一种具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束及其制备方法

1.本发明属于药物载体领域，具体涉及一种具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束及其制备方法。


背景技术：

2.聚合物胶束是指由两亲性聚合物在溶液中自动组装形成的粒径在10~100 nm的载药体系。它能提高药物的溶解性、提高药物在体内的半衰期、降低药物毒性、延缓药物释放等诸多有点，使得其在肿瘤成像方面、抗肿瘤药物递送方面、癌症免疫治疗方面、急/慢性肾脏病方面等被广泛应用研究。
3.但是目前聚合物胶束本身存在一些问题：1）一般胶束经过静脉注射进入血液循环体系时，相当于被无限倍稀释，如果胶束的临界胶束浓度值较高，会导致胶束结构的破坏，药物提前释放，使得治疗效果不理想甚至无法治疗。
4.2）当胶束粒子表面携带正电荷或者疏水基团时，载体表面与蛋白质、（吞噬）细胞膜的作用增强，粒子进入血液循环系统后很快就会被体内的免疫系统清除，并且具有很强的细胞细胞毒性。而目前对疏水性药物进行负载时主要通过化学合成的方法在胶束外壳引入聚乙二醇等亲水基团，以增加载药胶束的水溶性和生物相容性，然而此方法需要复杂的合成工艺，且效率低、难以放大至工业化生产。
5.3）并不是所有的载药胶束都可以在壳层有效的修饰一层聚乙二醇或者其他亲水性物质；特别是对油包水型的载药胶束，其壳层是非水溶性聚合物，难以实现胶束外表面亲水性改变。
6.故基于此，提出本发明技术方案。


技术实现要素：

7.发明人经过长期研究总结，理想的载药胶束必须满足一定的条件，如：（1）具备高的药物装载性能；（2）在血液循环过程中适当的稳定性；（3）在作用部位适当的释放机制；（4）良好的生物相容性；（5）制备和纯化方法简便，容易放大至工业化生产；（6）具有较长的体内循环时间及靶向功能。
8.为了解决现有技术存在的问题，本发明提供了一种具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：（1）将载药胶束分散于乙醇/水混合溶液中，得到胶束悬浊液；（2）在所述胶束悬浊液中，依次加入多酚类酸性缓冲液、多胺基酸性缓冲液和氧化剂酸性缓冲液，得到第一混合液；所述第一混合液反应后，得到第一反应液；（3）将所述第一反应液离心分离，弃去上清液，然后依次清洗、干燥，得到第一改性胶束；（4）将所述第一改性胶束采用酸性缓冲液重悬，并加入金属离子酸性缓冲液，得到
第二混合液；所述第二混合液反应后，得到第二反应液；（5）将所述第二反应液离心分离，弃去上清液，然后依次清洗、干燥，得到第二改性胶束；（6）将具有靶向功能的多肽溶解于pbs缓冲液中，然后悬置所述第二改性胶束，得到第三混合液；所述第三混合液于紫外光下进行反应，再离心分离，弃去上清液，即得所述具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束。
9.为便于立即本发明，对本发明的反应原理进行说明：本发明首先将载药胶束均匀分散在乙醇/水混合溶液中，酸性环境下，通过多酚类化合物、多胺基化合物在氧化剂的作用下氧化、交联，在胶束表面形成一层均匀致密的多酚纳米“保护层”（第一层壳），该保护层含具有多酚的生物学功能，如抗氧化、调节炎症、清除自由基等，然后经过高速离心弃上清液将胶束充分清洗；再在酸性溶液中，使微量金属离子与胶束保护层中的酚羟基螯合，金属离子充当一个螺钉连接作用从而增加胶束保护层的结构和功能稳定性，最终在胶束外层形成多功能的“盔甲”层（第二层壳），避免了载药胶束在体内的快速降解和机体清除，提高了药物在体内的稳定性并延长了循环代谢时间；通过与胶束壳表面的多种活性官能团（如酚羟基、胺基、羧基、双键等）作用，将具有靶向功能的多肽修饰在核壳胶束外表面，可赋予核壳结构胶束靶向功能，从而获得一个具有核壳结构且可进行功能分子二次修饰的载药胶束。
10.优选地，步骤（1）中，所述载药胶束为阴离子载药胶束、阳离子载药胶束、两性型载药胶束、多元醇型载药胶束、聚氧乙烯型载药胶束或聚氧乙烯-聚氧丙烯型载药胶束中的一种；所述乙醇/水混合溶液中，乙醇与水的体积比为0.5~5:0.5~5。更优选地，所述胶束为泊洛沙姆188；所述乙醇与水的体积比为0.5:4.5。
