绿原酸-黄芹素偶合物及其制备方法和应用

1.本发明涉及药物化学技术领域，特别涉及一种绿原酸-黄芹素偶合物及其制备方法和应用。


背景技术：

2.目前的抗痛风药物主要包含黄嘌呤氧化酶抑制剂、促尿酸排泄药以及抗炎药三大类。黄嘌呤氧化酶抑制剂和促尿酸排泄药主要用于降低尿酸水平，抗炎药则用于痛风急性发作期，二者单独使用时对于急性痛风治疗效果较差。降尿酸药物和抗炎药联合应用时才能对急性痛风治疗发挥较好的效果。
3.绿原酸具有良好的抗炎活性，对炎症相关性疾病具有良好的防治作用，如对奶牛乳腺炎有明显的治疗效果，也可通过抑制透明质酸酶的活性起到抗炎作用。绿原酸可有效抑制nlrp3炎性小体活化，对于急性痛风的防治具有良好潜力。绿原酸较差的稳定性和药代动力学性质限制了它的临床应用，因而常常对绿原酸进行结构修饰来提高稳定性和抗炎活性，如1-位羧基乙酯化产物及3,5-位双咖啡酰基取代的绿原酸衍生物，其抗炎活性较绿原酸均有所提高。
4.黄酮化合物具有抗氧化、抗菌、抗病毒和抗癌等作用。黄酮化合物抑制xod(黄嘌呤氧化酶)降低血清尿酸水平已得到较为详尽的研究，其中黄芹素、槲皮素、桑色素等黄酮化合物对xod均具有很强的亲和力，是一类良好的天然xodi(黄嘌呤氧化酶抑制剂)。与非布索坦等化学小分子xodi相比，黄酮类xodi活性良好且毒副作用小，但黄酮类化合物较差的理化性质和药代性质限制了其在痛风治疗中的开发和应用，通过化学修饰对黄酮化合物进行改造优化其成药性对于扩展黄酮类化合物在痛风治疗中的应用具有重要意义。
5.鉴于绿原酸良好的nlrp3抑制活性及其在急性痛风治疗中的应用潜力和黄酮类化合物良好的xod抑制活性，本发明根据药物拼合原理，设计并合成一类通过不同连接链连接的绿原酸-黄芹素偶合物。


技术实现要素：

6.本发明目的在于提供一种绿原酸-黄芹素偶合物及其制备方法和在痛风治疗中的应用。本发明中的绿原酸-黄芹素偶合物具有良好的xod和nlrp3抑制活性，表现出良好的痛风治疗效果。本发明的绿原酸-黄芹素偶合物的合成方法简单高效。本发明提供的绿原酸-黄芹素偶合物，相对于原有药物而言，具有增加脂溶性及稳定性、改变吸收性能、提高药效和降低毒性等特点。
7.本发明的绿原酸-黄芹素偶合物是具有通式i或通式ⅱ所示结构的化合物:
，，其中：r1和r2可以相同或不同，分别为h、烷基、芳基、杂环芳基、c(o)-烷基、c(o)-芳基、c(o)-杂环芳基、c(o)-胺基中的任意一种；r3和r4可以相同或不同，分别为h、烷基、芳基、杂环芳基、c(o)-烷基、c(o)-芳基、c(o)-杂环芳基、c(o)-胺基中的任意一种；通式i中：m = 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14，n = 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12；通式ⅱ中，m = 1、2、3、4、5或6；n = 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。
8.本发明提供了一种绿原酸-黄芹素偶合物制备方法，其过程如下：称取1eq化合物4a、化合物4b、化合物4c或化合物4d和1eq hobt, 2eq edci于反应容器中, 加入dmf溶解后, 于室温搅拌反应10 min，随后加入1.2 eq化合物7a，于室温反应完全后加入清水，然后用乙酸乙酯萃取，合并有机层依次用清水、饱和食盐水洗涤，有机层经无水硫酸钠干燥后减压浓缩过柱，得到浅黄色泡沫状固体，为化合物10a、化合物10b、化合物10c或化合物10d，即为绿原酸-黄芹素偶合物。
9.本发明提供了另一种绿原酸-黄芹素偶合物制备方法，其过程如下：称取1eq化合物4a和1eq hobt, 2eq edci于反应容器中, 加入dmf溶解后, 于室温搅拌反应，随后加入1.2 eq化合物7b、化合物7c 、化合物7d、化合物7e中的任意一种，室温反应完全后加入清水，然后用乙酸乙酯萃取，合并有机层依次用清水、饱和食盐水洗涤，有机层经无水硫酸钠干燥后减压浓缩过柱，得到浅黄色泡沫状固体，为化合物11a、化合物11b、化合物11c或化合物11d，即为绿原酸-黄芹素偶合物。
10.本发明提供了另一种绿原酸-黄芹素偶合物制备方法，其过程如下：
称取1eq化合物4a和1eq hobt, 2eq edci于反应容器中, 加入dmf溶解后, 于室温搅拌反应，随后加入1.2 eq化合物9a、化合物9b、化合物9c、化合物9d中的任意一种，于室温反应完全后加入清水，然后用乙酸乙酯萃取，合并有机层依次用清水、饱和食盐水洗涤，有机层经无水硫酸钠干燥后减压浓缩过柱，得到浅黄色泡沫状固体，为化合物12a、化合物12b、化合物12c或化合物12d，即为绿原酸-黄芹素偶合物。
11.本发明所涉及的研究包括但不限于如下因素：其一，对绿原酸结构中的活性羧酸部位进行化学修饰，偶联上活性分子黄芹素，通过抗炎/降尿酸双重作用增强药效；其二，为了找到活性强、稳定性更好的绿原酸衍生物，将其结构中酚羟基和醇羟基等部位进行保护，增强药物在体内的代谢稳定性。其三，对以上绿原酸-黄芹素偶合物进行药理活性筛选主要包括体内外的抗炎和降尿酸活性测试。通过构效关系分析，以构效关系研究结果进一步指导化学合成，找到活性更强，化学性质更稳定可用于临床的新药物。
12.连接链在蛋白水解靶向嵌合体和抗体偶联药物的开发中得到了广泛且详细的研究，发现连接链对于偶合分子的理化性质、成药性和活性具有重要影响。本发明将合成一系列含不同连接链和保护基团的绿原酸-黄芹素偶合物，并系统考察连接链的长度、种类、刚性等因素对绿原酸-黄芹素偶合物理化性质和活性的影响。
13.在另一方面，本发明还针对绿原酸-黄芹素偶合物的药理活性进行了研究。高尿酸血症是痛风发病的生化基础，黄嘌呤氧化酶是尿酸生成过程中的关键酶。黄芹素具有黄嘌呤氧化酶抑制作用，通过抑制黄嘌呤氧化酶活性可减少尿酸的生成，降低体内的尿酸水平。因此，首先测定了绿原酸-黄芹素偶合物对黄嘌呤氧化酶的抑制活性。发现，所合成的绿原酸-黄芹素偶合物具有良好的黄嘌呤氧化酶抑制活性。
14.同时，炎症在痛风疾病的发展中起到关键作用，nlrp3炎性小体是痛风炎症发展过程中的重要识别受体，可作为痛风治疗中的作用靶标，抑制nlrp3炎性小体可有效抑制痛风发展过程中炎症因子的释放。绿原酸可以较好的抑制nlrp3活性，能够抑制炎症因子的释放和炎症过程的发展。因此，随后本发明对合成的绿原酸-黄芹素偶合物进行了nlrp3抑制活性测试，发现绿原酸-黄芹素偶合物具有较好的nlrp3抑制活性。
15.本发明提供了绿原酸-黄芹素偶合物在制备预防或治疗痛风性疾病药物中的应用，所述痛风性疾病包括急性痛风性关节炎、慢性痛风性关节炎、间歇性痛风性关节炎、药源性肝损伤、急性肾损伤或神经疼痛等疾病。
