、约7ml、约8ml、约9ml或约10ml。
[0135]
在另一个实施方案中，在校准日期和时间，药物产品是无菌、透明、无色至黄色的在单剂量小瓶中的溶液，该小瓶含有148mbq(4mci)(37mbq(1mci)/1ml)的
64
cu-dotatate。密封小瓶装在屏蔽的(铅)容器中，用于辐射防护。该药物产品以a类包装运输。
[0136]
在一个实施方案中，总小瓶放射性(试验)为约1.0mci/小瓶至约10mci/小瓶、约1.5mci/小瓶至约9mci/小瓶，约2.0mci/小瓶至约8mci/小瓶、约2.5mci/小瓶至约7mci/小瓶、约3.0mci/小瓶装至约6mci/小瓶或约3.6mci/小瓶至约4.4mci/小瓶。在另一个实施方案中，总小瓶放射性(试验)为约1.0mci/小瓶、约1.5mci/小瓶、约2.0mci/小瓶、约2.5mci/
小瓶、约3.0mci/小瓶中、约3.5mci/小小瓶、约3.6mci小瓶、约4.0mci/小瓶体，约4.4mci/小瓶、约4.5mci/小瓶、约5.0mci/小瓶、约5.5mci/小瓶、约6mci/小瓶、约7mci/小瓶、约8mci/小瓶、约9mci/小瓶或约10mci/小瓶。
[0137]
在另一个实施方案中，药物产品的放射性浓度为约0.5mci/ml至约15mci/ml、约0.5mci/ml至约12.5mci/ml，约0.5mci/mml至约10mci/ml和约0.5mcimg/ml至约7.5mci/ml、约0.5mci/ml至至约5mci/ml、约0.5mciml至约3mci/ml、约0.6mciml至约2.5mci/ml、约0.7mci/ml至约2.0mci/ml，约0.8mci/ml到约1.5mci/ml或约0.9mci/ml至约1.1mci/ml。在另一个实施方案中，药物产品的放射性浓度为约15mci/ml、约14mci/ml、约13mci/ml、约12mci/ml、约11mci/ml、约10mci/ml、约9mci/ml、约8mci/ml、约7mci/ml、约6mci/ml或约5mci/ml。在另一个实施方案中，药物产品的放射性浓度为约5-15mci/ml。在另一个实施方案中，药物产品的放射性浓度为约9-14mci/ml。在另一个实施方案中，药物产品的放射性浓度为约10-11mci/ml。在另一个实施方案中，药物产品的放射性浓度为约11-12mci/ml。在另一个实施方案中，药物产品的放射性浓度为约12-13mci/ml
[0138]
在另一个实施方案中，dotatate和相关物质在药物产品中的存在量为≤50ppm、约≤40ppm、约≤30ppm、约≤27ppm、约≤22.7ppm、约≤20ppm或≤10ppm。
[0139]
在一个实施方案中，在校准时间，药物产品的表观比活性为≥10mci/mg、约≥20mci/mg、约≥30mci/mg、约≥40mci/mg、约≥50mci/mg、约≥60mci/mg、约≥70mci/mg.、约≥80mci/mg或≥90mci/mg dotatate和相关物质。
[0140]
在另一个实施方案中，药物产品的平均比活性为约2.96mbq/μg。在另一个实施方案中，药物产品的平均比活性为约1.0mbq/μg至约5.0mbq/μg。在另一个实施方案中，药物产品的平均比活性为约2.0mbq/μg至约4.0mbq/μg。在另一个实施方案中，药物产品的平均比活性为约2.5mbq/μg至约3.5mbq/μg。在另一个实施方案中，在校准时间，药物产品的平均比活性为约0.5mbq/μg、约1.0mbq/μg、约1.5mbq/μg、约2.0mbq/μg、约2.5mbq/μg、约3.0mbq/μg、约3.5mbq/μg、约4.0mbq/μg、约4.5mbq/μg、约5.0mbq/μg、约6.0mbq/μg、约7.0mbq/μg、约8.0mbq/μg、约9.0mbq/μg或约10.0mbq/μg。
[0141]
在另一个实施方案中，小瓶中药物产品的填充体积为约1ml至约10ml、约2ml至约8ml、约3ml至约6ml或约3.6ml至约4.4ml。在另一实施方案中，小瓶中药物产品的填充体积是约1ml、约2m l、约3m l、约3.6ml、约4ml、约4.4ml、约5ml、约6ml、约7ml、约8ml、约9ml或约10ml。
[0142]
在另一个实施方案中，药物产品的ph为约4.5至约8.0、约4.6至约7.9、约4.7至约7.8、约4.8至约7.7、约4.9至约7.6、约5.0至约7.5或约5.5至约7.5。在另一个实施方案中，药物产品的ph为4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4或7.5。
[0143]
在一个实施方案中，药物产品的含量均一性(content uniformity，内容物均一性)为≤10％、≤9％、≤8％、≤7％、≤6％、≤5％、≤4％、≤3％、≤2％、≤1％、≤0.9％、≤0.8％、≤0.7％、≤0.6％、≤0.5％、≤0.4％、≤0.3％、≤0.2％或≤0.1％。
[0144]
在另一个实施方案中，乙醇以约1％至约10％、约2％至约9％、约3％至约8％、约4％至约7％或约4％至6％的量存在于药物产品中。在另一个实施方案中，乙醇以约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％的量存在于药物产品中。
[0145]