11.优选地，步骤（2）中，所述多酚类酸性缓冲液由多酚类化合物和酸性缓冲液混合而成，所述多酚类化合物为单宁酸、没食子酸、丹酚酸b、表没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、表儿茶素、表没食子儿茶素、邻苯二酚、邻苯三酚、黄酮类中的一种或两种以上的组合；和/或，步骤（2）中，所述多胺基酸性缓冲液由多胺基化合物和酸性缓冲液混合而成，所述多胺基化合物为乙二胺、戊二胺、2,2,4-三甲基六亚甲基二胺、1,8-二氨基辛烷、甲基环己烷二胺、1,3-二氨基甲基环己烷、2,4,6-三氨甲基环己烷、1,4-双二氨已基环己烷、2-(3,4-二羟基苯基)乙胺中的一种或两种以上的组合；和/或，步骤（2）中，所述氧化剂酸性缓冲液由氧化剂和酸性缓冲液混合而成，所述氧化剂为过氧化氢、过硫酸铵、浓硝酸、高碘酸钠、高锰酸钾、重铬酸钾中的一种或两种以上的组合；和/或，步骤（4）中，所述金属离子酸性缓冲液由金属离子和酸性缓冲液混合而成，所述金属离子为铜离子、银离子、锌离子和铁离子中的一种或两种以上的组合。
12.优选地，所述酸性缓冲液的ph为3~7；所述酸性缓冲液为乙酸-乙酸盐缓冲液、2-(n-吗啡啉)乙磺酸缓冲液、甘氨酸-盐酸缓冲液、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中的一种。
13.优选地，步骤（2）中，在所述第一混合液中，所述载药胶束的浓度为0.5~10 mg/ml，
所述多酚类化合物的浓度为0.5~10 mg/ml，所述多胺基化合物的浓度为0.5~10 mg/ml，所述氧化剂的浓度为0.5~10 mg/ml。更优选地，所述胶束的浓度为2 mg/ml，所述多酚类化合物的浓度为1 mg/ml，所述多胺基化合物的浓度为1 mg/ml，所述氧化剂的浓度为0.5 mg/ml。
14.优选地，步骤（4）中，在所述第二混合液中，所述第一改性胶束的浓度为0.5~10 mg/ml，所述金属离子的浓度为0.01~0.5 mg/ml。更优选地，所述第一改性胶束的浓度为2 mg/ml，所述金属离子的浓度为0.05 mg/ml。
15.优选地，步骤（2）和步骤（4）中，反应的温度为10~40℃，反应的时间为0.1~10h。更优选地，步骤（2）中，反应的温度为30℃，反应的时间为1h；步骤（4）中，反应的温度为30℃，反应的时间为2h。
16.优选地，步骤（6）中，所述具有靶向功能的多肽为clpvasc、ceplqlkm、cs、ccreka、cvhpkqhrggskgc、g3-c12中的一种；在所述第三混合液中，所述具有靶向功能的多肽的浓度为0.01~0.5 mg/ml，所述第二改性胶束的浓度为0.5~10 mg/ml；所述紫外光波长为254~365nm，所述反应时间为5~120min。更优选地，所述具有靶向功能的多肽的浓度为0.05 mg/ml，所述第二改性胶束的浓度为2 mg/ml；所述紫外光波长为254nm，所述反应时间为20min。
17.基于相同的技术构思，本发明的再一方案是提供一种由上述制备方法得到的具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束。
18.本发明的有益效果为：1、本发明具有广泛的适用性，基于多酚类化合物和多胺基化合物在氧化剂的作用下氧化、交联、沉积，在胶束壳外层形成一层由多酚纳米颗粒膜层，该多酚纳米颗粒膜层具有非材料依赖性，可以在所有的胶束表面形成，并使其含有大量的亲水性基团如酚羟基、羧基、胺基等，从而提高了载药胶束的生物相容性，能避免被机体内的免疫系统清除；同时在胶束外壳再形成一层壳结构可以提高胶束的结构稳定性，实现了纳米胶束在体内的长循环特性。另外，最外层的壳层也能避免胶束在体内被降解，从而防止药物大量释放给机体造成不可逆的副作用。
19.2、在机体内的病理组织环境中，常伴随着大量的活性氧自由基和炎症细胞浸润的情况，本发明所述的药物胶束能在外壳形成多酚“保护层”并带有多酚化合物相关的生物学功能，如抗氧化、清除自由基、调节炎症等，可以调节病理微环境并与胶束中的药物协同发挥治疗作用。
