一种miR-3074-3p抑制剂及其应用

一种mir-3074-3p抑制剂及其应用
技术领域
1.本发明属于生物医药领域，具体涉及一种mir-3074-3p抑制剂及其应用。


背景技术：

2.龋病是导致牙体缺损最常见的原因，随着龋病的进展，牙体组织缺损扩大，浅则造成牙齿敏感症状，重则导致牙髓产生炎症进一步发展成牙髓病和根尖周病，不仅影响咀嚼功能，影响患者的身心健康，还会影响患者的美观。实际上，随着龋病的进展，牙髓牙本质复合体会产生生理性反应，牙髓间充质干细胞分化为成牙本质细胞形成修复性牙本质，阻断疾病进一步进展。如今，基于干细胞的组织工程性修复及组织再生越来越多被证明在组织再生领域拥有巨大的应用远景及临床价值，这为牙体组织缺损的组织工程性修复提供了契机，基于牙髓干细胞的组织再生是牙本质修复和牙齿再生的重要策略。
3.mir-3074首次报道于2015年，主要参与肿瘤发展、细胞代谢和组织修复。有研究表明mir-3074-3p不仅参与神经损伤的炎症反应和修复过程，而且可调节成肌细胞分化过程，改善肌肉再生，对于mir-3074-3p是否参与其他干细胞分化的生物学过程中仍未阐明。本发明首次发现mir-3074-3p参与调控牙髓干细胞成牙分化过程，可进一步用于成牙修复。
4.金纳米颗粒(aunps)是直径为1-100nm的小型纳米材料，具有独特的生化表面特性，稳定，易于合成，可调节尺寸，被聚乙烯亚胺(pei)包裹进行电荷负载时拥有更高的转运效率。作为小分子药物或生物大分子(如dna、sirna和mirna)的理想载体，pei-aunps可搭载各种功能分子用于组织再生。已有研究表明金纳米颗粒搭载mirnas能够发挥体内成骨功能，以金纳米颗粒搭载antagomir-3074-3p有望实现成牙修复。


技术实现要素：

5.本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出mir-3074-3p在制备调控牙髓干细胞成牙分化的产品中的应用。
6.本发明还提出一种mir-3074-3p抑制剂。
7.本发明还提出一种组合物。
8.本发明还提出一种上述组合物的制备方法。
9.本发明还提出上述抑制剂和组合物的应用。
10.本发明还提出一种牙本质修复和再生方法。
11.根据本发明的一个方面，提出了mir-3074-3p在制备调控牙髓干细胞成牙分化的产品中的应用。
12.在本发明的一些实施方式中，所述mir-3074-3p通过调控(i)-(iii)任一项调控牙髓干细胞成牙分化：
13.(i)促进或抑制牙髓干细胞矿化；
14.(ii)alp、col1、dmp-1和dspp中至少一种基因的表达；
15.(iii)促进或抑制牙本质修复和再生。
16.在本发明的一些实施方式中，所述mir-3074-3p的核苷酸序列如seq id no.2所示。
17.在本发明的一些实施方式中，所述产品包括药物或非药用制剂。
18.根据本发明的第二方面，提出了一种mir-3074-3p抑制剂，所述抑制剂用于抑制上述mir-3074-3p蛋白质的编码基因表达、或降解mir-3074-3p蛋白质、或降低mir-3074-3p蛋白质表达水平。
19.在本发明的一些实施方式中，所述mir-3074-3p抑制剂为靶向mir-3074-3p蛋白质的dsrna、mirna、核酶或shrna。
20.在本发明的一些实施方式中，所述mir-3074-3p抑制剂的核苷酸序列如seq id no.1所示。
21.根据本发明的第三方面，提出了一种组合物，所述组合物包括上述mir-3074-3p抑制剂。
22.在本发明的一些实施方式中，所述组合物还包括聚乙烯亚胺修饰金纳米颗粒(pei-aunps)。
23.在本发明的一些实施方式中，所述组合物还包括水凝胶。
24.在本发明的一些实施方式中，所述水凝胶包括gelma。
25.在本发明的一些实施方式中，所述mir-3074-3p抑制剂溶液与聚乙烯亚胺修饰金纳米颗粒溶液的添加体积比为(1～7)：(1～3)。
26.根据本发明的第四方面，提出了一种上述组合物的制备方法，包括以下步骤：将mir-3074-3p抑制剂与聚乙烯亚胺修饰金纳米颗粒溶液混合制备即得。
