腺苷钴胺的新应用

1.本发明属于生物药物技术领域，具体涉及腺苷钴胺的新应用。


背景技术：

2.慢性胰腺炎(chronic pancreatitis,cp)是一种进行性纤维炎性疾病伴有胰腺结构永久性损伤。cp主要病理表现为胰腺腺泡萎缩、组织纤维化或钙化、局灶性水肿、炎症和坏死，主要临床表现包括持续性或复发性腹痛、消瘦和糖尿病。目前临床治疗cp的主要方法包括筛查和治疗并发症，缺乏延迟或逆转cp进展的特效疗法。
3.cp的病理特点为腺泡细胞损伤导致以巨噬细胞为主的多种炎症细胞浸润，其分泌大量促炎细胞因子，在胰腺组织微环境中引起胰腺星状细胞(pancreatic stellate cells,pscs)活化，进而产生大量的细胞外基质(extra cellular matrix,ecm)，最终发展成胰腺纤维化。因此，胰腺纤维化是cp进程中的主要病变，寻找抑制胰腺纤维化的靶向药物能有效阻断cp的发生发展。研究表明，巨噬细胞极化在胰腺纤维化中发挥重要作用，抑制巨噬细胞m2型极化能够改善胰腺炎症，缓解胰腺纤维化。
4.腺苷钴胺是维生素b12同系物，维持细胞生长与增殖以及完整的神经髓鞘结构，主要用于治疗巨幼红细胞性、营养不良性和妊娠期等多种贫血，以及多发性神经炎、神经根炎等炎症疾病。
5.迄今暂无腺苷钴胺应用于cp防治的相关研究报道。因此，积极探讨腺苷钴胺在巨噬细胞m2型极化以及cp所致胰腺纤维化中的作用具有十分重要的学术价值和临床意义。


