木质素降解相关的基因及应用

1.本发明属于基因工程技术领域，涉及微生物降解木质素的机理，具体涉及木质素降解相关的基因及应用。


背景技术：

2.木质素是一类由苯丙烷类衍生物组成的高分子聚合物，存在于植物体内的木质部，是自然界中储量最丰富的芳香族化合物。木质素通过不同类型共价键、氢键与半纤维素、纤维素紧密包裹，组成网状结构的同时形成天然抗降解屏障，从而也成为纤维素水解的阻碍者。
3.秸秆废弃物中含有大量的木质素。我国是农业大国，农作物秸秆每年产量约8亿吨，但有将近60％以上的秸秆未被有效利用，田间焚烧和随意丢弃的现象依旧存在，造成了严重的环境污染和资源浪费。木质素也存在于生物炼油厂与制浆和造纸工业的废水中。据报道，每年仅制浆工业就生产5000万吨木质素，造纸工业中也只有大约2％的木质素用于商业用途，其余的直接排放或者焚烧。不仅使木质素资源没有得到充分利用，也给自然环境带来严重的污染。因此，如何通过生物技术将污水及废弃秸秆中的木质素加速降解，并转化为能源、化工成品等，不仅有助于治理木质素污染，也能在生物质能源的综合利用中发挥价值。
4.研究发现自然界中存在很多能够降解木质素的微生物，在过去的几十年的研究主要集中在真菌对木质素的降解研究，其中以白腐真菌最为典型。细菌相对于真菌，有生长快、易于大规模应用的特点，也能更适应强酸、强碱、高温等极端环境，所以被越来越多的研究者们所关注。
5.木质素结构复杂，自然条件下降解效率低，微生物不仅降解效率高，成本低廉，也可以充分利用自然资源，保护生态环境，从而有利于可持续发展。但是，目前关于木质素降解各方面的研究仍存在细菌降解木质素效率过低、代谢途径及关键酶的调控机制未完全明确等问题。生物酶降解法因其绿色而高效的过程受到关注和重视，但99％的微生物不可实验室培养，因此传统培养单菌再分离纯化目标酶的方法挖掘的酶的种类十分有限。通过对木质素降解细菌的功能基因的筛选和验证，有利于制备/筛选高效降解木质素菌剂和筛选出新的木质素降解酶。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于探究木质素降解细菌对木质素代谢途径及关键酶的调控机制，为制备/筛选高效降解木质素菌剂和筛选出新的木质素降解酶提供一种高效的技术手段。
7.基于上述目的，本发明提供了木质素降解相关的基因及应用来满足本领域内的这种需要。本发明以菌株erwinia sp.ql-z3为研究对象，所述erwinia sp.ql-z3菌株16srrna基因genbank登录号为mh828331，全基因组测序genbank登录号为cp037950。
8.一方面，本发明提供了菌株erwinia sp.ql-z3中与木质素降解相关的基因，所述
基因包括，
9.edyp_48，所述edyp_48的核酸序列如seq id no.1所示；
10.elac_205，所述elac_205的核酸序列如seq id no.2所示；
11.egss_410，所述edyp_410的核酸序列如seq id no.3所示；
12.edio_858，所述edio_858的核酸序列如seq id no.4所示；
13.eoxi_996，所述eoxi_996的核酸序列如seq id no.5所示；
14.egre_1016，所述egre_1016的核酸序列如seq id no.6所示；
15.esod_1236，所述esod_1236的核酸序列如seq id no.7所示；
16.eoxi_1594，所述eoxi_1594的核酸序列如seq id no.8所示；
17.egly_3182，所述egly_3182的核酸序列如seq id no.9所示；
18.emon_3330，所述emon_3330的核酸序列如seq id no.10所示；
19.ecat_3467，所述ecat_3467的核酸序列如seq id no.11所示；
20.emcat_3587，所述emcat_3587的核酸序列如seq id no.12所示；
21.ecat_4287，所述ecat_4287的核酸序列如seq id no.13所示。
22.进一步的，本发明提供的基因中，所述基因esod_1236、egly_3182、edyp_48、elac_205、edio_858、eoxi_996、egre_1016、eoxi_1594、emon_3330、emcat_3587、ecat_4287受木质素为碳源的诱导调控。
23.进一步的，本发明提供的基因中，以木质素为碳源培养erwinia sp.ql-z3菌株6h时，所述基因esod_1236、egly_3182显著性表达。