27.在本发明的一些实施方式中，所述方法还包括将mir-3074-3p抑制剂与聚乙烯亚胺修饰金纳米颗粒溶液混合制备得到的复合物加入至水凝胶中进行紫外固化的步骤。
28.在本发明的一些实施方式中，所述聚乙烯亚胺修饰金纳米颗粒溶液的制备包括以下步骤：将haucl4溶液与pei溶液混合，制备得到金纳米颗粒溶胶；将所述金纳米颗粒溶胶透析、浓缩得到所述述聚乙烯亚胺修饰金纳米颗粒溶液。
29.在本发明的一些实施方式中，所述haucl4溶液的浓度为12～15mm。
30.在本发明的一些实施方式中，所述pei溶液的质量浓度为0.5％～2％。
31.在本发明的一些实施方式中，所述透析采用的透析袋孔径等级为10万截留分子量。
32.在本发明的一些实施方式中，所述浓缩采用聚乙二醇固体浓缩。
33.在本发明的一些实施方式中，所述水凝胶的浓度为8％～12％。
34.根据本发明的第五方面，提出了上述抑制剂和组合物的应用，所述应用为在制备促进牙髓干细胞成牙分化的产品中的应用。
35.在本发明的一些实施方式中，所述应用为在制备牙本质修复和再生的产品中的应用。
36.在本发明的一些实施方式中，所述应用为在制备盖髓材料中的应用。
37.在本发明的一些实施方式中，所述应用为在制备用于牙髓治疗产品中的应用。
38.在本发明的一些实施方式中，所述应用为在制备alp表达促进剂中的应用。
39.在本发明的一些实施方式中，所述应用为在制备col1表达促进剂中的应用。
40.在本发明的一些实施方式中，所述应用为在制备dmp-1表达促进剂中的应用。
41.在本发明的一些实施方式中，所述应用为在制备dspp表达促进剂中的应用。
42.在本发明的一些实施方式中，所述产品包括药物或非药用制剂。
43.根据本发明的第五方面，提出了一种牙本质修复和再生方法，所述方法包括以下步骤：将上述抑制剂或组合物导入待修复的牙齿中。
44.在本发明的一些实施方式中，所述导入方式采用注射。
45.根据本发明的一些的实施方式，至少具有以下有益效果：本发明方案首次发现了mir-3074-3p在牙髓干细胞成牙分化过程中的调节作用，通过制备mir-3074-3p的抑制剂antagomir-3074-3p可促进牙髓干细胞成牙分化；在此基础上构建了antagomir-3074-3p/pei-aunps复合物，不仅具有良好的生物相容性，且在体外能有效促进人牙髓干细胞成牙分化。通过进一步构建antagomir-3074-3p/pei-aunps/gelma复合物，发现其在大鼠盖髓模型中能有效促开髓孔处修复性牙本质形成。因此，利用antagomir-3074-3p/pei-aunps/gelma复合物，可体内促进修复性牙本质形成，进而可用于牙本质修复和再生性治疗，其对于盖髓治疗具有重要意义。
附图说明
46.下面结合附图和实施例对本发明做进一步的说明，其中：
47.图1为本发明实施例1中的mir-3074-3p可能参与hdpscs的成牙分化过程的验证结果图；其中，a为nc组和tsc1组之间8种差异倍数大于10倍的相关mirna表达量图，mir-3074-3p的表达量最高；b为qrt-pcr验证nc组和tsc1组之间mir-3074-3p、mir-23b、let-7b-3p、let-7b-5p相对表达量差异结果图，两组间mir-3074-3p表达量具有显著差异，数据以平均值
±
标准差表示，n＝3/组，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001；
48.图2为本发明实施例1中的mir-3074-3p可抑制人牙髓干细胞成牙分化而mir-3074-3pinhibitor可促进人牙髓干细胞成牙分化结果图；其中，a为qrt-pcr检测mir-3074-3p过表达或抑制下的hdpscs成牙相关标志物(alp、col1、dmp-1和dspp)的mrna表达水平检测结果图；b为western blot检测成牙相关标志物(alp、col1、dmp-1和dspp)的蛋白表达水平检测结果图；c为mir-3074-3p过表达或抑制下的hdpscs茜素红染色图，标尺，300μm。数据以平均值
±
标准差表示，n＝3/组，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001，ns表示无显著性；