在一个实施方案中，药物产品中的抗坏血酸含量为约1mg/ml至约100mg/ml、约10mg/ml至约90mg/ml、约20mg/ml至约80mg/ml、约3mg/ml至约70mg/ml、约40mg/ml至约60mg/ml、约30mg/ml至约60mg/ml或约36mg/ml至约44mg/ml。在另一个实施方案中，药物产品中的抗坏血酸含量为约1mg/ml、约10mg/ml、约15mg/ml、约20mg/ml、约30mg/ml、约36mg/ml、约40mg/ml、约44mg/ml、约50mg/ml、约60mg/ml、约70mg/ml、约80mg/ml、约90mg/ml或约100mg/ml。
[0146]
在一个实施方案中，药物产品中的rcp为≥90％、≥91％、≥92％、≥93％、≥94％、≥95％、≥96％、≥97％、≥98％或≥99％。
[0147]
在另一个实施方案中，药物产品具有约50％、约55％、约56％、约60％、约65％、约68％、约70％、约75％、约80％、约83％、约85％、约90％或约95％的分离的放射化学产率(rcy)(经衰变校正)。
[0148]
在一个实施方案中，对药物产品进行过滤器完整性测试。在另一个实施方案中，对药物产品的无菌性进行测试。
[0149]
iv.药物产品剂量
[0150]
关于本文所使用的药物产品剂量，本公开提供有效量的
64
cu-dotatate，足以使得在需要的受试者中进行正电子发射断层摄影(pet)成像。
[0151]
在一个实施方案中，在校准日期和时间，给予有需要的受试者的药物产品的剂量为约20mbq至约350mbq、约30mbq至约340mbq、约40mbq至约330mbq、约50mbq至约320mbq、约60mbq至约310mbq、约70mbq至约300mbq、约80mbq至约290mbq、约90mbq至约280mbq、约100mbq至约270mbq、约110mbq至约260mbq、约132mbq至约163mbq或约111mbq至185mbq或约120mbq至250mbq。
[0152]
在另一个实施方案中，在校准日期和时间，给予有需要的受试者的药物产品的剂量为约20mbq、约30mbq、约37mbq、约40mbq、约50mbq、约60mbq、约70mbq、约80mbq、约90mbq、约100mbq、约110mbq、约111mbq、约120mbq、约130mbq、约140mbq、约148mbq、约150mbq、约160mbq、约170mbq、约180mbq，约185mbq、约190mbq、约200mbq、约210mbq、约220mbq、约230mbq、约240mbq、约250mbq、约260mbq、约270mbq、约280mbq、约290mbq、约300mbq、约310mbq、约320mbq、约330mbq、约340mbq或350mbq。
[0153]
在一个实施方案中，在校准日期和时间，给予有需要的受试者的药物产品的剂量为约0.5mci至约9.5mci、约0.54mci至约9.0mci、约0.6mci至约8.5mci、约0.7mci至约8.0mci、约0.8mci至约7.5mci、约0.9mci至约7mci、约1.0mci至约6.5mci、约1.1mci至约6mci、约1.2mci至约5.5mci、约1.3mci至约5.0mci、约1.4mci至约4.5mci、约1.5mci至约4.0mci、约2mci至约3mci、约0.1mci至约10mci、约0.5mci至约5mci、约1mci至约5mci或约1mci至约4mci。
[0154]
在另一个实施方案中，在校准日期和时间，给予有需要的受试者的药物产品的剂量为0.1mci、约0.5mci、约0.54mci、约0.6mci、约0.7mci、约0.8mci、约0.9mci、约1.0mci、约1.1mci、约1.2mci、约1.3mci、约1.4mci、约1.5mci、约2.0mci、约2.5mci、约3.0mci、约3.1mci、约3.2mci、约3.3mci、约3.4mci、约3.5mci、约3.6mci、约3.7mci、约3.8mci、约3.9mci、约4.0mci、约4.1mci、约4.2mci、约4.3mci、约4.4mci、约4.5mci、约4.6mci、约4.7mci、约4.8mci、约4.9mci、约5.0mci、约5.5mci、约6.0mci、约6.5mci、约7.0mci、约
7.5mci、约8.0mci、约8.5mci、约9.0mci、约9.5mci或约10.0mci。
[0155]
在一个实施方案中，药物产品的剂量是通过静脉内给药的。在另一个实施方案中，药物产品以单剂量、2剂量、3剂量或多剂量静脉内引入有需要的受试者。
[0156]
在一个具体的实施方案中，将药物产品以约148mbq(或约4mci)的剂量作为静脉推注施用于受试者，并且在施用后约45至约90分钟获取图像。
[0157]
老年患者的剂量选择应谨慎，通常从剂量范围的低剂量端开始，反映出肝、肾或心功能下降以及伴随疾病或其他药物治疗的频率更高。
[0158]
在一个实施方案中，在约15分钟、约10分钟、约5分钟、约4分钟、约3分钟、约2分钟或约1分钟的时间段内向受试者施用药物产品。
[0159]
在一个具体的实施方案中，用于成人pet成像的放射性的量是，在约1分钟的时间内以静脉注射的形式施用148mbq(4mci)。
[0160]
在一个特定的实施方案中，该药物产品在校准时在单剂量小瓶中包含148mbq(4mci)，浓度为37mbq(1mci)/1ml 64
cu-dotatate。
[0161]
v.成像
[0162]
生长抑素类似物与
64
cu-dotatate相同的生长抑素受体竞争性结合，并可能影响成像。患者在服用生长抑素类似物之前进行成像。对于服用长效生长抑素类似物的患者，建议在成像前有28天的洗脱期。对于服用短效生长抑素类似物的患者，建议在成像前有2天的洗脱期。
[0163]