24.进一步的，本发明提供的ql-z3中与木质素降解相关的基因中，以木质素为碳源培养erwinia sp.ql-z3菌株6h时，或以不含碳源培养erwinia sp.ql-z3菌株6h时，所述基因elac_205、emcat_3587、ecat_4287均显著性表达。
25.进一步的，本发明提供的基因中，碳源饥饿诱导所述基因elac_205、emcat_3587、ecat_4287表达。
26.进一步的，本发明提供的基因中，敲除所述菌株erwinia sp.ql-z3中基因edyp_48、elac_205、edio_858、eoxi_996、esod_1236、emon_3330、emcat_3587中的一种或多种，降低所述菌株erwinia sp.ql-z3对木质素的降解率。
27.进一步的，本发明提供的基因中，所述木质素降解酶包括漆酶、dyp型过氧化物酶、过氧化氢酶、锰过氧化氢酶、双加氧酶、单加氧酶、超氧化物歧化酶中的一种或多种。
28.另一方面，本发明涉及上述基因edyp_48、elac_205、edio_858、eoxi_996、egre_1016、esod_1236、eoxi_1594、egly_3182、emon_3330、ecat_3467、emcat_3587、ecat_4287在调控erwiniasp.ql-z3菌株降解木质素中的应用。
29.与现有技术相比，本发明的有益效果为：
30.本发明分析发现，木质素环境能够诱导基因esod_1236与egly_3182在培养6h时表达量较高；基因edyp_48、egre_1016、edio_858、eoxi_996、egre_1016、eoxi_1594、emon_3330在培养72h时达到较高的表达水平；基因elac_205、emcat_3587、ecat_4287在培养6h时对木质素培养基和无碳源培养基都作出了显著性的表达响应，说明这些基因的诱导不仅受到以木质素为碳源的调控，也可能受到饥饿响应的相关调控。
31.本发明选择7种不同类型基因edyp_48、elac_205、edio_858、eoxi_996、esod_
1236、emon_3330、emcat_3587进行基因敲除和回补，表型验证发现敲除突变株的降解率下降47％-69％，酶活性均下降40％以上，证明这些基因在木质素降解中发挥着重要的功能。
32.本研究发现回补突变株均能补回部分差异，且显著性分析发现δedyp_48(edyp_48)、δelac_205(elac_205)、δemcat_3587(emcat_3587)回补菌株的降解率和野生型菌株的差异不显著，证明敲除基因的异位回补能在一定的程度上补足缺失基因的降解差异；其他回补突变株相较于敲除突变菌株的降解率尽管都有回升，但仍和野生型菌株的降解率有差异，这可能和菌株ql-z3降解木质素过程中复杂的调控通路以及异位回补的局限性有关。
33.本研究不仅有利于深入探明细菌ql-z3降解木质素的机理，亦为将来制备高效降解木质素菌剂，提供了宝贵的菌种种质资源，对减少木质素造成的环境污染具有重要意义。
附图说明
34.图1为木质素降解基因的差异转录水平。starvation表示无碳源培养基的培养试验结果；lignin表示木质素培养基的培养试验结果。
35.图2为基因敲除pcr验证。m1&m2&m3，2kb marker；1，阴性对照：edyp_48_ql-z3；2，敲除突变株
△
edyp_48；3，阳性对照：敲除工程菌
△
edyp_48_s17-1；4，阴性对照：elac_205_ql-z3；5，敲除突变株
△
elac_205；6，阳性对照：敲除工程菌
△
elac_205_s17-1；7，阴性对照：edio_858_ql-z3；8，敲除突变株
△
edio_858；9，阳性对照：敲除工程菌
△
edio_858_s17-1；10，阴性对照：eoxi_996_ql-z3；11，敲除突变株
△
eoxi_996；12，阳性对照：敲除工程菌
△
eoxi_996_s17-1；13，阴性对照：esod_1236_ql-z3；14，敲除突变株
△
esod_1236；15，阳性对照：敲除工程菌
△
esod_1236_s17-1；16，阴性对照：emon_3330_ql-z3；17，敲除突变株
△
emon_3330；18，阳性对照：敲除工程菌
△
emon_3330_s17-1；19，阴性对照：emcat_3587_ql-z3；20，敲除突变株
△
emcat_3587；21，阳性对照：敲除工程菌
△
emcat_3587_s17-1。