16.本发明提供了绿原酸-黄芹素偶合物在制备预防或治疗炎症感染性疾病药物中的应用,所述炎症感染性疾病包括: 痛风性关节炎、炎性肠病、脑(脊)膜炎、胰腺炎、腹膜炎、血管炎(病)、肾小球肾炎、肝炎、角膜炎、白内障、老年性黄斑退行性改变和视神经炎疾病。
17.本发明通过对绿原酸的化学修饰提供了具有新结构的绿原酸-黄芹素偶合物。本发明所提供的绿原酸-黄芹素偶合物具有如下特点：其一，增加了脂溶性，通过以前药形式进入体内，口服后在体内酶催化及胃液的酸性环境下，代谢出原药发挥药效，延长了半衰
期，增强了药效；其二，增强了稳定性，使药物固有的母核结构不会破坏，维持了其活性部位的完整性；其三，通过双重药物作用，提高了药物的疗效。
附图说明
18.图1为化合物10a、化合物10b、化合物10c和化合物10d分别对xod的抑制活性。
19.图2为化合物12a、化合物12b、化合物12c和化合物12d分别对xod的抑制活性。
20.图3为绿原酸-黄芹素偶合物对脂多糖诱导的raw264.7细胞中no生成的影响。
21.图4为绿原酸-黄芹素偶合物对脂多糖诱导的raw264.7细胞存活率的影响。
22.图5为绿原酸-黄芹素偶合物对脂多糖诱导的raw264.7细胞形态的影响。
23.图6为化合物10a的氢谱。
24.图7为化合物10a的碳谱。
具体实施方式
25.为了便于参考，现对其中某些术语进行定义。
[0026]“烷基”是指未被取代的或被取代的直链、支链或环形的多至15个碳原子的烷基碳链。直链烷基包括，甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基和正辛基。环状烷基（“环烷基”）包括，例如，环丙基、环丁基、环戊基和环己基。烷基可被一个或多个取代基取代。上述取代基的非限定性例子包括nh2、no2、n(ch3)2、ono2、f、cl、br、i、oh、och3、co2h、co2ch3、cn、芳基和杂芳基。术语“烷基”也指未取代或取代的直链、支链或环状的含有多至15个碳原子的在链上含有至少一个杂原子（例如氮、氧或硫）的烷基。上述直链烷基包括，例如，ch2ch2och3、ch2ch2n(ch3)2和ch2ch2sch3。支链基团包括，例如，ch2ch(och3)ch3、ch2ch(n(ch3)2)ch3和ch2ch(och3)ch3。上述环状基团包括，例如，ch(ch2ch2)2o、h(ch2ch2)2nch3和ch(ch2ch2)2s。上述烷基可被一个或多个取代基取代。上述取代基的非限定性例子包括nh2、no2、n(ch3)2、ono2、f、cl、br、i、oh、och3、co2h、co2ch3、cn、芳基和杂芳基。
[0027]
本文所用的术语“芳基”是指未被取代的或取代的芳香化合物、碳环基团。芳基或者是单环或者是多环稠合化合物。例如，苯基是单环芳基。萘基是具有多环稠合的芳基的例子。芳基可以被一个或多个取代基取代。取代基的非限制性的例子包括nh2、no2、n(ch3)2、ono2、f、cl、br、i、oh、och3、co2h、co2ch3、cn、芳基和杂芳基。
[0028]
本发明提供的绿原酸-黄芹素偶合物，其具有通式i的结构：其中：r1和r2可以相同或不同，分别为h、烷基、芳基、杂环芳基、c(o)-烷基、c(o)-芳基、c(o)-杂环芳基、c(o)-胺基；r3和r4可以相同或不同，分别为h、烷基、芳基、杂环芳基、c(o)-烷基、c(o)-芳基、c(o)-杂环芳基、c(o)-胺基；m = 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14；n = 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12。
[0029]
通式i的绿原酸-黄芹素偶合物合成路线如下：
本发明提供的绿原酸-黄芹素偶合物，其具有如下通式ⅱ的结构：其中：r1和r2可以相同或不同，分别为h、烷基、芳基、杂环芳基、c(o)-烷基、c(o)-芳基、c(o)-杂环芳基、c(o)-胺基；r3和r4可以相同或不同，分别为h、烷基、芳基、杂环芳基、c(o)-烷基、c(o)-芳基、c(o)-杂环芳基、c(o)-胺基；m = 1、2、3、4、5、6；n = 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12。
[0030]
通式ⅱ结构的绿原酸-黄芹素偶合物合成如下：
1h), 8.02 (d, j = 8.8 hz, 2h), 7.10 (d, j = 9.0 hz, 2h), 6.87 (s, 1h), 6.51 (d, j = 2.0 hz, 1h), 6.20 (d, j = 2.0 hz, 1h), 4.13
–ꢀ
4.01 (m, 4h), 2.38 (t, j = 7.2 hz, 2h), 1.82
–
1.62 (m, 2h), 1.18 (t, j = 7.2 hz, 3h)。
[0037]
化合物3c的合成: 将化合物2c (1.86 g, 3.64 mmol，1eq)溶于thf/mecn = 1/1 的混合液 (40 ml)中，于ar氛围冰浴条件下缓慢滴加tmsi (3.1 ml,21.8 mmol, 6.0 eq)，滴加完毕后升温至室温反应过夜。tlc监测反应完全后，加入硫代硫酸钠饱和水溶液淬灭反应至浅黄色或无色，随后用ea (40 ml
×
3)萃取，合并有机层再用硫代硫酸钠饱和水溶液 (40 ml )、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后旋干过柱 (dcm/thf = 50/1-20/1)，得到黄色固体1.03g，收率60%。1h nmr (400 mhz, dmso) δ 12.93 (s, 1h), 10.85 (s, 1h), 8.02 (d, j = 8.8 hz, 2h), 7.09 (d, j = 8.8 hz, 2h), 6.86 (s, 1h), 6.50 (d, j = 2.0 hz, 1h), 6.20 (d, j = 2.0 hz, 1h), 4.13
–ꢀ
3.98 (m, 4h), 2.26 (t, j = 7.4 hz, 2h), 1.79
–
1.69 (m, 2h), 1.56
–
1.47 (m, 2h), 1.41 (d, j = 7.6 hz, 2h), 1.26 (s, 8h), 1.21
–
1.14 (m, 3h)。
[0038]