20.3、金属离子可以充分地与多酚“保护层”中的酚羟基螯合，引入的金属离子也具有多种功能，如1）金属离子本身的生物学功能，2）金属离子与酚羟基螯合后充当一个铆钉的作用，将多酚纳米颗粒进一步连接，增加多酚“保护层”的结构稳定性，提高药物胶束的利用率，减缓用药次数，3）金属离子与酚羟基螯合后，可以延缓酚羟基被氧化的速度，延长其保存时间和相应的生物学功能。
21.4、核壳壳胶束表面的多种活性官能团（如双键、胺基等）可以作为具有靶向功能的多肽二次修饰的反应平台，修饰的具有靶向功能的多肽赋予了核壳壳胶束的靶向功能，提高了载药胶束在病理组织的富集和药物的利用率，减少了药物给其他组织带来的不利影响。
22.5、多酚纳米颗粒/金属离子复合层具有ph响应性，在机体内的酸性病灶部位（如肿
瘤部位的ph为6.5~7.2）会加速解离多酚/金属离子，打开胶束中药物的释放窗口，所释放的药物与多酚可协同作用对病理组织进行治疗。
23.6、本发明所述的制备方法操作简单，反应高效、条件温和，可以在不同的胶束表面制备出具有靶向和生物学功能“盔甲”的保护层，具有广谱实用性，制得的具有核壳壳结构且可进行功能分子二次修饰的载药胶束具有优异的结构稳定性、生物相容性和生物功能性、ph响应性、靶向性等多种功能。
附图说明
24.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
25.图1为实施例1制得的具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束的透射电镜图。
26.图2为实施例1制得的具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束的电子衍射图；图3为实施例1制得的具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束的x射线光电子能谱（xps）。
具体实施方式
27.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。
28.实施例1本实施例提供一种具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：（1）将载药卵磷脂胶束均匀分散于乙醇/水混合溶液中，得到胶束悬浊液；其中，乙醇与水的体积比为1:4；（2）将单宁酸、乙二胺、高碘酸钠和铜离子分别溶解于ph为5的乙酸钠缓冲液中，分别得到单宁酸缓冲液、乙二胺缓冲液、高碘酸钠缓冲液和铜离子缓冲液；（3）在所述胶束悬浊液中，依次加入所述单宁酸缓冲液、所述乙二胺缓冲液、所述高碘酸钠缓冲液，得到第一混合液；所述第一混合液在25℃下反应3h后，得到第一反应液；其中，所述第一混合液中，所述胶束的浓度为2 mg/ml，所述单宁酸的浓度为1 mg/ml，所述乙二胺的浓度为0.5 mg/ml，所述高碘酸钠的浓度为0.5 mg/ml；（4）将所述第一反应液在12000r/min条件下高速离心30s，弃上清液，加ro水重新悬置胶束，再次高速离心，弃上清液，清洗3次，冷冻干燥，得到第一改性胶束；（5）将所述第一改性胶束采用乙酸钠缓冲液悬置后加入银离子缓冲液，得到第二混合液；所述第二混合液在25℃下反应3h，得到第二反应液；其中，所述第二混合液中，所述第一改性胶束的浓度为2 mg/ml，所述银离子的浓度为0.05 mg/ml；（6）将所述第二反应液在12000r/min条件下高速离心30s，弃上清液，加ro水重新
悬置胶束，再次高速离心，弃上清液，清洗3次，冷冻干燥，得到第二改性胶束；（7）将具有靶向功能的多肽clpvasc溶解于pbs缓冲液中，然后悬置所述第二改性胶束，得到第三混合液（clpvasc和第二改性胶束的终浓度分别为0.05 mg/ml和2 mg/ml）；将所述第三混合液在254nm紫外光辐照下进行搅拌反应30min，再高速离心分离以弃去上清液，即得所述具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束。