36.图3为菌株ql-z3降解基因回补pcr验证。m，2kb marker；1，δedyp_48(edyp_48)；2，
△
elac_205(elac_205)；3，
△
edio_858(edio_858)；4，
△
eoxi_996(eoxi_996)；5，
△
esod_1236(esod_1236)；6，
△
emon_3330(emon_3330)；7，
△
emcat_3587(emcat_3587)。
37.图4为突变株的木质素降解率测定。(a)edyp_48野生型、敲除突变型及回补型；(b)elac_205野生型、敲除突变型及回补型；(c)edio_858野生型、敲除突变型及回补型；(d)eoxi_996野生型、敲除突变型及回补型；(e)esod_1236野生型、敲除突变型及回补型；(f)emon_3330野生型、敲除突变型及回补型；(g)emcat_3587野生型、敲除突变型及回补型。图中a、b、c之间为显著性差异(*p≤0.05)。
38.图5为突变株的酶活测定。(a)edyp_48野生型、敲除突变型及回补型；(b)elac_205野生型、敲除突变型及回补型；(c)edio_858野生型、敲除突变型及回补型；(d)esod_1236野生型、敲除突变型及回补型；(e)emon_3330野生型、敲除突变型及回补型；(f)emcat_3587野生型、敲除突变型及回补型。图中a、b、c之间为显著性差异(*p≤0.05)。
具体实施方式
39.下面，结合实施例对本发明的技术方案进行说明，但是，本发明并不限于下述的实施例。
40.下述各实施例中实验方法和检测方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述药剂和
材料，如无特殊说明，均可在市场上购买得到；所述指标数据，如无特殊说明，均为常规测量方法。
41.(1)木质素降解相关基因挖掘
42.微生物降解木质素主要是靠胞外酶的分泌对木质素进行非特异性的降解，研究发现这些胞外酶主要包括木质素过氧化物酶、锰过氧化物酶以及漆酶。此外，还有一些其他类型的木质素降解酶，如染料脱色过氧化物酶、过氧化氢酶、锰过氧化氢酶、双加氧酶、单加氧酶等。根据菌株erwinia sp.ql-z3全基因组在nr数据库中注释结果，在ncbi中进行blastx比对，找出与报道木质素降解相关的基因组中相似的编码基因，再通过实时定量pcr技术进行初步验证。
43.(2)实时定量pcr验证
44.培养基中分别以碱性木质素和葡萄糖为唯一碳源，以饥饿型培养基(不加碳源)为对照，收集培养至6h、72h的菌株erwinia sp.ql-z3菌体，进行菌株总rna的提取，合成cdna后按照定量体系制备样品并送入定量仪中收集循环值，根据计算结果分析各基因的相对表达水平。
45.(3)敲除载体的构建
46.根据目的基因序列设计引物，引物两端添加酶切位点和保护碱基，且在f2、r1端添加部分重复序列。引物序列见表1。
47.提取菌株erwinia sp.ql-z3全基因组dna后，利用表1中的引物扩增上下游同源臂后进行回收。pcr反应的条件和体系见表2和表3。之后再以上下游同源臂互为模板，进行重叠pcr。扩增反应体系见表4，pcr循环体系同表3。重叠pcr产物经电泳检测后溶液回收纯化，提取质粒pdm4后将片段和质粒37℃水浴酶切6h，酶切体系如表5所示。酶切产物纯化回收，根据表6的连接反应体系将片段和质粒进行连接。连接产物即为构建完成的敲除载体。
48.表1：基因敲除上下同源臂引物
49.[0050][0051]
表2：pcr扩增反应体系
[0052]
成分体积(μl)dna polymerase0.5基因组dna15
×
sf buffer5dntp0.5f1/f2引物1r1/r2引物1ddh2o16
[0053]
表3：pcr循环体系
[0054]
预变性95℃5min变性95℃30s退火55℃-58℃30s延伸72℃1min彻底延伸72℃8min保温4℃变性-退火-延伸，设置32个循环
[0055]
表4：pcr扩增反应体系
[0056]
[0057][0058]
表5：酶切反应体系
[0059]
成分体积(μl)xhoi1xbai110xneb buffer2.5pdm4质粒/目的片段14ddh2o6.5
[0060]
表6：连接反应体系
[0061]
成分体积(μl)t4 dna ligase0.510x t4 dna ligase buffer1质粒2.5目的片段2ddh2o4
[0062]
(4)敲除突变株的构建
[0063]