对于药物产品pet成像，推荐从颅骨顶点到大腿中部进行全身采集。在药物产品的静脉内施用后约45分钟至约90分钟之间开始图像采集。根据所使用的设备以及患者和肿瘤的特征，调整药物摄取时间和扫描持续时间，以获得最佳的图像质量。
[0164]
g.药物产品的施用方法
[0165]
64
cu-dotatate与生长抑素受体结合。基于信号强度，使用
64
cu-dotatate注射液获得的pet图像表明组织中生长抑素受体的存在和密度。在含有生长抑素受体的各种非net肿瘤中或作为正常生理变体，也可以看到摄取。net肿瘤中不携带生长抑素受体的肿瘤将不会被可视化。
[0166]
向患者施用药物产品的方法包括以下步骤：
[0167]
(a)校准
64
cu-dotatate注射液，
[0168]
(b)在校准时间后约2小时内使用
64
cu-dotatate注射液，
[0169]
(c)在拔出和施用
64
cu-dotatate注射液时使用无菌技术和辐射屏蔽，
[0170]
(d)在施用前目视检查
64
cu-dotatate注射液的颗粒物和变色情况，仅在溶液不含颗粒物或不变色时才可使用，
[0171]
(e)基于测量的活性、体积、校准时间和日期来计算所必需的施用体积，
[0172]
(f)使用剂量校准器在施用药物产品之前立即测量患者剂量，
[0173]
(g)注射
64
cu-dotatate注射液后，给患者静脉注射0.9％氯化钠注射液、usp，以及
[0174]
(h)任何未使用的药物都是按照适用法规以安全的方式处理的。
[0175]
静脉注射
64
cu-dotatate注射液后，成年患者器官和组织每次注射活动的估计辐射吸收剂量如表4所示。
[0176]
表4. 64
cu-dotatate注射液在选定器官中每次注射活动的估计辐射吸收剂量
[0177][0178][0179]
*5名患者的平均值。
[0180]
对成年人施用148mbq(4mci)所产生的有效辐射剂量约为4.7msv。对于148mbq(4mci)的施用活性，对肝脏、肾脏/肾上腺和脾脏等关键器官的典型辐射剂量分别约为24mgy、约21mgy和17mgy。由于脾脏具有最高的生理摄取量之一，脾切除患者可能会对其他器官或病理组织产生更高的摄取量和辐射剂量。
[0181]
非放射性生长抑素类似物和
64
cu-dotatate竞争性结合生长抑素受体(sstr2)。患者在服用生长抑素类似物之前进行成像。对于服用长效生长抑素类似物的患者，建议在成像前有28天的洗脱期。对于服用短效生长抑素类似物的患者，建议在成像前有2天的洗脱期。
[0182]
64
cu-dotatate的摄取反映了net中生长抑素受体密度的水平，然而，在同样表达生
长抑素受体的各种其他肿瘤中也可以看到摄取。在其他表达生长抑素受体的非癌性病理条件下，包括甲状腺疾病或亚急性炎症中，也可能出现摄取增加，或可能作为正常的生理变体(例如胰腺钩突)出现摄取增加。
[0183]
在没有net病史的患者服用药物产品后进行的阴性扫描(negative scan)并不排除疾病。
[0184]
单剂量施用
64
cu-dotatate注射液1至3小时后，在肾上腺、肾脏、垂体、脾脏和肝脏中观察到最大放射性。
[0185]
单次静脉注射剂量(4.15
±
0.13mci)的
64
cu-dotatate注射液(n＝6)后，在6小时的收集时间内，尿液中回收了注射剂量的16％至40％的放射性。
[0186]
在一个实施方案中，在单次静脉注射剂量的
64
cu-dotatate注射液后，在6小时的收集时间内，在尿液中回收注射剂量的约5％、约10％、约15％、约16％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％或约50％的放射性。
[0187]
在另一个实施方案中，在单次静脉注射剂量的
64
cu-dotatate注射液后，在5小时的收集时间内，在尿液中回收注射剂量的约5％、约10％、约15％、约16％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％或约50％的放射性。
[0188]
在另一个实施方案中，在单次静脉注射剂量的
64
cu-dotatate注射液后，在4小时的收集时间内，在尿液中回收注射剂量的约5％、约10％、约15％、约16％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％或约50％的放射性。
[0189]
在一个实施方案中，在单次静脉注射剂量的
64
cu-dotatate注射液后，在3小时的收集时间内，在尿液中回收注射剂量的约5％、约10％、约15％、约16％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％或约50％的放射性。
[0190]
在另一个实施方案中，在单次静脉注射剂量的
64
cu-dotatate注射液后，在2小时的收集时间内，在尿液中回收注射剂量的约5％、约10％、约15％、约16％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％或约50％的放射性。
[0191]
在另一个实施方案中，在单次静脉注射剂量的
64
cu-dotatate注射液后，在1小时的收集时间内，在尿液中回收注射剂量的约5％、约10％、约15％、约16％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％或约50％的放射性。
实施例
[0192]
以下实例提供用于制备高纯度
64
cu标记的dotatate的改进工艺。通过在低温(即≤30℃)下用铜标记dotatate，可以减少dotatate对其他金属的螯合作用，从而提供更高纯度的药物产品。此外，这些实例提供一种用于扩大