29.实施例2本实施例提供一种具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：（1）将载药脂肪酸单甘油酯胶束均匀分散于乙醇/水混合溶液中，得到胶束悬浊液；其中，乙醇与水的体积比为0.5:4.5；（2）将表没食子儿茶素没食子酸酯、戊二胺、高锰酸钾和铜离子分别溶解于ph为4.5的乙酸钠缓冲液中，分别得到表没食子儿茶素没食子酸酯缓冲液、戊二胺缓冲液、高锰酸钾缓冲液和铜离子缓冲液；（3）在所述胶束悬浊液中，依次加入所述表没食子儿茶素没食子酸酯缓冲液、所述戊二胺缓冲液、所述高锰酸钾缓冲液，得到第一混合液；所述第一混合液在20℃下反应6h后，得到第一反应液；其中，所述第一混合液中，所述胶束的浓度为5 mg/ml，所述表没食子儿茶素没食子酸酯的浓度为2 mg/ml，所述戊二胺的浓度为2 mg/ml，所述高锰酸钾的浓度为2mg/ml；（4）将所述第一反应液在12000r/min条件下高速离心30s，弃上清液，加ro水重新悬置胶束，再次高速离心，弃上清液，清洗3次，冷冻干燥，得到第一改性胶束；（5）将所述第一改性胶束采用乙酸钠缓冲液悬置后加入铜离子缓冲液，得到第二混合液；所述第二混合液在20℃下反应6h，得到第二反应液；其中，所述第二混合液中，所述第一改性胶束的浓度为4 mg/ml，所述铜离子的浓度为0.1 mg/ml；（6）将所述第二反应液在12000r/min条件下高速离心30s，弃上清液，加ro水重新悬置胶束，再次高速离心，弃上清液，清洗3次，冷冻干燥，得到第二改性胶束；（7）将具有靶向功能的多肽cs溶解于pbs缓冲液中，然后悬置所述第二改性胶束，得到第三混合液（cs和第二改性胶束的终浓度分别为0.02 mg/ml和1 mg/ml）；将所述第三混合液在254nm紫外光辐照下进行搅拌反应15min，再高速离心分离以弃去上清液，即得所述具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束。
30.实施例3本实施例提供一种具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：（1）将载药吐温-80胶束均匀分散于乙醇/水混合溶液中，得到胶束悬浊液；其中，乙醇与水的体积比为1:4；（2）将没食子酸、2,2,4-三甲基六亚甲基二胺、高碘酸钠和铁离子（fe
3+
）分别溶解于ph为3.5的邻苯二甲酸-盐酸缓冲液中，分别得到没食子酸缓冲液、2,2,4-三甲基六亚甲基二胺缓冲液、高碘酸钠缓冲液和铁离子缓冲液；（3）在所述胶束悬浊液中，依次加入所述没食子酸缓冲液、所述2,2,4-三甲基六亚甲基二胺缓冲液、所述高碘酸钠缓冲液，得到第一混合液；所述第一混合液在15℃下反应
10h后，得到第一反应液；其中，所述第一混合液中，所述胶束的浓度为6 mg/ml，所述没食子酸的浓度为3 mg/ml，所述2,2,4-三甲基六亚甲基二胺的浓度为3 mg/ml，所述高碘酸钠的浓度为3 mg/ml；（4）将所述第一反应液在12000r/min条件下高速离心30s，弃上清液，加ro水重新悬置胶束，再次高速离心，弃上清液，清洗3次，冷冻干燥，得到第一改性胶束；（5）将所述第一改性胶束采用邻苯二甲酸-盐酸缓冲液悬置后加入铁离子缓冲液，得到第二混合液；所述第二混合液在15℃下反应8h，得到第二反应液；其中，所述第二混合液中，所述第一改性胶束的浓度为4 mg/ml，所述铁离子的浓度为0.2 mg/ml；（6）将所述第二反应液在12000r/min条件下高速离心30s，弃上清液，加ro水重新悬置胶束，再次高速离心，弃上清液，清洗3次，冷冻干燥，得到第二改性胶束；（7）将具有靶向功能的多肽ceplqlkm溶解于pbs缓冲液中，然后悬置所述第二改性胶束，得到第三混合液（ceplqlkm和第二改性胶束的终浓度分别0.06 mg/ml和4 mg/ml）；将所述第三混合液在365nm紫外光辐照下进行搅拌反应35min，再高速离心分离以弃去上清液，即得所述具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束。