化合物3d的合成: 将化合物2d (2.24 g, 4.27 mmol，1eq)溶于thf/mecn = 1/1 的混合液 (40 ml)中，于ar氛围冰浴条件下缓慢滴加tmsi (3.7 ml, 25.6 mmol, 6.0 eq)，滴加完毕后升温至室温反应过夜。tlc监测反应完全后，加入硫代硫酸钠饱和水溶液淬灭反应至浅黄色或无色，随后用ea (40 ml
×
2)萃取，合并有机层再用硫代硫酸钠饱和水溶液 (40 ml )、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后旋干过柱 (dcm/thf = 50/1-20/1)，得到黄色固体854 mg，收率42%。1h nmr (400 mhz, dmso) δ: 12.93 (s, 1h), 10.85 (s, 1h), 8.01 (d, j = 8.8 hz, 2h), 7.09 (d, j = 8.8 hz, 2h), 6.86 (s, 1h), 6.50 (d, j = 2.0 hz, 1h), 6.20 (d, j = 2.0 hz, 1h), 4.13
–ꢀ
3.97 (m, 4h), 2.26 (t, j = 7.4 hz, 2h), 1.79
–
1.67 (m, 2h), 1.56
–
1.46 (m, 2h), 1.40 (d, j = 7.8 hz, 2h), 1.25 (s, 10h), 1.17 (t, j = 7.0 hz, 3h)。
[0039]
化合物4a的合成: 将化合物3a (1.23g, 3.45 mmol, 1eq) 溶于thf (20 ml)中，而后加入氢氧化锂 (0.58 g, 13.8 mmol，4eq)的水溶液 (5 ml), 于30 ℃反应过夜。至次日tlc监测反应完全后，减压蒸馏除去thf，用3n稀盐酸调ph至2-3，而后用乙酸乙酯 (20 ml
×
5)萃取，合并有机层用饱和食盐水洗涤后，经无水硫酸钠干后燥旋干得到浅黄色固体产物767 mg, 68% 收率。1h nmr (400 mhz, dmso) δ: 12.91 (s, 1h), 10.87 (s, 1h), 8.07 (d, j = 8.8 hz, 2h), 7.12 (d, j = 8.8 hz, 2h), 6.8i (d, j = 2.0 hz, 1h), 6.51 (d, j = 2.0 hz, 1h), 6.21 (s, 1h), 4.84 (s, 2h)。
[0040]
化合物4b的合成: 将化合物3b (878 mg, 2.30 mmol, 1eq) 溶于thf (20 ml)中，而后加入氢氧化锂 (0.36 g, 9.15 mmol，4eq)的水溶液 (5 ml), 于30 ℃反应过夜。至次日tlc监测反应完全后，减压蒸馏除去thf，用3n稀盐酸调ph至2-3，而后用乙酸乙酯 (20 ml
×
5)萃取，合并有机层用饱和食盐水洗涤后，经无水硫酸钠干燥旋干后得到浅黄色固体产物530 mg， 65%收率。1h nmr (400 mhz, dmso) δ: 12.93 (s, 1h), 10.85 (s, 1h), 8.02 (d, j = 8.8 hz, 2h), 7.10 (d, j = 9.0 hz, 2h), 6.87 (s, 1h), 6.51 (d, j = 2.0 hz, 1h), 6.20 (d, j = 2.0 hz, 1h), 4.13
–
4.01 (m, 4h), 1.82
–
1.62 (m, 2h)。
[0041]
化合物4c的合成: 将化合物3c (1.03 g, 2.2 mmol, 1eq) 溶于thf (20 ml)中，
而后加入氢氧化锂 (0.35 g, 8.8 mmol，4eq)的水溶液 (5 ml), 于30 ℃反应过夜。至次日tlc监测反应完全后，减压蒸馏除去thf，用3n稀盐酸调ph至2-3，而后用乙酸乙酯 (20 ml
×
5)萃取，合并有机层用饱和食盐水洗涤后，经无水硫酸钠干燥旋干后得到浅黄色固体产物677 mg，70% 收率。1h nmr (400 mhz, dmso) δ: 12.93 (s, 1h), 10.85 (s, 1h), 8.02 (d, j = 8.8 hz, 2h), 7.09 (d, j = 8.8 hz, 2h), 6.86 (s, 1h), 6.50 (d, j = 2.0 hz, 1h), 6.20 (d, j = 2.0 hz, 1h), 4.13
–ꢀ
3.98 (m, 2h), 2.26 (t, j = 7.4 hz, 2h), 1.79
–
1.69 (m, 2h), 1.56
–
1.47 (m, 2h), 1.41 (d, j = 7.6 hz, 2h), 1.26 (s, 8h)。
[0042]
化合物4d的合成: 将化合物3d (854 mg, 1.77 mmol, 1eq) 溶于thf (15 ml)中，而后加入氢氧化锂 (0.28 g, 7.1 mmol，4eq)的水溶液 (3 ml), 于30 ℃反应过夜。至次日tlc监测反应完全后，减压蒸馏除去thf，用3n稀盐酸调ph至2-3，而后用乙酸乙酯 (20 ml
×
5)萃取，合并有机层用饱和食盐水洗涤后，经无水硫酸钠干燥旋干后得到浅黄色固体产物530 mg，66% 收率。1h nmr (400 mhz, dmso) δ: 12.93 (s, 1h), 10.85 (s, 1h), 8.01 (d, j = 8.8 hz, 2h), 7.09 (d, j = 8.8 hz, 2h), 6.86 (s, 1h), 6.50 (d, j = 2.0 hz, 1h), 6.20 (d, j = 2.0 hz, 1h), 4.13
–
3.97 (m, 2h), 2.26 (t, j = 7.4 hz, 2h), 1.79
–
1.67 (m, 2h), 1.56
–
1.46 (m, 2h), 1.40 (d, j = 7.8 hz, 2h), 1.25 (s, 10h)。
[0043]
实施例2化合物5的合成：称取绿原酸 (10.6 g, 30.0 mmol，1eq)，和dmap (732.0 mg, 6.0 mmol，0.2 eq )于250 ml圆底烧瓶中，随后加入醋酸酐 (20 ml)和吡啶 (10 ml), 加完后于室温反应过夜。至次日tlc监测反应完全后，将反应液倒入冰水混合物100 ml中，并于室温搅拌30 min。随后用3n稀盐酸调ph至2-3，随后有白色固体析出，滤出固体并用适量清水洗涤，干燥后得到目标产物白色固体约12g，71%收率。
[0044]