49.图3为本发明实施例2中的antagomir-3074-3p/pei-aunps复合物构建，生物相容性鉴定结果图；其中，a为pei-aunps的tem图像，标尺，50nm；b为antagomir-nc和antagomir-3074-3p与pei-aunps组合的琼脂糖凝胶电泳分析结果图；c为antagomir-3074-3p/pei-aunps复合物处理后hdpscs的细胞增值迁移能力鉴定，标尺，250μm，数据以平均值
±
标准差表示，n＝3/组，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001，ns表示无显著性；
50.图4为本发明测试例中的antagomir-3074-3p/pei-aunps复合物体外促进人牙髓干细胞成牙分化的检测结果图；其中，a为qrt-pcr检测antagomir-3074-3p/pei-aunps复合物处理后hdpscs成牙相关标志物(alp、col1、dmp-1和dspp)的mrna表达水b为western blot检测antagomir-3074-3p/pei-aunps复合物处理后hdpscs成牙相关标志物(alp、col1、dmp-1和dspp)的蛋白质表达水平；c为antagomir-3074-3p/pei-aunps复合物处理后hdpscs茜素红染色，标尺，250μm；数据以平均值
±
标准差表示，n＝3/组，*p《0.05，**p《0.01，***p《
0.001，ns表示无显著性；
51.图5为本发明测试例中的antagomir-3074-3p/pei-aunps/gelma复合物大鼠在盖髓模型促进修复性牙本质形成的结果图；其中a为cy3-antagomir-nc/pei-aunps或cy3-antagomir-3074-3p/pei-aunps在7天内从gelma的释放曲线图；b为大鼠盖髓实验，gelma、pei-aunps/gelma复合物，antagomir-nc/pei-aunps/gelma复合物和antagomir-3074-3p/pei-aunps/gelma复合物分别盖髓4周后穿髓孔处牙体组织的苏木精-伊红染色切片图(4x，标尺，250μm；10x，标尺，100μm)；数据以平均值
±
标准差表示，n＝3/组，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001，ns表示无显著性。
具体实施方式
52.以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。
53.实施例1mir-3074-3p在制备促进牙髓干细胞成牙分化的产品中的应用
54.1、筛选mir-3074-3p与成牙过程密切相关
55.由上海生博生物医药科技有限公司设计并提供shrna-tsc1慢病毒，在最佳转染复数moi＝50下转染成牙本质细胞mdpc23，设置阴性对照组(未经慢病毒转染的成牙本质细胞mdpc23)，矿化诱导7天后，收集两组细胞送基因芯片检测，检测及原始数据由广州诺禾致源公司提供。使用r语言软件中“limma“包对数据进行差异表达mirna筛选，筛选结果如图1中的a图所示，筛选得到8种高表达量差异的mirna，可能与成牙功能密切相关，其中，mir-3074-3p表达量最高。
56.mir-3074-3p的核苷酸序列：gauaucagcucaguaggcaccg(seq id no.2)。
57.2、mirna表达量的验证
58.通过qrt-pcr验证差异mirna，mir-3074-3p、mir-23b、let-7b-3p和let-7b-5p(引物由上海生工公司设计并提供)在感染shrna-tsc1慢病毒的成牙本质细胞mdpc23和阴性对照组的表达量的区别，qrt-pcr的引物如表1所示，gapdh基因作为内参基因。
59.表1
[0060][0061]
检验结果如图1中的b图所示，两组细胞间mir-3074-3p表达量有显著差异，说明mir-3074-3p与成牙过程密切相关。
[0062]
3、mir-3074-3p促进牙髓干细胞成牙分化的验证
[0063]