技术实现要素：

6.本发明的目的是提供腺苷钴胺的新应用，研究腺苷钴胺在巨噬细胞m2型极化以及cp所致胰腺纤维化中的作用，为cp防治提供可能的临床用药方案。
7.为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：
8.本发明提供了腺苷钴胺在制备治疗或预防慢性胰腺炎药物中的应用。
9.腺苷钴胺的结构式如下：
[0010][0011]
上述技术方案中，进一步地，所述应用为抑制巨噬细胞m2型极化。
[0012]
上述技术方案中，进一步地，所述应用为减少慢性胰腺炎引起的胰腺纤维化。
[0013]
上述技术方案中，进一步地，所述应用为减少慢性胰腺炎引起的胰腺组织变化。
[0014]
本发明还提供了一种预防或治疗慢性胰腺炎的药物组合物，所述药物组合物以腺苷钴胺为活性成分。
[0015]
上述技术方案中，进一步地，所述药物为口服制剂或注射制剂。
[0016]
与现有技术相比，本发明的有益效果：本发明提供了腺苷钴胺在治疗或预防慢性胰腺炎药物中的应用，通过实验验证了腺苷钴胺可抑制巨噬细胞m2型极化，减少cp引起胰腺组织萎缩、结节明显等损伤以及胰腺纤维化等病理变化。本发明为慢性胰腺炎的药物筛选提供了依据。
附图说明
[0017]
图1生化试剂盒检测腺苷钴胺对小鼠血清中cre、bun、alt和ast含量水平的影响。数据以平均值
±
sem表示。cob，腺苷钴胺；cre，肌酐；bun，尿素氮；alt，丙氨酸氨基转移酶；ast，天冬氨酸转氨酶。
[0018]
图2he染色观察腺苷钴胺对小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑、小肠和胰腺组织病理变化的影响(400
×
)。cob，腺苷钴胺。
[0019]
图3流式细胞术检测结果图；(a)流式细胞术检测腺苷钴胺对小鼠脾脏组织中m2型巨噬细胞含量的影响；(b)小鼠脾脏流式细胞术结果统计图。数据以平均值
±
sem表示；与cp组相比，
##
p《0.01。cob，腺苷钴胺。
[0020]
图4f4-80-cd206双重免疫荧光染色结果图；(a)f4-80
+-cd206
+
双重免疫荧光染色
观察腺苷钴胺对小鼠胰腺组织m2型巨噬细胞的影响；(b)小鼠胰腺f4-80
+-cd206
+
双重免疫荧光染色结果统计图。数据以平均值
±
sem表示；与ctrl组相比，
**
p《0.01；与cp组相比，
##
p《0.01。cob，腺苷钴胺。
[0021]
图5he染色结果图；(a)he染色观察腺苷钴胺对cp小鼠胰腺组织病理损伤的影响；(b)小鼠胰腺he染色结果统计图。数据以平均值
±
sem表示；与ctrl组相比，
**
p《0.01；与cp组相比，
##
p《0.01。cob，腺苷钴胺。
[0022]
图6masson染色结果图；(a)masson染色观察腺苷钴胺对cp小鼠胰腺纤维化的影响；(b)小鼠胰腺masson染色结果统计图。数据以平均值
±
sem表示；与ctrl组相比，
**
p《0.01；与cp组相比，
#
p《0.05。cob，腺苷钴胺。
具体实施方式
[0023]
以下结合具体实施例对本发明作进一步说明，但不以任何方式限制本发明。
[0024]
实施例1
[0025]
1、实验方案：
[0026]
1)体内毒性实验：16只c57bl/6小鼠适应环境一周后随机分为2组(对照组(ctrl)和腺苷钴胺组(cob)，n＝8)，以此评价腺苷钴胺的体内毒性。ctrl和cob组小鼠分别腹腔注射生理盐水和腺苷钴胺(0.2mg/kg/天)。4周后，c57bl/6小鼠采用异氟烷麻醉，腹主动脉采血收集血清冻存于-80℃冰箱，后续采用生化试剂盒分别检测小鼠血清中的alt、ast、bun、cre等指标；并取胰腺、心、肝、脾、肺、肾、脑、肠等组织固定于10％甲醛中进行he染色，以此检测腺苷钴胺的体内毒性。
[0027]
2)体内药效实验：24只c57bl/6小鼠适应环境一周后随机分为3组(对照组(ctrl)、慢性胰腺炎组(cp)、cp+腺苷钴胺组(cp+cob)，n＝8)，以此评价腺苷钴胺的体内药效。cp小鼠模型采用雨蛙素腹腔注射法构建，c57bl/6小鼠每周一、三、五腹腔注射雨蛙素(50μg/kg)，间隔1h/次，每天6次，持续8周；腺苷钴胺于cp造模开始4周后开始腹腔注射(0.2mg/kg/天，持续4周)；ctrl组小鼠以相同的给药频率腹腔注射等量生理盐水。8周后，c57bl/6小鼠采用异氟烷麻醉，腹主动脉采血处死；取脾脏组织进行胰酶消化后，流式细胞仪检测m2型巨噬细胞(f480
+-cd206
+
细胞)含量变化以评价腺苷钴胺对巨噬细胞m2型极化的影响；取胰腺组织固定于10％甲醛中以进行后续的m2型巨噬细胞含量检测以及he和masson染色，以此评价腺苷钴胺对cp诱导的胰腺损伤和纤维化病变的作用。
[0028]
2、实验结果：
[0029]
1)腺苷钴胺体内毒性评价
[0030]
如图1所示，腺苷钴胺(0.2mg/kg/天)给药4周后，小鼠血清中的cre、bun、alt和ast水平与ctrl组相比无明显变化。he染色结果也表明，腺苷钴胺给药组组小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑、小肠和胰腺形态正常，与ctrl组小鼠相比无明显的病理损伤(图2)。因此，腹腔注射腺苷钴胺(0.2mg/kg/天，4周)对c57bl/6小鼠无明显毒副作用。
[0031]
2)腺苷钴胺通过减少巨噬细胞m2型极化改善cp小鼠胰腺损伤以及纤维化病变
[0032]
流式细胞术检测脾脏组织中的m2型巨噬细胞含量，如图3a-b所示，与cp相比，腺苷钴胺给药组能够显著减少f4-80
+-cd206
+
双阳细胞数量，即m2型巨噬细胞。此外，f4-80
+-cd206
+
双重免疫荧光结果显示，与ctrl组相比，cp小鼠胰腺组织中的f4-80(红色荧光区)和
cd206(绿色荧光区)表达明显上调，即胰腺组织中浸润的m2型巨噬细胞量显著升高，而腺苷钴胺给药组能够显著减少巨噬细胞m2型极化(图4)。
[0033]
采用he染色评价腺苷钴胺在cp中的作用，如图5所示，与ctrl组相比，cp组小鼠胰腺组织萎缩、颜色变白、结节明显，而腺苷钴胺给药组小鼠胰腺组织损伤明显减轻。masson染色结果显示，cp诱导小鼠胰腺病损处蓝色胶原纤维化区域增多，但腺苷钴胺给药组小鼠胶原纤维化区域明显减少(图6)。因此，腺苷钴胺可以显著抑制巨噬细胞m2型极化，减少cp引起的胰腺损伤以及纤维化等病变。
[0034]
由上述结果可知，腺苷钴胺可抑制巨噬细胞m2型极化，从而减轻cp小鼠胰腺损伤以及纤维化等病变，是一种良好的临床防治cp候选药物。

技术特征：
1.腺苷钴胺在制备治疗或预防慢性胰腺炎药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为抑制巨噬细胞m2型极化。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为减少慢性胰腺炎引起的胰腺纤维化。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为减少慢性胰腺炎引起的胰腺组织变化。5.一种预防或治疗慢性胰腺炎的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物以腺苷钴胺为活性成分。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述药物为口服制剂或注射制剂。

技术总结
本发明属于生物药物技术领域，涉及腺苷钴胺的新应用，具体是腺苷钴胺在制备治疗或预防慢性胰腺炎药物中的应用，腺苷钴胺可抑制巨噬细胞M2型极化，减少慢性胰腺炎引起的胰腺纤维化，减少慢性胰腺炎引起的胰腺组织变化。本发明为慢性胰腺炎的药物筛选提供了依据。明为慢性胰腺炎的药物筛选提供了依据。


技术研发人员：董得时 陶旭锋 武国宇 项红 刘守信 房庆东 王祎男 吴昱 郭方悦
受保护的技术使用者：大连医科大学附属第一医院
技术研发日：2023.06.16
技术公布日：2023/8/13