化合物6a的合成：将化合物5 (1.1 g, 2.0 mmol，1eq)，hobt (0.27 g, 2.0 mmol，1eq), edci (764 mg, 4. 0 mmol，2eq)称于100 ml圆底烧瓶中，加入二氯甲烷 (50 ml) 溶解后，于室温搅拌15min。随后加入n-叔丁氧羰基-乙二胺 (640 mg, 4.0 mmol, 2eq)，于室温搅拌反应2-3h。tlc监测反应完全后，加入二氯甲烷 (50 ml)稀释，随后依次用清水 (20 ml
×
2)，饱和食盐水(20 ml)洗涤，有机层经无水硫酸钠干燥后减压浓缩，粗产物经柱层析 (dcm/meoh = 80/1-20/1)得到目标产物6a为白色泡沫状固体650 mg，46% 收率。
[0045]
化合物7a的合成：将化合物6a ( 0.9 mmol，650 mg，1eq)溶于dcm (10.35 ml)中，随后加入tfa ( 45 mmol，3.45 ml, 50eq), 其中体积比 (dcm: tfa) = 3/1, 于室温搅拌反应2-3h。tlc监测反应完全后，减压除去二氯甲烷，随后加入二氯甲烷再次旋干，重复操作3次，所得粗产物经柱层析纯化得到白色泡沫状固体 500 mg, 91% 收率。1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ: 8.00 (s, 1h), 7.76 (s, 2h), 7.58 (d, j = 15.8 hz, 1h), 7.45
–
29.2, 12.0 hz, 2h), 2.22 (s, 6h), 2.10
–
2.02 (m, 3h), 1.99 (d, j = 2.8 hz, 4h), 1.92 (s, 3h), 1.51 (s, 2h), 1.31 (s, 2h), 1.23
–
1.06 (m, 4h)；c
32h42
n2o
13 + h
+
, cal 663.2765 found, 663.2777; + na
+
,685.2585, found,685.2598。
[0050]
化合物6d的合成：将化合物5 (1.03 g, 1.83 mmol，1eq)，hobt (0.247 g, 1.83 mmol，1eq), edci (700 mg, 3. 66 mmol，2eq)称于100 ml圆底烧瓶中，加入二氯甲烷 (50 ml) 溶解后，于室温搅拌15 min。随后加入n-叔丁氧羰基-1,7-二氨基庚烷 (842 mg, 3. 66 mmol, 2eq)，于室温搅拌反应2-3 h。tlc监测反应完全后，加入二氯甲烷 (50 ml)稀释，随后依次用清水 (20 ml
×
2)，饱和食盐水 (20 ml)洗涤，有机层经无水硫酸钠干燥后减压浓缩，粗产物经柱层析 (dcm/meoh = 80/1-20/1)得到目标产物为白色泡沫状固体600 mg，42% 收率。
[0051]
化合物7d的合成：将化合物6d ( 0.77 mmol，600 mg，1eq)溶于dcm (8.85 ml)中，随后加入tfa ( 38.5 mmol，2.95 ml, 50.0 eq), 其中体积比 (dcm:tfa) = 3/1, 于室温搅拌反应2-3 h。tlc监测反应完全后，减压除去二氯甲烷，随后加入二氯甲烷再次旋干，重复操作3次，所得粗产物经柱层析纯化得到白色泡沫状固体 417 mg, 80% 收率。1h nmr (400 mhz, cdcl3): δ 7.60 (d, j = 15.8 hz, 1h), 7.45
–
7.33 (m, 2h), 7.22 (d, j = 8.4 hz, 1h), 6.50 (s, 1h), 6.33 (d, j = 16.0 hz, 1h), 5.62 (d, j = 3.2 hz, 1h), 5.50 (td, j = 10.2, 4.8 hz, 1h), 5.12 (dd, j = 10.0, 3.2 hz, 1h), 3.50 (s, 4h), 3.25
–
3.04 (m, 2h), 2.78 (d, j = 15.2 hz, 1h), 2.51 (dd, j = 31.2, 14.6 hz, 2h), 2.30 (s, 6h), 2.15 (s, 3h), 2.08 (s, 3h), 1.98 (s, 4h), 1.58 (s, 2h), 1.39 (s, 2h), 1.32
–
1.13 (m, 6h)；c
33h44
n2o
13 + h
+
, cal 677.2922 found, 677.2930.+ na
+
,699.2741, found,699.2751。
[0052]
化合物6e的合成：将化合物5 (0.79 g, 1.4 mmol，1eq)，hobt (0.19 g, 1.4 mmol，1eq), edci (535 mg, 2.8 mmol，2eq)称于100 ml圆底烧瓶中，加入二氯甲烷 (50 ml) 溶解后，于室温搅拌15min。随后加入n-叔丁氧羰基-1,12-二氨基十二烷(840 mg, 2.8 mmol, 2eq)，于室温搅拌反应2-3h。tlc监测反应完全后，加入二氯甲烷 (50 ml)稀释，随后依次用清水 (20 ml
×
2)，饱和食盐水(20 ml)洗涤，有机层经无水硫酸钠干燥后减压浓缩，粗产物经柱层析 (dcm/meoh = 80/1-20/1)得到目标产物为白色泡沫状固体550 mg，46% 收率。
[0053]
化合物7e的合成：将化合物6e ( 0.65 mmol，550 mg，1.0 eq)溶于dcm中，随后加入tfa ( 32.5 mmol，2.4 ml, 50eq), 其中体积比 (dcm:tfa) = 3/1, 于室温搅拌反应2-3h。tlc监测反应完全后，减压除去二氯甲烷，随后加入二氯甲烷再次旋干，重复操作3次，所得粗产物经柱层析纯化得到白色泡沫状固体 400 mg, 83% 收率。1h nmr (400 mhz, cdcl3): δ 8.03 (s, 1h), 7.44
–
7.34 (m, 2h), 7.22 (d, j = 8.4 hz, 1h), 6.33 (d, j = 16.0 hz, 1h), 6.17 (t, j = 5.6 hz, 1h), 5.62 (d, j = 3.4 hz, 1h), 5.52 (td, j = 10.7, 4.5 hz, 1h), 5.11 (dd, j = 10.2, 3.6 hz, 1h), 3.78 (s, 4h), 3.19 (d, j = 6.8 hz, 2h), 2.82 (s, 1h), 2.57
–
2.46 (m, 2h), 2.30 (s, 6h), 2.16 (s, 3h), 2.08 (s, 3h), 1.98 (s, 4h), 1.60 (s, 2h), 1.43 (s, 2h), 1.22 (s, 16h)；c
38h54
n2o
13 + h
+
, cal 747.3704 found, 747.3706; + na