由广州新代生物科技有限公司设计并提供mir-3074-3p mimic(mir-3074-3p模拟物)、mimic-nc(mimic阴性对照组)及mir-3074-3p inhibitor(mir-3074-3p抑制剂)、inhibitor-nc(inhibitor阴性对照组)。
[0064]
mir-3074-3pmimic：5
′‑
gauaucagcucaguaggcaccg-3
′
(seq id no.23)；
[0065]
mimic-nc：5
′‑
uuuguacuacacaaaaguacug-3
′
(seq id no.24)；
[0066]
mir-3074-3pinhibitor：5
′‑
cggugccuacugagcugauauc-3
′
(seq id no.25)；inhibitor-nc：5
′‑
caguacuuuuguguaguacaaa-3
′
(seq id no.26)。
[0067]
准备生长状态好的第3～4代人牙髓干细胞，按照lipo2000转染说明书，根据细胞孔板使用opti-medium稀释mir-3074-3p mimic及mimic-nc(转染细胞的终浓度为50nm)，移液枪吹打混匀。另取1个无菌1.5mlep管，吸取等量opti-medium稀释lipofectamine2000，移
液枪吹打混匀，室温下静置5min。移液枪吹打混匀转染试剂和mirna质粒稀释液，室温下静置20min。将转染复合物加入到细胞孔板中，前后轻摇细胞板混合均匀。细胞培养板置于37℃、5％co2培养箱中培养24-48h。转染4-6h后可换新鲜培养基。同样方法以转染细胞的终浓度为100nm转染mir-3074-3p inhibitor及inhibitor-nc。核酸持续转染人牙髓干细胞并进行矿化诱导。矿化诱导培养基由包含10％血清的低糖dmed培养基，50μg/ml抗坏血酸、10mmβ-甘油磷酸和0.01μm地塞米松组成。矿化诱导过程中每2-3天换1次矿化诱导培养基。
[0068]
具体步骤如下：
[0069]
(1)7天后，提取人牙髓干细胞总rna，qrt-pcr验证mir-3074-3p对人牙髓干细胞成牙相关标志物alp、col1、dmpp-1、dspp的mrna表达水平的影响，qrt-pcr采用的引物如表1所示。
[0070]
结果如图2中的a图所示，mir-3074-3p mimic组相比于阴性对照组成牙相关标志物mrna表达水平显著降低，相反mir-3074-3p inhibitor组相比于阴性对照组成牙相关标志物mrna表达水平显著升高。
[0071]
(2)14天后，提取人牙髓干细胞总蛋白，westernblotting验证mir-3074-3p对人牙髓干细胞成牙相关标志物蛋白表达影响。
[0072]
结果如图2中的b图所示，mir-3074-3p mimic组相比于阴性对照组成牙相关标志物蛋白表达水平显著降低，相反mir-3074-3p inhibitor组相比于阴性对照组成牙相关标志物蛋白表达水平显著升高。
[0073]
(3)14天后进行ars染色。结果如图2中的c图所示，ars染色结果表明mir-3074-3p mimic组相比于阴性对照组矿化结节的沉积减少，相反mir-3074-3pinhibitor组相比于阴性对照组矿化结节的沉积增多。
[0074]
说明mir-3074-3p抑制牙髓干细胞成牙分化，而mir-3074-3p inhibitor可促进牙髓干细胞成牙分化。
[0075]
实施例2
[0076]
本实施例制备了一种antagomir-3074-3p/pei-aunps复合物，具体过程为：
[0077]
(1)pei-aunps合成：取6ml 14mm haucl4溶液和4.32ml 1％pei溶液混合并在室温下用磁力转子搅拌24h，可获得酒红色金纳米颗粒溶胶；取5ml金纳米颗粒溶胶，在截留分子量为10万的透析袋包裹下用去离子水透析7天，去除多余的pei；透析后的金纳米颗粒溶胶用聚乙二醇固体浓缩至1.25ml，收集后置于4℃下储存；在tem下可见其合成的pei-aunps大致呈圆形，尺寸约为30nm(如图3中的a图所示)。
[0078]
(2)antagomir-3074-3p序列交由广州锐博生物公司进行合成。
[0079]