37℃，将受体菌株s17-1工程菌(保藏号为atcc47055)摇至od
600
为0.3-0.4，制备成感受态后将(3)中获得的连接产物加入感受态细胞中，冰上静置0.5h。提前打开水浴锅预热，42℃热激90s后迅速插入冰上，冰浴3min后加入0.6ml lb液体培养基后复苏1h，再离心涂布于含有氯霉素抗性的固体lb平板上，37℃倒置培养12-18h。培养结束后挑取单菌落进行菌落pcr验证。本技术涉及的培养基及试剂配方如表7所示。
[0064]
表7：试验所用培养基及试剂配方
[0065]
[0066][0067]
(5)敲除突变株的筛选
[0068]
将验证成功的敲除工程菌ql-z3-s17-1与野生型菌株ql-z3分别在液体lb试管中活化，培养至od
600
值约为0.8左右时，按照工程菌:受体菌＝9:1、8:2、7:3三种比例将工程菌与ql-z3菌液在1.5ml ep管中混合。混合后进行离心，留50μl滴落在无抗平板中，37℃过夜培养。再用接种环将菌斑刮落至无菌水中，分别稀释2、4、6、8倍后，涂布于氯霉素与氨苄双抗平板中，长出来的单菌落即为单交菌。
[0069]
将单交菌用液体lb活化培养后，涂布于蔗糖固体平皿。待单菌落长出后，挑取单克
隆转接到氯霉素单抗lb固体平板和氨苄霉素单抗平板上，若菌落具有氨苄霉素抗性但没有氯霉素抗性，则进行下一步的菌落pcr验证，验证体系如表8所示。
[0070]
表8：菌落pcr反应体系
[0071]
成分体积(μl)taq polymerase12.5菌落悬浮液1引物f/r1ddh2o9.5
[0072]
pcr产物电泳验证时以野生型ql-z3菌落和s17-1工程菌作为对照，如果野生型的条带高于敲除突变菌，且相差片段大小为敲除基因大小则表明敲除成功，测序成功后-80℃保藏。
[0073]
(6)回补载体的构建
[0074]
设计已敲除基因的上下游引物f&r，如表9所示，并在5’端添加用于和载体质粒pkt100连接的酶切位点和保护碱基。拿到引物后根据表2与表3列出的pcr反应体系与条件扩增目的基因。电泳验证条带后溶液纯化回收。
[0075]
37℃过夜活化带有质粒pkt100的宿主菌dh5α(添加50mg/l的卡那抗性)，提取质粒后与纯化后的目的基因条带分别置于37℃水浴锅中双酶切6h，酶切体系见表10。将酶切产物分别纯化回收，根据表6的连接反应体系在pcr仪中22℃连接反应3小时。连接产物即为构建完成的回补载体。
[0076]
表9：上下同源臂引物
[0077][0078]
表10：酶切反应体系
[0079]
成分体积(μl)xhoi1xbai1
8.3)，5mmol/1nad
+
，50μl酶液，100mmol/1邻苯三酚(反应底物)。以空白tris-hcl缓冲溶液为空白对照，在325nm处测定紫外吸收值，并计算单位时间内吸收值的变化率。酶活定义为：每分钟抑制邻苯三酚自氧化率50％的酶量定为1个活力单位。
[0094]
漆酶的测定：在25℃，3ml反应体系中，反应混合液含有2ml0.5mmol/l的abts(溶于0.1mmol/l，ph 5.0的醋酸－醋酸钠缓冲溶液中)，加入1ml粗酶液启动反应，每隔1min测定420nm下的吸光值，取吸光值线性变化部分，一个酶活力单位用每分钟吸光值增加0.1的酶量表示。
[0095]
(11)蛋白编码基因中与木质素降解相关的nr注释结果
[0096]
通过序列比对，发现菌株ql-z3包含丰富的木质素降解相关的基因。表11为菌株ql-z3中预测出与木质素降解相关的基因。
[0097]
表11：ql-z3中预测参与木质素降解的基因
[0098][0099]
选择菌株ql-z3木质素降解相关基因预测的部分基因，以目的基因在葡萄糖培养基中的表达量为标准，比较其在无碳源培养基和木质素培养基中培养6h、72h的表达量。其结果见图1。其中edyp_48、egre_1016、edio_858、eoxi_996、eoxi_1594、emon_3330表达量趋势一致，即在培养6h时，这些基因在两种培养基中的转录水平没有显著性的差异，而在培养时间到达72h时，这些基因在木质素培养基中的转录有显著性的增加。这说明了在培养72h时，菌株能够以碱性木质素为唯一碳源，诱导edyp_48、egre_1016、edio_858、eoxi_996、eoxi_1594、emon_3330达到较高的转录水平；相似的，esod_1236与egly_3182在培养6h时就达到了最高水平，这说明该基因在培养刚开始时就参与了转录调控，并且可能在菌株降解