+
,769.3524, found,769.3511。
[0054]
实施例3
[0055]
化合物8a的合成：将化合物5 (2.0 g, 3.55 mmol，1eq)，hobt (0.48 g, 3.55 mmol，1eq), edci (1.36 g, 7.10 mmol, 2eq)称于100 ml圆底烧瓶中，加入二氯甲烷 (50 ml) 溶解后，于室温搅拌15 min。随后加入叔丁氧羰基-亚氨基-聚乙二醇-氨基 (boc-nh-peg-nh2) (1.5 ml, 7.1 mmol，2eq)，于室温搅拌反应2-3h。tlc监测反应完全后，加入二氯甲烷 (50 ml)稀释，随后依次用清水 (20 ml
×
2)，饱和食盐水 (20 ml)洗涤，无水硫酸钠干燥后旋干，粗产物经柱层析 (dcm/meoh = 80/1-20/1)得到目标产物为白色泡沫状固体1.58 g, 59% 收率。
[0056]
化合物9a的合成：将化合物8a ( 1.58g, 2.1 mmol, 1eq)溶于dcm (22 ml)中，随后加入tfa ( 7.4 ml, 0.105mol, 50.0 eq), 其中体积比 (dcm:tfa) = 3/1, 于室温搅拌反应2-3 h。tlc监测反应完全后，减压除去二氯甲烷，重复操作3次，所得粗产物经柱层析纯化得到目标产物为白色泡沫状固体1.12 g, 82% 收率。1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ: 8.16 (s, 3h), 7.61 (d, j = 15.8 hz, 1h), 7.49
–
7.37 (m, 2h), 7.22 (d, j = 8.4 hz, 1h), 6.34 (d, j = 16.0 hz, 1h), 5.60 (d, j = 3.4 hz, 1h), 5.53 (td, j = 10.6, 4.6 hz, 1h), 5.16 (dd, j = 10.2, 3.6 hz, 1h), 3.71 (d, j = 4.6 hz, 2h), 3.54 (d, j = 4.6 hz, 2h), 3.48
–
3.35 (m, 2h), 3.21 (s, 2h), 2.81 (d, j = 15.8 hz, 1h), 2.61 (dd, j = 20.8, 7.8 hz, 2h), 2.30 (d, j = 2.2 hz, 6h), 2.21 (s, 3h), 2.08 (s, 3h), 1.99 (d, j = 5.8 hz, 4h)；c
30h38
n2o
14 + h
+
, cal 651.2401 found, 651.2411.+ na
+
,673.2221, found, 673.2230。
[0057]
化合物8b的合成：将化合物5 (2.0 g, 3.55 mmol，1eq)，hobt (0.48 g, 3.55 mmol，1eq), edci (1.36 g, 7.10 mmol, 2eq)称于100 ml圆底烧瓶中，加入二氯甲烷 (50 ml) 溶解后，于室温搅拌15min。随后加入2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基氨基甲酸叔丁酯(boc-nh-peg2-nh2) (1.25 ml, 7.1 mmol，2eq)，于室温搅拌反应2-3h。tlc监测反应完全后，加入二氯甲烷 (50 ml)稀释，随后依次用清水 (20 ml
×
2)，饱和食盐水(20 ml)洗涤，无水硫酸钠干燥后旋干，粗产物经柱层析 (dcm/meoh = 80/1-20/1)得到目标产物为白色泡沫状固体1.6 g, 59% 收率。
[0058]
化合物9b的合成：将化合物8b ( 1.6g, 2.01 mmol, 1eq)溶于dcm (22 ml)中，随后加入tfa ( 7.4 ml, 0.10mol, 50.0 eq), 其中体积比 (dcm:tfa) =3/1, 于室温搅拌反应2-3h。tlc监测反应完全后，减压除去二氯甲烷，重复操作3次，所得粗产物经柱层析纯化得到目标产物为白色泡沫状固体1.12 g, 80% 收率。c
32h42
n2o
15 + h
+
, cal 695.2663 found, 695.2672.+ na
+
,717.2483, found,717.2491。
[0059]
化合物8c的合成：将化合物5 (1.0 g, 1.77 mmol，1eq)，hobt (0.25 g, 1.77 mmol，1eq), edci (0.7 g, 3.55 mmol, 2eq)称于50 ml圆底烧瓶中，加入二氯甲烷 (25 ml) 溶解后，于室温搅拌15min。随后加入13-氨基-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷酸1,1-二甲基乙酯(boc-nh-peg3-nh2) (1.0 g, 3.55 mmol，2eq)，于室温搅拌反应2-3 h。tlc监测反应完全后，加入二氯甲烷 (25 ml)稀释，随后依次用清水 (10 ml
×
2)，饱和食盐水 (10 ml)洗涤，无水硫酸钠干燥后旋干，粗产物经柱层析 (dcm/meoh = 80/1-20/1)得到目标产物为白色泡沫状固体0.8 g, 45% 收率。
[0060]
化合物9c的合成：将化合物8c ( 0.8g, 0.95 mmol, 1eq)溶于dcm (10.5 ml)中，
cdcl3)δ:12.75(s,1h),9.34(s,1h),7.60-7.57(m,3h),7.39-7.36(m,4h),7.20(d,j=6.8hz,1h),6.80(d,j=5.8hz,2h),6.31(t,j=11.6hz,4h),5.67(s,1h),5.57(s,1h),5.17(d,j=9.2hz,1h),4.39(s,2h),3.59-3.45(m,4h),2.86(d,j=13.8hz,1h),2.75-2.48(m,3h),2.30(s,6h),2.22(s,3h),2.10(s,3h),1.99(s,3h);
13
cnmr(101mhz,cdcl3)δ:182.0,171.3,170.4,170.3,167.0,169.4,168.2,168.0,165.9,163.7,163.0,161.7,159.7,157.6,144.1,143.8,142.5,132.8,127.9,126.6,124.2,124.0,122.9,118.2,114.9,104.7,99.4,94.5,81.1,71.8,68.2,67.3,66.9,40.7,38.8,38.2,30.7,21.8,21.1,20.7,20.6,20.58;hrms:c