31.实施例4本实施例提供一种具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：（1）将载药司盘80胶束均匀分散于乙醇/水混合溶液中，得到胶束悬浊液；其中，乙醇与水的体积比为1:1；（2）将邻苯三酚、1,8-二氨基辛烷、过硫酸铵和银离子分别溶解于ph为4的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中，分别得到邻苯三酚缓冲液、1,8-二氨基辛烷缓冲液、过硫酸铵缓冲液和银离子缓冲液；（3）在所述胶束悬浊液中，依次加入所述邻苯三酚缓冲液、所述1,8-二氨基辛烷缓冲液、所述过硫酸铵缓冲液，得到第一混合液；所述第一混合液在35℃下反应1h后，得到第一反应液；其中，所述第一混合液中，所述胶束的浓度为2 mg/ml，所述邻苯三酚的浓度为2 mg/ml，所述1,8-二氨基辛烷的浓度为1.5 mg/ml，所述过硫酸铵的浓度为2 mg/ml；（4）将所述第一反应液在12000r/min条件下高速离心30s，弃上清液，加ro水重新悬置胶束，再次高速离心，弃上清液，清洗3次，冷冻干燥，得到第一改性胶束；（5）将所述第一改性胶束采用柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液悬置后加入银离子缓冲液，得到第二混合液；所述第二混合液在35℃下反应1h，得到第二反应液；其中，所述第二混合液中，所述第一改性胶束的浓度为1 mg/ml，所述银离子的浓度为0.01 mg/ml；（6）将所述第二反应液在12000r/min条件下高速离心30s，弃上清液，加ro水重新悬置胶束，再次高速离心，弃上清液，清洗3次，冷冻干燥，得到第二改性胶束；（7）将具有靶向功能的多肽ccreka溶解于pbs缓冲液中，然后悬置所述第二改性胶束，得到第三混合液（ccreka和第二改性胶束的终浓度分别0.1 mg/ml和5 mg/ml）；将所述第三混合液在312nm紫外光辐照下进行搅拌反应50min，再高速离心分离以弃去上清液，即得所述具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束。
32.实施例5本实施例提供一种具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束的制备方法，所述制备方
法包括如下步骤：（1）将载药聚氧乙烯脂肪酸脂-52胶束均匀分散于乙醇/水混合溶液中，得到胶束悬浊液；其中，乙醇与水的体积比为0.5:4.5；（2）将表儿茶素没食子酸酯、1,3-二氨基甲基环己烷、重铬酸钾和锌离子分别溶解于ph为5.5的甘氨酸-盐酸缓冲液中，分别得到表儿茶素没食子酸酯缓冲液、1,3-二氨基甲基环己烷缓冲液、重铬酸钾缓冲液和锌离子缓冲液；（3）在所述胶束悬浊液中，依次加入所述表儿茶素没食子酸酯缓冲液、所述1,3-二氨基甲基环己烷缓冲液、所述重铬酸钾缓冲液，得到第一混合液；所述第一混合液在35℃下反应0.5h后，得到第一反应液；其中，所述第一混合液中，所述胶束的浓度为6 mg/ml，所述表儿茶素没食子酸酯的浓度为2 mg/ml，所述1,3-二氨基甲基环己烷的浓度为6 mg/ml，所述重铬酸钾的浓度为2 mg/ml；（4）将所述第一反应液在12000r/min条件下高速离心30s，弃上清液，加ro水重新悬置胶束，再次高速离心，弃上清液，清洗3次，冷冻干燥，得到第一改性胶束；（5）将所述第一改性胶束采用甘氨酸-盐酸缓冲液悬置后加入锌离子缓冲液，得到第二混合液；所述第二混合液在35℃下反应4h，得到第二反应液；其中，所述第二混合液中，所述第一改性胶束的浓度为8 mg/ml，所述锌离子的浓度为0.4 mg/ml；（6）将所述第二反应液在12000r/min条件下高速离心30s，弃上清液，加ro水重新悬置胶束，再次高速离心，弃上清液，清洗3次，冷冻干燥，得到第二改性胶束；（7）将具有靶向功能的多肽cvhpkqhrggskgc溶解于pbs缓冲液中，然后悬置所述第二改性胶束，得到第三混合液（cvhpkqhrggskgc和第二改性胶束的终浓度分别0.01 mg/ml和1 mg/ml）；将所述第三混合液在312nm紫外光辐照下进行搅拌反应10min，再高速离心分离以弃去上清液，即得所述具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束。