木质素的第一步中起着至关重要的作用。另一方面，elac_205、emcat_3587、ecat_4287在培养6h时对木质素培养基和无碳源培养基都作出了显著性的表达响应；在培养72h时，elac_205、ecat_4287在木质素培养基中的转录水平升高，emcat_3587的转录水平略微下降，在无碳源培养基中表达量出现小幅度增长或下调趋势，这说明这些基因的诱导不仅受到以木质素为碳源的调控，也受到饥饿响应的相关调控。选择部分基因通过基因敲除来进一步的验证其基因功能。
[0100]
(12)基因敲除突变菌株筛选
[0101]
将带有重叠片段的重组质粒转化至受体菌株e.coli s17-1中，对菌落pcr结果进行电泳检测，结果若显示重组质粒不含有目的基因片段，则敲除工程菌构建完成。挑选只有氨苄抗性的菌株进行菌落pcr验证，pcr结果如图2所示。
[0102]
野生型菌株ql-z3及其对应的突变菌株均能由验证引物扩增得到条带。野生型ql-z3菌株的pcr产物条带高于突变型，敲除突变株的pcr产物仅剩目的基因的上下游同源臂片段，与工程菌s17-1的菌落pcr结果保持一致，证明预测的降解基因敲除成功。
[0103]
(13)基因回补菌株筛选
[0104]
将带有敲除片段的质粒pkt100热激转化至受体菌株dh5α后，37℃倒置培养16h，利用回补质粒pkt100通用引物f/r对单菌落进行菌落pcr验证，电泳检测pcr产物，其条带大小应该是目的基因pcr产物和载体同源臂条带大小之和，再将pcr产物送去测序进行检测。
[0105]
将构建好的回补工程菌以电转化的形式转入敲除突变株中，利用回补质粒pkt100通用引物f/r对单菌落进行菌落pcr验证。回补验证结果如图3所示。回补突变菌株均能扩增得到条带，条带大小为目的基因条带与载体pkt100一段基因条带之和。条带大小一致且测序结果正确，证明基因的回补成功。
[0106]
(14)突变株降解率测定
[0107]
将获得的降解基因敲除突变株和回补突变株按照3.2.5.1中的方案在木质素液体培养基中摇瓶发酵，并以含空白载体pkt100的菌株ql-z3降解率作为对照。发酵72h后取样测量并计算突变株的降解率，得到的敲除突变株和回补突变株的降解率如图4所示。
[0108]
经过72h的发酵，野生型菌株的降解率达到25％左右，敲除突变菌株虽然对培养基中的木质素有一定的降解作用，但降解率均不及野生型菌株，其中测得敲除菌株δedyp_48、δelac_205、δedio_858、δeoxi_996、δesod_1236、δemon_3330、δemcat_3587的降解率分别为13.35％、8.27％、11.29％、8.02％、7.70％、9.45％、11.74％，分别下降了47％-69％，有较为明显的差异。
[0109]
经过72h的发酵，测得回补菌株δedyp_48(edyp_48)、δelac_205(elac_205)、δedio_858(edio_858)、δeoxi_996(eoxi_996)、δesod_1236(esod_1236)、δemon_3330(emon_3330)、δemcat_3587(emcat_3587)的降解率分别为23.43％、22.45％、15.87％、11.62％、10.04％、18.10％、22.4％，显著性分析发现回补菌株δedyp_48(edyp_48)、δelac_205(elac_205)、δemcat_3587(emcat_3587)有较为明显的差异。
[0110]
(15)突变株酶活测定
[0111]
取液体木质素培养基发酵液，离心后去除菌体并根据文献中提供的各类酶活测定方法测定酶活，以含空白载体pkt100的菌株ql-z3测得的酶活作为对照。将最后测得的酶活进行显著性分析，并绘制成柱状图(图5)。
[0112]
与突变株降解率测定结果相似，敲除突变株的酶活性显著下降，均下降40％以上，而回补突变株又能补足部分酶活性差异，说明敲除突变株和回补突变株构建成功，预测的7种木质素降解酶在木质素降解过程中发挥着重要的功能。
[0113]
如上所述，即可较好地实现本发明，上述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种改变和改进，均应落入本发明确定的保护范围内。

技术特征：