45h44
n2o
19
+h
+
,cal917.2617;found,917.2607;c
45h44
n2o
19
+na
+
,cal939.2436found,939.2413。
[0064]
实施例5化合物10b的合成：称取化合物4b(71.2mg,0.2mmol,1.0eq)和hobt(27mg,0.2mmol,1.0eq),edci(76.4mg,0.4mmol,1.0eq)于25ml圆底烧瓶中,加入dmf(5ml)溶解后,于室温搅拌反应10min，随后加入化合物7a(163mg,0.24mmol,1.2eq)，于室温反应2-3h。tlc监测反应完全后加入清水5ml，然后用乙酸乙酯(15ml
×
5)萃取，合并有机层依次用清水(15ml
×
2)、饱和食盐水(10ml)洗涤，有机层经无水硫酸钠干燥后减压浓缩过柱(dcm/meoh=100/1-20/1)。得到浅黄色泡沫状固体88.3mg，收率48.0%。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:7.65
–
7.51(m,3h),7.37
–
7.35(m,3h),7.25
–
7.13(m,1h),6.77(s,2h),6.49
–
6.21(m,3h),5.64
–
5.55(m,3h),5.13(s,1h),3.96(s,2h),3.76(s,2h),3.43
–
3.31(m,3h),2.80(s,1h),2.62
–
2.42(m,3h),2.30(s,6h),2.23(s,3h),2.10(s,3h),1.99(s,5h),1.87(s,3h);
13
cnmr(101mhz,cdcl3):δ182.2,174.6,172.4,172.3,171.4,170.3,170.2,169.9,168.2,168.0,165.7,163.8,161.9,157.7,144.0,143.8,142.5,132.8,127.8,126.6,124.0,122.9,118.3,114.7,107.9,106.6,106.4,106.0,104.7,103.4,99.5,94.4,81.0,77.4,71.8,68.1,68.0,67.7,29.2,25.6,23.9,22.9,21.8,21.0,20.7,20.6,20.6;hrms:c
47h48
n2o
19
+h
+
,cal945.2924,found945.2912;c
47h48
n2o
19
+na
+
cal967.2743found967.2750。
[0065]
实施例6
1027.2954。
[0073]
实施例14化合物12c的合成：称取化合物4a ( 49.1 mg, 0.15 mmol, 1.0 eq)和hobt ( 20.0 mg, 0.15 mmol, 1.0 eq), edci ( 57.3 mg, 0.3 mmol, 2.0 eq)于25ml圆底烧瓶中, 加入dmf (5ml)溶解后, 于室温搅拌反应10 min，随后加入化合物9c ( 124.8 mg, 0.18 mmol, 1.2 eq)，于室温反应2-3h。tlc监测反应完全后加入清水5 ml，然后用乙酸乙酯 (15 ml
×
5)萃取，合并有机层依次用清水 (15 ml
×
2)、饱和食盐水 (10 ml)洗涤，有机层经无水硫酸钠干燥后减压浓缩过柱 (dcm/meoh =100/1-20/1)。得到浅黄色泡沫状固体67 mg，收率43.7 %。1hnmr (400 mhz, cdcl3): δ 12.72 (s, 1h), 9.14 (s, 1h), 7.73 (d, j = 7.6 hz, 2h), 7.58 (d, j = 16.0 hz, 1h), 7.39-7.35 (m, 2h), 7.25-7.11 (m, 2h), 6.92 (d, j = 7.4 hz, 2h), 6.78 (s, 1h), 6.52-6.23 (m, 4h), 5.73-5.47 (m, 2h), 5.12 (d, j = 7.4 hz, 1h), 4.53 (s, 2h), 3.73
ꢀ‑
3.43 (m, 15h), 3.37 (s, 1h), 2.86 (d, j = 15.8 hz, 1h), 2.57 (dd, j = 41.0, 14.2 hz, 3h), 2.31 (s, 6h), 2.18 (s, 3h), 2.08 (s, 3h), 1.99 (s, 3h); 13
c nmr (100 mhz, cdcl3): δ 182.2, 170.6, 170.2, 169.8, 169.6, 168.2, 168.0, 167.9, 165.8, 163.6, 163.1, 162.1, 159.8, 157.7, 144.0, 143.8, 142.5, 132.8, 128.0, 126.6, 124.7, 124.0, 122.9, 118.3, 115.1, 104.9, 104.3, 99.6, 94.3, 81.0, 71.8, 70.4, 70.2, 70.1, 69.6, 68.1, 67.2, 67.1, 39.6, 39.0, 38.2, 30.8, 21.6, 21.0, 20.7, 20.64, 20.6; hrms: c
51h56
n2o
22 + na
+
, cal 1071.3217 found, 1071.3214。
[0074]
实施例15化合物12d的合成：称取化合物4a ( 49.1 mg, 0.15 mmol, 1.0 eq)和hobt ( 20.0 mg, 0.15 mmol, 1.0 eq), edci ( 57.3 mg, 0.3 mmol, 2.0 eq)于25ml圆底烧瓶中, 加入dmf (5ml)溶解后, 于室温搅拌反应10 min，随后加入化合物9d ( 132.0 mg, 0.18 mmol, 1.2 eq)，于室温反应2-3h。tlc监测反应完全后加入清水5 ml，然后用乙酸乙酯 (15 ml
×
5)萃取，合并有机层依次用清水 (15 ml
×
2)、饱和食盐水 (10 ml)洗涤，有机层经无水硫酸钠干燥后减压浓缩过柱 (dcm/meoh =100/1-20/1)。得到浅黄色泡沫状固体
48mg，收率30.0%。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ12.72(s,1h),9.12(s,1h),7.76(d,j=5.0hz,2h),7.58(d,j=15.8hz,1h),7.36(s,2h),7.23(s,2h),6.95(d,j=4.8hz,2h),6.85(s,1h),6.55
–