64
cu-dotatate生产的有用方法，同时保持足够的化学稳定性以将药物产品分配给患者。如在下面描述的实施例1-5中所使用的，制备以下缓冲溶液。
[0193]
乙酸钠/龙胆酸缓冲剂：将龙胆酸(ga)和乙酸钠(naoac)溶于高电阻率水(hrw)中，并使用冰乙酸或1m氢氧化钠调节所得溶液的ph。用hrw进一步稀释该溶液以获得所期望浓度的naoac和ga。
[0194]
抗坏血酸钠缓冲剂：将抗坏血酸钠溶解在hrw中。使用1mhcl或1m naoh将溶液的ph调节至6.5-7.5。用hrw进一步稀释该溶液以获得所期望浓度的抗坏血酸钠。
[0195]
抗坏血酸钠/乙醇缓冲剂：将抗坏血酸钠溶于hrw和无水乙醇中。用1m hcl或1m naoh将ph调节至6.5-7.5，然后用hrw进一步稀释，以达到抗坏血酸钠和乙醇的所期望最终浓度。
[0196]
hplc使用安捷伦1200系列系统进行，该系统配备有可变波长uv-vis检测器，随后与碘化钠检测器(bioscan b-fc-200p)串联。使用phenomenex luna c18柱(150mm x 4.6mm，5μm)。流动相由溶剂a和溶剂b制成。溶剂a为0.1％三氟乙酸(tfa)在hrw中，溶剂b为0.1％三氟乙酸在乙腈(acn)中。梯度为(i)15-40％溶剂b在a中10min,40％溶剂b在a中10～15min，15％溶剂b在a中15～16min，15％溶剂b在a中16～19min。流速为1.2ml/min，在220nm处监测uv检测。
[0197]
实施例1：非放射性cu-dotatate的制备
[0198]
通过将cucl2在0.05m hcl中的溶液与dotatate肽在龙胆酸/乙酸钠缓冲溶液中的溶液混合进行初始非放射性反应，以制备cu-dotatate。缓冲溶液的ph为6，另有说明的除外。通过hplc证实了cu-dotatate的形成。确定了dotatate起始材料、cu-dotatate产物峰和其他反应组分的相对保留时间。图2中显示了含有龙胆酸/和dotatate的标准溶液的代表性柱色谱图。
[0199]
在最初的实验中，在室温下，将naoac/ga缓冲剂中的大约等摩尔量的dotatate(0.035μmol)和0.05m hcl中的铜金属阳离子(0.039μmol)在小瓶中混合。通过hplc以多个时间间隔对反应混合物进行分析。图3中所示的在5分钟处收集的样品的hplc柱色谱图显示，在约7.2分钟时，一个新的产物峰鉴定为cu-dotatate，这对应于dotate前体峰的减少(保留时间约6分钟)。数据表明，在环境温度和含有等摩尔量起始材料的反应混合物中，cu-dotatate的形成是快速和定量的。
[0200]
实施例2
–
金属dotatate络合物的形成有利于铜而非其他常见金属
[0201]
由于cu-64的高比活性，在典型的[
64
cu]cu
2+
溶液中，会存在纳米至微克量的cu
2+
。[
64
cu]cu
2+
溶液中可能存在的其他痕量金属通常是由制造过程引入的环境杂质。可能存在的常见过渡金属包括铁、铅、锌和镍。在这些实验中，使用
nat
cu的非放射性溶液作为
64
cu的替代物来评估金属杂质对制备铜cu 64dotatate可能产生的影响，因为
nat
cu与
64
cu在化学上是相同的。
[0202]
在室温(～22℃)下，将含有0.44μg(0.00692μmol)cu的0.05m hcl溶液与100μg(0.0693μmol)dotatate在乙酸钠/龙胆酸缓冲剂中混合，使dotatate与cu的摩尔比为10:1。通过hplc监测反应。如表5所示，从5分钟和7小时的时间点来看，dotatate和cu-dotate化合物的hplc峰面积基本上没有显示出峰面积的变化，这表明在室温下5分钟后cu-dotatate的形成是快速和完全的。
[0203]
表5.dotatate和cu-dotatate的峰面积作为反应时间的函数。
[0204]
[0205]
由于同位素富集的
64
ni通常用于生产
64
cu，因此ni是另一种潜在的金属杂质。然而，由于很难在ni-doatate和cu-doatate之间实现hplc基线分辨率，因此使用ni作为cu的替代物进行了类似的竞争实验，以评估ni的反应动力学。在室温(～22℃)下，通过混合ni(0.0063μmol)、fe(0.0069μmol)、zn(0.0067μmol)和co(0.0068μmol)在0.05m hcl中的溶液和dotatate(0.0693μmol)的龙胆酸/乙酸钠缓冲液溶液进行非放射性标记反应。不向溶液中添加铜以更好地评估ni在fe、约zn和co存在下的螯合行为。
[0206]
在5分钟和6小时的时间点通过hplc分析反应混合物。表6总结了峰面积结果，并表明ni
2+
与dotatate的反应动力学比cu
2+
慢得多。因此，与其他过渡金属(例如fe、co、zn)类似，在环境温度下，看上去dotatate对cu的螯合作用也比ni发生得更快。
[0207]
表6.实验9的hplc分析结果(dotatate和金属-dotatate化合物的峰面积)
[0208][0209]
实施例3
–
在较低温度下形成cu-dotatate
[0210]
进行与实施例2中所述类似的实验，以确定在降低的温度(即15℃至18℃)下是否类似地发生cu-dotatate形成。如实施例2中所述地制备反应混合物，但根据需要进行调节以满足表7中列出的条件。
[0211]
表7.在降低的温度下测试的标记条件
[0212][0213]