1.菌株erwinia sp.ql-z3中与木质素降解相关的基因，其特征在于，所述基因包括，edyp_48所述edyp_48的核酸序列如seq id no.1所示；elac_205，所述elac_205的核酸序列如seq id no.2所示；egss_410，所述edyp_410的核酸序列如seq id no.3所示；edio_858，所述edio_858的核酸序列如seq id no.4所示；eoxi_996，所述eoxi_996的核酸序列如seq id no.5所示；egre_1016，所述egre_1016的核酸序列如seq id no.6所示；esod_1236，所述esod_1236的核酸序列如seq id no.7所示；eoxi_1594，所述eoxi_1594的核酸序列如seq id no.8所示；egly_3182，所述egly_3182的核酸序列如seq id no.9所示；emon_3330，所述emon_3330的核酸序列如seq id no.10所示；ecat_3467，所述ecat_3467的核酸序列如seq id no.11所示；emcat_3587，所述emcat_3587的核酸序列如seq id no.12所示；ecat_4287，所述ecat_4287的核酸序列如seq id no.13所示。2.根据权利要求1所述的基因，其特征在于，所述基因edyp_48、elac_205、egss_410、edio_858、eoxi_996、egre_1016、esod_1236、eoxi_1594、egly_3182、emon_3330、ecat_3467、emcat_3587、ecat_4287受木质素为碳源的诱导调控。3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于，以木质素为碳源培养erwinia sp.ql-z3菌株6h时，所述基因esod_1236、egly_3182显著性表达。4.根据权利要求2所述的基因，其特征在于，以木质素为碳源培养erwinia sp.ql-z3菌株6h时，所述基因edyp_48、edio_858、eoxi_996、egre_1016、eoxi_1594、emon_3330显著性表达。5.根据权利要求2所述的基因，其特征在于，以木质素为碳源培养erwinia sp.ql-z3菌株6h时，或以不含碳源培养erwinia sp.ql-z3菌株6h时，所述基因elac_205、ecat_3467、emcat_3587、ecat_4287均显著性表达。6.根据权利要求1所述的基因，其特征在于，碳源饥饿诱导所述基因elac_205、emcat_3587、ecat_4287表达。7.根据权利要求1所述的基因，其特征在于，敲除所述菌株erwinia sp.ql-z3中基因edyp_48、elac_205、edio_858、eoxi_996、esod_1236、emon_3330、emcat_3587中的一种，降低所述菌株erwinia sp.ql-z3对木质素的降解率。8.根据权利要求1所述的基因，其特征在于，敲除所述菌株erwinia sp.ql-z3中基因edyp_48、elac_205、edio_858、eoxi_996、esod_1236、emon_3330、emcat_3587中的一种，降低所述菌株erwinia sp.ql-z3的木质素降解酶酶活性。9.根据权利要求8所述的基因，其特征在于，所述木质素降解酶包括漆酶、dyp型过氧化物酶、过氧化氢酶、锰过氧化氢酶、双加氧酶、单加氧酶、超氧化物歧化酶中的一种或多种。10.权利要求1所述基因edyp_48、elac_205、edio_858、eoxi_996、egre_1016、esod_1236、eoxi_1594、egly_3182、emon_3330、emcat_3587、ecat_4287在调控erwinia sp.ql-z3菌株降解木质素中的应用。

技术总结
本发明公开了菌株Erwinia sp.QL-Z3中与木质素降解相关的基因：EDYP_48、ELAC_205、EGSS_410、EDIO_858、EOXI_996、EGRE_1016、ESOD_1236、EOXI_1594、EGLY_3182、EMON_3330、ECAT_3467、EMCAT_3587、ECAT_4287。这些基因受培养基中碳源木质素的诱导调控。敲除EDYP_48、ELAC_205、EDIO_858、EOXI_996、ESOD_1236、EMON_3330、EMCAT_3587基因的突变株对木质素降解率均显著降低，木质素降解相关酶的活性亦显著降低。显著降低。显著降低。


技术研发人员：卫亚红 黄丽丽 赵姝婷 邓东涛 邓磊 田乾易 冯洁 赵颖嘉
受保护的技术使用者：西北农林科技大学
技术研发日：2023.05.06
技术公布日：2023/8/14