6.23(m,4h),5.64-5.57(m,2h),5.11(d,j=9.8hz,1h),4.54(s,2h),3.72
–
3.45(m,19h),3.36(s,1h),2.86(d,j=15.2hz,1h),2.68-2.48(m,3h),2.31(s,6h),2.19(s,3h),2.09(s,3h),1.99(s,3h);
13
cnmr(100mhz,cdcl3):δ182.2,170.6,170.2,169.8,169.6,168.2,168.0,167.8,165.7,163.6,163.2,162.1,159.9,157.7,144.0,143.8,142.5,132.8,128.1,126.6,124.8,124.0,123.3,122.9,118.3,115.2,105.0,104.4,99.6,94.3,81.0,71.8,70.4,70.2,70.15,69.7,68.1,67.3,67.1,39.6,39.0,38.3,30.8,21.6,21.0,20.7,20.64,20.60;hrms:c
53h60
n2o
23
+na
+
,cal1115.3479;found,1115.3481。
[0075]
绿原酸-黄芹素偶合物对xod抑制活性的测定：向含有xod(活性为20nm,5mu/ml)的67mm磷酸盐缓冲液(ph=7.4)的反应液中，分别加入不同浓度(6.25、12.5、25.0、50、100μmol/l)的绿原酸-黄芹素(chlorogenicacid-apigenin,ca)系列化合物和阳性对照别嘌呤醇，另设不加入ca组作为对照。在37℃下将混合物预温育15min，向混合物中加入50mm的黄嘌呤，而后立即在295nm测定吸光度，每分钟测定1次，共持续30min，根据下列算式计算抑制率百分比(%)，由此计算50%抑制率所需的药物浓度作为ic
50
值。用dmso溶解受试化合物和别嘌呤醇，故将dmso作为阴性对照。
[0076]
抑制率%=[(对照组反应速率-实验组反应速率)/(对照组反应速率)]*100测试结果如图1和图2所示：发现化合物10c、10d对xod表现出良好的抑制活性，其中较优化合物10c:ic
50
=30.742μm，10d:ic
50
=22.425μm，其抑制活性略优于别嘌呤醇：ic
50
=40.547μm。
[0077]
绿原酸-黄芹素偶合物抗炎活性的测定：将raw264.7细胞接种于96孔板中，100μl/孔，浓度为5
×
104/孔，于37℃恒温恒湿培养过夜；加入待测试化合物（浓度40μg/ml，50μl/孔)处理2h，加入lps（浓度4μg/ml，50μl/孔）处理24h(实验分为：对照组、1%dmso阴性对照组和实验组（10a-10d、12a-12d）。其中，对照组为正常培养细胞，既不加化合物也不加lps刺激；dmso阴性对照组-即模型组，不加化合物，随后加入lps刺激；实验组，加入化合物培养后再加入lps刺激)；收集100μl上清液于另外1个新的96孔板中，每孔加入100μl配制好的尿亚硝酸盐定性试验(griess)a/b（v/v=1:1）试剂，室温震荡10min，于540nm处检测吸光值，根据标准曲线回归方程分析no产生水平；剩余孔中加入mtt（浓度5mg/ml，10μl/孔），37℃避光孵育4h；弃去上清液，加入dmso，200μl/孔，室温震荡10min，于492nm处检测吸光值（a）。
[0078]
细胞存活率计算公式为：存活率（%）=（a实验组-a空白组）/（a对照组-a空白组）*100;为了评价所合成黄芹素-绿原酸偶合物的抗炎活性，测试了化合物对raw264.7细胞的no生成、细胞存活率和细胞形态的影响。
[0079]
*表示与对照组比较有显著差异，#表示与模型组比较有显著差异，个数代表差异显著程度;**p《0.01,***p《0.001,****p《0.0001，与对照组比较,#p《0.05,##p《0.01,###p《0.001,####p《0.0001与模型组比较。
[0080]
化合物对no生成的影响：浓度为10μg/ml的化合物10a、10b、10c、10d对脂多糖诱
导的raw264.7细胞中no生成具有良好抑制活性，其中化合物10b表现出最强抑制作用。其他化合物对脂多糖诱导的raw264.7细胞no生成影响较小 (图 3)。
[0081]
化合物对细胞存活率的影响：浓度为10μg/ml的化合物10b、10c、10d和12b对脂多糖诱导的raw264.7细胞存活率（与对照组比较来计算百分比）降低的影响较小；而化合物10a, 12a可以保护细胞免于脂多糖诱导的细胞存活率降低；而化合物12b、12c对脂多糖诱导的raw264.7细胞存活率降低具有促进作用 (图4)。
[0082]
化合物对细胞形态的影响：浓度为10 μg/ml的化合物10a、10b、10c、10d和12b对脂多糖诱导的raw264.7细胞形态改变影响较小；化合物12c对脂多糖诱导的raw264.7细胞形态改变具有增强作用 (图5)。图5中c表示对照组，l表示lps-脂多糖组。
[0083]
由上可知，本发明的绿原酸-黄芹素偶合物可用于制备预防或治疗痛风性疾病药物，所述痛风性疾病包括急性痛风性关节炎、慢性痛风性关节炎、间歇性痛风性关节炎、药源性肝损伤、急性肾损伤或神经疼痛等疾病。
[0084]
本发明的绿原酸-黄芹素偶合物可用于制备预防或治疗炎症感染性疾病药物,所述炎症感染性疾病包括: 痛风性关节炎、炎性肠病、脑(脊)膜炎、胰腺炎、腹膜炎、血管炎(病)、肾小球肾炎、肝炎、角膜炎、白内障、老年性黄斑退行性改变和视神经炎疾病。
[0085]
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该本发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。

技术特征：