每种反应混合物在约5分钟后取样进行hplc分析。仅含cu的反应混合物也在约2小时后取样。结果汇总在表8中。这些数据证实，dotatate标记在5分钟后基本上完成，即使在降低的温度和存在fe的情况下也是如此。
[0214]
表8.在降低的温度下进行的cu-dotatate反应的hplc分析
[0215][0216]
实施例4
–
在单次反应中制备高达2000mci的
64
cu-dotatate
[0217]
放射性标记反应遵循本文所述的一般程序。将
64
cu在0.05m hcl中的溶液与dotatate在乙酸钠/龙胆酸缓冲剂中的溶液混合。将反应混合物加热至30℃5分钟，然后通过c-18固相萃取筒纯化。将纯化的
64
cu-dotatate收集在2ml的50％etoh中，随后用抗坏血酸
溶液稀释。测定最终产物的活性，并通过放射-hplc分析评估放射化学纯度(rcp)。相对于非放射性dotatate(tr＝6.3分钟)和cu-dotatate(tr＝7.3分钟)标准品，进行表征。
[0218]
通常，对于单次反应，实现了cu-64从100mci至约7000mci的放大反应。100mci-7000mci批次尺寸的代表性反应和结果概述在表9中。hplc分析显示，主要产物峰的保留时间(tr)约为7.4分钟，用非放射性cu-dotatate(tr＝7.3分钟)共洗脱。洗脱的剩余活性(tr＝6.2
–
7.2分钟)归因于放射性分解产生的降解产物。通过hplc监测纯化的反应溶液的化学稳定性，并证明
64
cu-dotatate在至少47小时的时间内是稳定的，如表9所示。
[0219]
表9.约100-2000mci的代表性
64
cu-dotatate反应概述
[0220][0221]
np＝未进行
[0222]a修正为tos的衰变
[0223]
b sep-pak纯化材料的rcp
[0224]c两个样本的平均值
[0225]
实施例5
–
制备超过7500mci的
64
cu-dotatate
[0226]
可以通过组合两个子批次来制备更高批次尺寸的
64
cu-dotatate。例如，进行由5250mci 64
cu(r1)和4800mci 64
cu(r2)组成的两个放射性标记反应，以制备总计约9ci的铜cu 64dotatate(未根据合成时间进行衰变校正)。通过将
64
cu在0.05mhcl中的溶液与dotatate在龙胆酸/抗坏血酸钠缓冲液中的溶液以合成时每mci 64
cu 0.6μg dotatate的比例混合，进行两个单独的5ci 64
cu放射性标记反应。将来自每个放射性标记反应的纯化的药物产品溶液合并，并稀释，以在纯化时提供总计约9ci的
64
cu-dotatate。工艺产率≥95％。最终药物产品溶液在释放时的rcp≥96％。
[0227]
实施例6
–
在dotatate浓度降低的条件下制备的最大
64
cu-dotatate批次
[0228]
在
64
cu-dotatate的先前制备中，将dotatate配体以每1mci 64
cu中1μg dotatate的比例(即，合成时的摩尔比约为170:1)加入反应混合物中。为了提高最终
64
cu-dotatate的摩尔活性，启动了工艺改进，以减少放射性标记反应中dotatate的量。两个放射性标记反应(反应1(r1)和反应2(r2))分别在高达5250mci 64
cu和高达4800mci 64
cu下进行。对于r1，标记的dotatate总量约为3,125μg或浓度≥276μg/ml。对于r2，标记的dotatate总量约为3,018μg或浓度≥265μg/ml。反应混合物中配体(即dotatate摩尔数)与放射性核素(即
64
cu摩尔数)的摩尔比为约102:1(r1)和约99:1(r2)。对于每个反应，配体的质量(μg)与
64
cu(mci)浓度的放射性之比约为0.6μg/mci。将在0.05m hcl中的每个
64
cu溶液与在乙酸钠/龙胆酸缓冲剂中的dotatate溶液合并。r1和r2在放射合成时的放射性浓度(rac)分别≥460mci/ml和≥421mci/ml。在纯化之前，将反应在30℃下保持5分钟，并在环境温度下保持5min。
[0229]
使用c-18固相萃取(spe)筒分别纯化r1和r2的粗反应混合物，并将含有纯化产物
的洗脱液合并以制备含有约8.7ci的
64
cu-dotatate的本体溶液(未根据合成时间进行衰变校正)。工艺产率≥95％，稀释后最终药物产品溶液的放射化学纯度(rcp)≥96％。
[0230]
在另一个实验中，使用0.6μg/mci的cu-64的dotatate比率，在单个反应中制备了约7ci的64cu-dotatate(见表9)。
[0231]
实施例7
–
龙胆酸和乙醇对
64
cu-dotatate产品稳定性的影响
[0232]
评估了最终剂量基质中乙醇(etoh)和龙胆酸(ga)含量对
64
cu-dotatate的化学稳定性的影响。在这些实验中，使用实施例2中概述的一般程序进行500mci反应，并用2ml的50％etoh(aq)将
64
cu-dotatate产物从sep-pak洗脱到5ml的50mg/ml naoasc缓冲剂中，用作经纯化的
64
cu-dotatate储备溶液。从
64
cu-dotatate储备液中，将1ml等分试样转移到含有以下溶液的小瓶中：
[0233]
小瓶溶液12ml 66.3mg/ml naoasc22ml 132.3mg/ml naoasc32ml 66.3mg/ml naoasc+8％etoh42ml 66.3mg/ml naoasc+15mg/ml ga52ml 66.3mg/ml naoasc+30mg/ml ga64ml 132.3mg/ml naoasc75ml 64.8mg/ml naoasc+2.8％etoh82ml 49.5mg/ml的naoasc92ml 94.5mg/ml naoasc108ml 46.1mg/ml naoasc+3.5％etoh118ml 79.9mg/ml naoasc+3.5％etoh125ml 64.8mg/ml naoasc+2.8％etoh