33.实施例6本实施例提供一种具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：（1）将载药泊洛沙姆188胶束均匀分散于乙醇/水混合溶液中，得到胶束悬浊液；其中，乙醇与水的体积比为1:4；（2）将表没食子儿茶素、甲基环己烷二胺、30 %过氧化氢和锰离子分别溶解于ph为6.5的乙酸-乙酸盐缓冲液中，分别得到表没食子儿茶素缓冲液、甲基环己烷二胺缓冲液、30 %过氧化氢缓冲液和锰离子缓冲液；（3）在所述胶束悬浊液中，依次加入所述表没食子儿茶素缓冲液、所述甲基环己烷二胺缓冲液、所述30 %过氧化氢缓冲液，得到第一混合液；所述第一混合液在15℃下反应8h后，得到第一反应液；其中，所述第一混合液中，所述胶束的浓度为8 mg/ml，所述表没食子儿茶素的浓度为6 mg/ml，所述甲基环己烷二胺的浓度为4 mg/ml，所述30 %过氧化氢的浓度为5 %；（4）将所述第一反应液在12000r/min条件下高速离心30s，弃上清液，加ro水重新悬置胶束，再次高速离心，弃上清液，清洗3次，冷冻干燥，得到第一改性胶束；（5）将所述第一改性胶束采用乙酸-乙酸盐冲液悬置后加入锰离子缓冲液，得到第二混合液；所述第二混合液在15℃下反应8h，得到第二反应液；其中，所述第二混合液中，所
述第一改性胶束的浓度为8 mg/ml，所述锌离子的浓度为0.4 mg/ml；（6）将所述第二反应液在12000r/min条件下高速离心30s，弃上清液，加ro水重新悬置胶束，再次高速离心，弃上清液，清洗3次，冷冻干燥，得到第二改性胶束；（7）将具有靶向功能的多肽g3-c12溶解于pbs缓冲液中，然后悬置所述第二改性胶束，得到第三混合液（g3-c12和第二改性胶束的终浓度分别0.4 mg/ml和8 mg/ml）；将所述第三混合液在254nm紫外光辐照下进行搅拌反应60min，再高速离心分离以弃去上清液，即得所述具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束。
34.验证例实施例1所得产品的透射电镜图如图1所示，从图中可以看出，相应的具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束是具有明显的核-壳-壳结构，且在溶液中分散均匀，大小均一。同时，对其进行电子衍射观察，如图2所示，在胶束的外壳部分可以明显发现晶格，证明ag
+
成功修饰到胶束表面。
35.将实施例1中制备得到的具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束通过导电胶固定在玻片表面，用xps检测表面化学元素，由图3可知，通过xps全谱可以发现s元素的存在，而s元素代表巯基修饰的靶向分子成功接枝到了核壳壳胶束的表面，证明所制备的胶束具有靶向病理组织的潜在可能。
36.以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

技术特征：
1.一种具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：（1）将载药胶束分散于乙醇/水混合溶液中，得到胶束悬浊液；（2）在所述胶束悬浊液中，依次加入多酚类酸性缓冲液、多胺基酸性缓冲液和氧化剂酸性缓冲液，得到第一混合液；所述第一混合液反应后，得到第一反应液；（3）将所述第一反应液离心分离，弃去上清液，然后依次清洗、干燥，得到第一改性胶束；（4）将所述第一改性胶束采用酸性缓冲液重悬，并加入金属离子酸性缓冲液，得到第二混合液；所述第二混合液反应后，得到第二反应液；（5）将所述第二反应液离心分离，弃去上清液，然后依次清洗、干燥，得到第二改性胶束；（6）将具有靶向功能的多肽溶解于pbs缓冲液中，然后悬置所述第二改性胶束，得到第三混合液；所述第三混合液于紫外光下进行反应，再离心分离，弃去上清液，即得所述具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束。2.根据权利要求1所述具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述载药胶束为阴离子载药胶束、阳离子载药胶束、两性型载药胶束、多元醇型载药胶束、聚氧乙烯型载药胶束或聚氧乙烯-聚氧丙烯型载药胶束中的一种；所述乙醇/水混合溶液中，乙醇与水的体积比为0.5~5:0.5~5。3.