1.一种绿原酸-黄芹素偶合物，其特征在于，具有通式i或通式ⅱ所示结构:，，其中：r1和r2分别为h、烷基、芳基、杂环芳基、c(o)-烷基、c(o)-芳基、c(o)-杂环芳基、c(o)-胺基中的任意一种；r3和r4分别为h、烷基、芳基、杂环芳基、c(o)-烷基、c(o)-芳基、c(o)-杂环芳基、c(o)-胺基中的任意一种；通式i中：m = 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14，n = 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12；通式ⅱ中，m = 1、2、3、4、5或6；n = 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。2.一种权利要求1所述的绿原酸-黄芹素偶合物制备方法，其特征在于，过程如下：称取1eq化合物4a、化合物4b、化合物4c或化合物4d和1eq hobt, 2eq edci于反应容器中, 加入dmf溶解后, 于室温搅拌反应10 min，随后加入1.2 eq化合物7a，于室温反应完全后加入清水，然后用乙酸乙酯萃取，合并有机层依次用清水、饱和食盐水洗涤，有机层经无水硫酸钠干燥后减压浓缩过柱，得到浅黄色泡沫状固体，为化合物10a、化合物10b、化合物10c或化合物10d，即为绿原酸-黄芹素偶合物。3.根据权利要求2所述的绿原酸-黄芹素偶合物制备方法，其特征在于，化合物7a的合成步骤如下:化合物5的合成：称取1eq绿原酸和0.2 eq dmap于反应容器中，随后加入醋酸酐 20 ml和吡啶 10 ml, 反应完全后，将反应液倒入冰水混合物中，并于室温搅拌，随后用3n稀盐酸调ph至2-3，随后有白色固体析出，滤出固体并用适量清水洗涤，干燥后得到目标产物白色固体，为化合物5；化合物6a的合成：将1eq化合物5，1eq hobt, 2eq edci称于反应容器中，加入二氯甲烷 50 ml溶解后，于室温搅拌，后加入2eq n-叔丁氧羰基-乙二胺，于室温搅拌反应，反应完全后，加入二氯甲烷 50 ml稀释，随后依次用清水，饱和食盐水洗涤，有机层经无水硫酸钠干燥后减压浓缩，粗产物经柱层析得到目标产物化合物6a；化合物7a的合成：将1eq化合物6a溶于dcm中，随后加入50eq tfa, 体积比dcm: tfa= 3/1, 于室温搅拌反应，反应完全后，减压除去二氯甲烷，随后加入二氯甲烷再次旋干，所得粗产物经柱层析纯化得到白色泡沫状固体，得到化合物7a。4.一种权利要求1所述的绿原酸-黄芹素偶合物制备方法，其特征在于，其过程如下：
称取1eq化合物4a和1eq hobt, 2eq edci于反应容器中, 加入dmf溶解后, 于室温搅拌反应，随后加入1.2 eq化合物7b、化合物7c 、化合物7d、化合物7e中的任意一种，室温反应完全后加入清水，然后用乙酸乙酯萃取，合并有机层依次用清水、饱和食盐水洗涤，有机层经无水硫酸钠干燥后减压浓缩过柱，得到浅黄色泡沫状固体，为化合物11a、化合物11b、化合物11c或化合物11d，即为绿原酸-黄芹素偶合物。5.根据权利要求4所述的绿原酸-黄芹素偶合物制备方法，其特征在于，化合物7b、化合物7c、化合物7d或化合物7e的合成步骤如下：化合物5的合成：称取1eq绿原酸和0.2 eq dmap于反应容器中，随后加入醋酸酐 20 ml和吡啶 10 ml, 反应完全后，将反应液倒入冰水混合物中，并于室温搅拌，随后用3n稀盐酸调ph至2-3，随后有白色固体析出，滤出固体并用适量清水洗涤，干燥后得到目标产物白色固体，为化合物5；化合物6b、化合物6c、化合物6d或化合物6e的合成：将1eq化合物5，1eq hobt, 2eq edci称于反应容器中，加入二氯甲烷 50 ml 溶解后，于室温搅拌，随后加入2eq n-叔丁氧羰基-1,5-二氨基戊烷、n-叔丁氧羰基-1,6-二氨基己烷、n-叔丁氧羰基-1,7-二氨基庚烷、n-叔丁氧羰基-1,12-二氨基十二烷，反应完全后，加入二氯甲烷稀释，随后依次用清水，饱和食盐水洗涤，有机层经无水硫酸钠干燥后减压浓缩，粗产物经柱层析得到目标产物为化合物6b、化合物6c、化合物6d或化合物6e；化合物7b、化合物7c、化合物7d或化合物7e的合成：将1eq化合物6b、化合物6c、化合物6d或化合物6e溶于dcm中，随后加入50eq tfa, 体积比dcm: tfa= 3/1, 于室温搅拌反应，反应完全后，减压除去二氯甲烷，随后加入二氯甲烷再次旋干，所得粗产物经柱层析纯化得到白色泡沫状固体，得到化合物7b、化合物7c、化合物7d或化合物7e。6.一种权利要求1所述的绿原酸-黄芹素偶合物制备方法，其特征在于，过程如下：称取1eq化合物4a和1eq hobt, 2eq edci于反应容器中, 加入dmf溶解后, 于室温搅拌反应，随后加入1.2 eq化合物9a、化合物9b、化合物9c、化合物9d中的任意一种，于室温反应完全后加入清水，然后用乙酸乙酯萃取，合并有机层依次用清水、饱和食盐水洗涤，有机层经无水硫酸钠干燥后减压浓缩过柱，得到浅黄色泡沫状固体，为化合物12a、化合物12b、化合物12c或化合物12d，即为绿原酸-黄芹素偶合物。7.根据权利要求6所述的绿原酸-黄芹素偶合物制备方法，其特征在于，化合物9a、化合物9b、化合物9c或化合物9d的合成步骤如下：
化合物8a、化合物8b、化合物8c或化合物8d的合成：将1eq化合物5，1eq hobt, 2eq edci称于反应容器中，加入二氯甲烷溶解后，于室温搅拌，随后加入2eq 叔丁氧羰基-亚氨基-聚乙二醇-氨基、2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基氨基甲酸叔丁酯、3-氨基-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷酸 1,1-二甲基乙酯和o-(2-氨基乙基)-o'-[2-(叔丁氧羰基-氨基)乙基]四乙二醇中的任意一种，于室温搅拌反应，反应完全后，加入二氯甲烷稀释，随后洗涤、干燥，粗产物经柱层析得到化合物8a、化合物8b、化合物8c或化合物8d；化合物9a、化合物9b、化合物9c或化合物9d的合成：将1eq化合物8a、化合物8b、化合物8c或化合物8d溶于dcm中，随后加入50.0 eq tfa, 其中，体积比dcm:tfa = 3/1, 于室温搅拌反应，反应完全后，减压除去二氯甲烷，所得粗产物经柱层析纯化得到化合物9a、化合物9b、化合物9c或化合物9d。8.权利要求1所述的绿原酸-黄芹素偶合物在制备预防或治疗痛风性疾病药物中的应用。9.权利要求1所述的绿原酸-黄芹素偶合物在制备预防或治疗炎症感染性疾病药物中的应用。

技术总结
本发明提供了一种绿原酸-黄芹素偶合物及其制备方法和应用。该绿原酸-黄芹素偶合物具有通式I或通式Ⅱ所示结构，对绿原酸结构中的活性羧酸部位进行化学修饰，偶联上活性分子黄芹素，通过抗炎/降尿酸双重作用增强药效；为了找到活性强、稳定性更好的绿原酸衍生物，将其结构中的酚羟基和醇羟基等部位进行保护，增强药物在体内的代谢稳定性。本发明的绿原酸-黄芹素偶合物的合成方法简单高效，且相对于原有药物而言，具有增加脂溶性及稳定性、改变吸收性能、提高药效和降低毒性等特点。提高药效和降低毒性等特点。提高药效和降低毒性等特点。


技术研发人员：徐长江 李玲 游胜勇 谢传奇 徐建国
受保护的技术使用者：江西省科学院应用化学研究所
技术研发日：2023.07.07
技术公布日：2023/8/13