[0234]
通过hplc分析每个小瓶的稳定性，结果总结在表10中。令人惊讶的是，降解量最高(24％-38％)的是那些含有大量ga的物质，ga通常被认为是一种放射性保护剂。在这些样品中，在tr＝6.6分钟和7.1分钟时，
64
cu-dotatate的减少与游离
64
cu和两种未知放射性杂质的增加有关。由于具有相似活性浓度的小瓶几乎没有降解，因此放射性分解不太可能导致降解，因此导致化学不稳定性的机制仍然未知。在48小时内导致
64
cu-dotatate损失超过2％的唯一其他条件是小瓶3，其与对照(小瓶1)的不同之处在于其含有约10％的etoh。
[0235]
表10.在各种条件下，随着时间的推移，完整的
64
cu-dotatate的百分比。
[0236][0237]a在tos后1-2小时进行测试；b在tos后24-26小时进行测试；c在tos后45-48小时进行测试。
[0238]
结果表明，在含有抗坏血酸钠浓度为45-122mg/ml、乙醇浓度为1.6％-5.2％和活性浓度为3.6-16mci/ml(制备时)的溶液中，
64
cu-dotatate在大于95％的纯度下保持化学稳定2天。对于含有抗坏血酸钠浓度高达98mg/ml、乙醇含量高达9.7％、活性浓度约为18mci/ml(在制备时)的溶液，
64
cu-dotatate产物在大于90％的纯度下保持稳定。
[0239]
实施例8：在增加的龙胆酸或抗坏血酸钠存在下制备cu-dotatate
[0240]
重复先前实验中使用的一般性反应方案，不同之处在于，反应混合物中龙胆酸的浓度增加了4倍。反应后，通过c-18固相萃取(spe)筒对混合物进行取样和纯化，并通过hplc分析经纯化的产物，以确定反应产率。hplc分析的结果汇总在表11中。几乎实现了dotatate和cu-dotatate的定量回收，并且标记效率和纯化都不受反应混合物中大量过量龙胆酸的影响。
[0241]
表11.cu-dotatate制剂的hplc分析的总结
[0242][0243]
反应混合物中的龙胆酸起到放射性保护剂的作用，并有助于减少放射性降解。为了评估使用另一种放射性保护剂的可能性，进行了这样的反应：其中将抗坏血酸钠加入到反应混合物中(ph＝6.8)。将乙酸钠/龙胆酸缓冲剂中的dotatate(0.0693μmol)与cu
2+
在0.05m hcl(0.0069μmol)中的溶液混合，并用抗坏血酸钠稀释，使dotatate与cu
2+
的比例为10:1。将反应混合物在室温下混合，并在5分钟和51分钟时取样，以通过hplc分析来监测cu-dotatate的形成。cu-dotatate的hplc峰面积在5分钟时为2.33mv/分钟，在51分钟时为
1.36mv/分钟，表明反应在5分钟前完成。
[0244]
实施例9—非放射性铜对
64
cu-dotatate放射化学纯度的影响
[0245]
进行了三个反应，每个反应使用约5ci。r1是没有添加非放射性铜的对照反应。在r1中未检测到铜。在r2和r3中加入非放射性铜，以研究其对rcp的影响。r2在12.6ml(11.0μg/ml)中的总铜含量约为139μg。r3在15.3ml(31.1μg/ml)中的总铜含量约为476μg。在每个反应中标记的总dotatate分别为约3000μg(r1)、约3000μg(r2)和约3600μg(r3)，或浓度≥250μg/ml、约≥238μg/ml和≥235μg/ml。每个反应的反应时间约为5分钟。加热后，将每个反应在室温下冷却约5分钟，随后将混合物纯化并稀释至其最终的本体溶液。
[0246]
r1、r2和r3最终药物产品溶液的rac分别为约11.7mci/ml(r1)、约10.3mci/ml(r2)和约12.4mci/ml(r3)。r1、r2和r3的经衰变校正的工艺产率分别为约95.4％、约98.7％和约95.6％。稀释后的每个最终药物产品溶液的rcp≥95.5％(r1)、约≥97.3％(r2)和≥97.9％(r3)。
[0247]
实施例10
–
在较高流速下从spe筒中回收dotatate
[0248]
通常，通过spe筒的流速是在低流速(即1-5ml/min)下进行的，以确保筒上有足够的所期望的产品加载，并确保纯化产品洗脱液的高回产率。在
64
cu-dotatate的情况下，将产物浓缩在spe柱上可能会导致更高的放射性损伤，尤其是对于高活性批次。因此，为了减少纯化时间，对dotatate的回产率进行了评估，以获得更高的流速。由于c-18spe化学主要由dotatate与筒(cartridge)的相互作用驱动，因此使用dotatate的非放射性溶液进行实验，因为cu-dotatate或其他金属dotatate物种的行为非常相似。
[0249]
制备dotatate在乙酸钠/龙胆酸缓冲剂中的溶液，并以12ml/min或18ml/min的流速将其加载到c-18spe柱上。用水冲洗筒，并在50％etoh中洗脱dotatate。通过hplc评估在加载溶液和纯化产物洗脱液中dotatate的量。在12ml/min的流速下，5.3％的dotatate在加载过程中穿透spe柱，而97.1％的dotatate在洗脱液中回收(总回产率102％)。当以18ml/min进行纯化时，28.4％的dotatate在加载过程中穿透，68.7％在洗脱液中回收(总回产率97％)。结果表明，至少高达12ml/min的流速可用于纯化