根据权利要求1所述具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述多酚类酸性缓冲液由多酚类化合物和酸性缓冲液混合而成，所述多酚类化合物为单宁酸、没食子酸、丹酚酸b、表没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、表儿茶素、表没食子儿茶素、邻苯二酚、邻苯三酚、黄酮类中的一种或两种以上的组合；和/或，步骤（2）中，所述多胺基酸性缓冲液由多胺基化合物和酸性缓冲液混合而成，所述多胺基化合物为乙二胺、戊二胺、2,2,4-三甲基六亚甲基二胺、1,8-二氨基辛烷、甲基环己烷二胺、1,3-二氨基甲基环己烷、2,4,6-三氨甲基环己烷、1,4-双二氨已基环己烷、2-(3,4-二羟基苯基)乙胺中的一种或两种以上的组合；和/或，步骤（2）中，所述氧化剂酸性缓冲液由氧化剂和酸性缓冲液混合而成，所述氧化剂为过氧化氢、过硫酸铵、浓硝酸、高碘酸钠、高锰酸钾、重铬酸钾中的一种或两种以上的组合；和/或，步骤（4）中，所述金属离子酸性缓冲液由金属离子和酸性缓冲液混合而成，所述金属离子为铜离子、银离子、锌离子和铁离子中的一种或两种以上的组合。4.根据权利要求3所述具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束的制备方法，其特征在于，所述酸性缓冲液的ph为3~7；所述酸性缓冲液为乙酸-乙酸盐缓冲液、2-(n-吗啡啉)乙磺酸缓冲液、甘氨酸-盐酸缓冲液、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中的一种。5.根据权利要求3所述具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，在所述第一混合液中，所述载药胶束的浓度为0.5~10 mg/ml，所述多酚类化合物的浓度为0.5~10 mg/ml，所述多胺基化合物的浓度为0.5~10 mg/ml，所述氧化剂的浓度
为0.5~10 mg/ml。6.根据权利要求1所述具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，在所述第二混合液中，所述第一改性胶束的浓度为0.5~10 mg/ml，所述金属离子的浓度为0.01~0.5 mg/ml。7.根据权利要求1所述具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束的制备方法，其特征在于，步骤（2）和步骤（4）中，反应的温度为10~40℃，反应的时间为0.1~10h。8.根据权利要求1所述具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束的制备方法，其特征在于，步骤（6）中，所述具有靶向功能的多肽为clpvasc、ceplqlkm、cs、ccreka、cvhpkqhrggskgc、g3-c12中的一种；在所述第三混合液中，所述具有靶向功能的多肽的浓度为0.01~0.5 mg/ml，所述第二改性胶束的浓度为0.5~10 mg/ml；所述紫外光波长为254~365nm，所述反应时间为5~120min。9.权利要求1~8任一所述制备方法得到的具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束。

技术总结
本发明属于药物载体领域，具体涉及一种具有靶向功能的核壳壳结构药物胶束及其制备方法。本发明所述制备方法能在载药胶束壳表面生成的多酚/金属复合物层，其既可作为载药胶束的“保护层”，也可作为“活性层”并赋予胶束相关的生物学功能；同时该多酚/金属复合物层具有大量的活性官能团，如酚羟基、胺基、羧基、双键等，且此类官能团可作为二次反应平台，与具有靶向功能的多肽反应，使所述核壳壳结构胶束同时具有优异的稳定性、生物相容性和靶向性，既延长了载药胶束的循环代谢时间也提高了药物在病灶位置的富集率，并可进一步用于如肿瘤、急/慢性肾脏病、干眼症、心血管疾病、消化道疾病等的治疗。病等的治疗。病等的治疗。


技术研发人员：李林华 曾筱茜 付平
受保护的技术使用者：四川大学华西医院
技术研发日：2023.07.13
技术公布日：2023/8/13