64
cu-dotatate，同时保持接近定量的回产率。加载溶液以级分(fractions)形式收集，各个级分的dotatate回收结果如图4和图5所示。
[0250]
实施例11
–
使用50％乙醇洗脱液提高cu-dotatate的纯化产率
[0251]
通常，放射性标记的铜cu-64 dotatate通过c-18spe进行纯化。在该程序中，将粗放射性标记溶液加载到c-18spe筒上，用水冲洗筒以去除亲水性杂质，然后通常使用100％乙醇从筒中洗脱纯化的铜
64
cu-dotatate化合物。我们已经发现，使用50％的etoh可以提高cu-dotatate的纯化产率。为了支持这一观察结果，进行了若干实验。
[0252]
对于每种条件，制备含有铜(2+)离子、过渡金属离子杂质和生物共轭物螯合剂(dotatate)的反应混合物一式三份。将反应混合物在室温(约20℃)下保持5分钟，然后使用c-18spe柱筒纯化，并在100％etoh(n＝3)或50％etoh(n＝3)中洗脱。表12中提供反应混合物中dotatate与金属的比率。
[0253]
表12.用于标记的dota-tate与金属离子的摩尔比
[0254]
金属离子dota-tate:金属摩尔比cu(2+)4:1
fe(3+)4:1co(3+)8:1pb(2+)8:1金属总量1.3:1
[0255]
在混合后约10分钟，通过hplc分析粗反应混合物的样品以获得原位反应产率。然后，通过c-18spe柱筒纯化每个反应混合物，并用100％etoh或50％etoh洗脱产物。通过hplc分析测定纯化产物溶液的分离产率。结果见表13。通过与dotatate标准品进行比较来确定反应产率。
[0256]
表13.使用50％etoh或100％etoh洗脱液的cu-dotatate分离产率的比较
[0257][0258]1n＝3制剂的平均值。2fe/co-dotatate峰未基线解析，并整合为单个峰
[0259]
实施例12——药物产品的疗效
[0260]
药物产品的疗效是在两项单中心的开放标记的研究中确定的。研究1对总共63名受试者进行了前瞻性评估，其中包括42名根据组织学常规成像或临床评估患有已知net或疑似net的患者和21名健康志愿者。在42名患者中，37名(88％)在药物产品成像时有net病史。在63名受试者的总研究人群中，28名(44％)为男性，35名(56％)为女性，其中大多数受试者为白色人种(86％)。受试者的平均年龄为54岁(范围为25至82岁)。
[0261]
来自每个受试者的药物产品图像由三名独立的识读者解读为net阳性或阴性，所述识读者对临床信息和其他成像结果处于设盲的状态。将pet成像结果与综合参考标准进行比较，所述参考标准由单个肿瘤学家根据现有组织病理学结果对受试者诊断进行盲法评估，报告在药物成像前8周内进行的常规影像学((mri、对比ct、骨闪烁扫描、[
18
f]氟脱氧葡萄糖pet/ct、[
18
f]氟化钠pet/ct、[
111
in]五肽铟spect/ct、[
68
ga]ga-dotatate pet/ct)，以及报告包括嗜铬粒蛋白a和血清素水平在内的临床和实验室数据。通过药物产品成像确定为阳性的每个综合参考的疾病阳性受试者的比例用于量化阳性一致性百分比。每个综合参考中，通过药物产品成像确定为阴性的无疾病受试者的比例用于量化阴性一致性百分比。表14显示了用于研究1的药物产品在检测net方面的性能。
[0262]
表14.研究1中在由识读者对检测net中的药物产品的性能
[0263][0264]
n：患者人数，ci：置信区间，*识读者1将63次pet扫描中的一次解释为“不可评估”，**具有连续性校正的wilson评分区间
[0265]
通过对112名已知net病史的患者(63名男性，49名女性；平均年龄62岁，30至84岁)的已发表数据进行回顾性分析，研究2显示出了类似的表现。
[0266]
实施例13—药物产品的安全性和有效性
[0267]
在安全性和有效性试验中，71名受试者接受了单剂量的药物产品。在这71名受试者中，21人为健康志愿者，其余为已知或疑似net患者。以下不良反应发生率《2％：(a)胃肠道疾病：恶心、呕吐；和(b)血管疾病：潮红。
[0268]
126名已知net病史的患者接受了单剂量
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cu-dotatate注射。据报道，四名患者在注射后立即出现恶心症状。
[0269]
本文所描述的实施方式旨在仅仅是示例性的。本领域技术人员将理解，在不脱离以下权利要求所涵盖的本发明的范围的情况下，可以进行变化和修改。

技术特征：
1.一种用于放射性标记dotatate的方法，所述方法包括以下步骤：使铜-64与包含dotatate的缓冲溶液反应；其中，所述反应在小于或等于30℃的温度下在少于15分钟内发生；且其中，反应溶液中dotatate与铜-64的摩尔比为约110:1至约90:1。2.根据权利要求1所述的用于放射性标记dotatate的方法，其中，所述反应在少于10分钟内发生。3.根据权利要求1所述的用于放射性标记dotatate的方法，其中，所述反应在约5分钟内发生。4.根据权利要求1所述的用于放射性标记dotatate的方法，其中，所述反应溶液中dotatate与铜-64的摩尔比为约100:1。5.根据权利要求1所述的用于放射性标记dotatate的方法，其中，所述反应在低于25℃的温度下发生。6.根据权利要求1所述的用于放射性标记dotatate的方法，其中，所述反应在低于20℃的温度下发生。7.根据权利要求1所述的用于放射性标记dotatate的方法，其中，所述反应在低于15℃的温度下发生。8.一种包含
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cu-dotatate的药物产品，所述药物产品通过权利要求1所述的方法制备。9.一种制备包含
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cu-dotatate的药物产品的方法，其中，所述药物产品通过如下步骤制备：(i)以约0.6μg/ml(μgdotatate/mci铜-64)的浓度用铜-64放射性标记dotatate，且其中，所述药物产品中铜-64的放射性核素纯度为约99％。10.一种包含
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cu-dotatate的药物产品，所述药物产品通过权利要求9所述的方法制备。11.根据权利要求9所述的方法，其中，所述dotatate与
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cu的摩尔比为约125:1、约120:1、约115:1、约110:1、约105:1、约100:1、约95:1、约90:1、约85:1、约80:1、约75:1、约70:1、约65:1、约60:1、约55:1、约50:1、约45:1、约40:1、约35:1、约30:1、约25:1、约20:1、约15:1、约10:1、约5:1、约4:1、约3:1、约2:1、约2.5:1或1:1。12.根据权利要求9所述的方法，其中，所述药物产品的分离放射化学产率(rcy)为约50％、约55％、约56％、约60％、约65％、约68％、约70％、约75％、约80％、约83％、约85％、约90％或约95％(经衰变校正)。13.根据权利要求9所述的方法，其中，所述放射性标记在约1分钟、约2分钟、约3分钟、约4分钟、约5分钟、约6分钟、约7分钟、约8分钟、约9分钟、约10分钟、约15分钟、约20分钟、约25分钟、约30分钟、约45分钟、约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约15小时、约20小时或约22小时内实现。14.根据权利要求9所述的方法，其中，所述放射性标记在少于15分钟内实现。15.根据权利要求9所述的方法，其中，所述放射性标记在约10℃至约50℃、约15℃至约45℃、约20℃至约40℃、约10℃至约30℃、约10℃至约20℃、约20℃至约50℃、约20℃至约40℃或约20℃至约30℃的反应温度下进行。16.根据权利要求9所述的方法，其中，所述放射性标记在约4.5至约7.0、约4.6至约6.9、约4.7至约6.8、约4.8至约6.7、约4.9至约6.6、约5.0至约6.6、约5.1至约6.5、约5.2至
约6.3、约5.3至约6.2、约5.4至约6.1或约5.5至约6.0的ph下进行。17.一种用于放射性标记dotatate的方法，所述方法包括以下步骤：使铜-64与包含dotatate的缓冲溶液反应；其中，所述反应在小于或等于30℃的温度下在少于15分钟内发生；且dotatate可以以约0.6μg/ml(μg dotatate/mci
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cu)的浓度下用铜-64进行放射性标记。18.一种包含
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cu-dotatate的药物产品，所述药物产品通过权利要求17所述的方法制备。19.根据权利要求17所述的方法，其中，将非放射性铜加入反应混合物中。20.根据权利要求19所述的方法，其中，将0.1-30μg/ml(ppm)的非放射性铜加入反应混合物中。21.一种用于正电子发射断层成像的包含
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cu-dotatate的药物产品，其中，所述
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cu-dotatate储存在含有148mbq的
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cu-dotatate的单剂量小瓶中，其中，所述药物产品的放射性浓度为约5-15mci/ml，且其中，所述药物产品在稀释后的放射化学纯度≥96％。22.根据权利要求21所述的药物产品，其中，所述药物产品在稀释后的放射化学纯度≥97％。23.根据权利要求21所述的药物产品，其中，所述药物产品在稀释后的放射化学纯度≥98％。24.根据权利要求21所述的药物产品，其中，所述药物产品在稀释后的放射化学纯度≥99％。25.根据权利要求21所述的药物产品，其中，所述药物产品在配制后稳定48小时。26.根据权利要求21所述的药物产品，其中，所述药物产品在配制后稳定24小时。27.根据权利要求21所述的药物产品，其中，所述药物产品的放射性浓度为约9-14mci/ml。28.根据权利要求21所述的药物产品，其中，所述药物产品的放射性浓度为约10-11mci/ml。

技术总结
本公开涉及一种创建稳健的程序的方法，所述程序能够提供商业量的放射性诊断剂，所述放射性诊断剂适合与正电子发射断层成像(PET)一起用于成年患者中生长抑素受体阳性神经内分泌肿瘤(NET)的定位。泌肿瘤(NET)的定位。泌肿瘤(NET)的定位。


技术研发人员：大卫
受保护的技术使用者：库瑞姆美国有限责任公司
技术研发日：2021.09.03
技术公布日：2023/8/13