antagomir-3074-3p：5
′‑
guaucagcugaggcaccg-3
′
(seq id no.1)。
[0080]
antagomir-nc(通用阴性对照)购自广州锐博生物公司。
[0081]
20μm的antagomir-3074-3p及antagomir-nc分别以1:1、4:4、3:2、5:3、7:4、2:1体积比与浓缩后的金纳米颗粒混合后，在配制好1％的琼脂糖中进行凝胶电泳，确定antagomir-3074-3p及antagomir-nc与pei-aunps的最佳配比分别为3:2及5:3(如图图3中的b图所示)，按最佳配比制备得到antagomir-3074-3p/pei-aunps复合物和antagomir-nc/pei-aunps复合物。
[0082]
实施例3
[0083]
本实施例制备了一种antagomir-3074-3p/pei-aunps/gelma复合物，具体过程为：
[0084]
通过超声波振动将固体gelma以1:9的比例溶解在1％2959光引发溶液中，以获得液体10％gelma，其在室温下无光储存；
[0085]
室温下，将0.01μmol的实施例2制备得到的antagomir-3074-3p/pei-aunps及antagomir-nc/pei-aunps复合物分别均匀包裹于液态gelma中，并在365nm紫外灯照射下固化，制备得到antagomir-3074-3p/pei-aunps/gelma复合物和antagomir-nc/pei-aunps/gelma复合物。
[0086]
试验例
[0087]
本试验例测试了实施例2制备的antagomir-3074-3p/pei-aunps复合物和实施例3制备得到的antagomir-3074-3p/pei-aunps/gelma复合物的性能。
[0088]
1、antagomir-3074-3p/pei-aunps复合物生物相容性检测
[0089]
antagomir-3074-3p/pei-aunps及antagomir-nc/pei-aunps复合物以antagomir-3074-3p及antagomir-nc 100nm浓度下体外转染人牙髓干细胞，进行细胞划痕实验，检测实施例2制备的复合物对人牙髓干细胞增殖迁移能力的影响。
[0090]
细胞划痕实验结果如图3中的c图所示，结果表明antagomir-3074-3p/pei-aunps复合物对人牙髓干细胞增殖迁移能力几乎无影响。
[0091]
2、体外实验检测antagomir-3074-3p/pei-aunps复合物对人牙髓干细胞成牙分化的影响。
[0092]
antagomir-3074-3p/pei-aunps及antagomir-nc/pei-aunps复合物以antagomir-3074-3p及antagomir-nc 100nm浓度下体外持续转染人牙髓干细胞并进行矿化诱导。
[0093]
(1)7天后，提取人牙髓干细胞总rna，qrt-pcr检验antagomir-3074-3p/pei-aunps及antagomir-nc/pei-aunps复合物对人牙髓干细胞成牙相关标志物alp、col1、dmpp-1、dspp的mrna表达水平影响，引物如表1所示。
[0094]
结果如图4中的a图所示，antagomir-3074-3p/pei-aunps组相比于空白组和antagomir-nc/pei-aunps组成牙相关标志物mrna表达水平显著提高。
[0095]
(2)14天后，提取人牙髓干细胞总蛋白，western blotting检验antagomir-3074-3p/pei-aunps及antagomir-nc/pei-aunps复合物对人牙髓干细胞成牙相关标志物alp、col1、dmpp-1、dspp蛋白表达水平影响。
[0096]
结果如图4中的b图所示，antagomir-3074-3p/pei-aunps组相比于空白组和antagomir-nc/pei-aunps组成牙相关标志物蛋白表达水平显著提高。
[0097]
(3)14天后进行ars染色，ars染色结果如图4中的c图所示，表明antagomir-3074-3p/pei-aunps组相比于空白组和antagomir-nc/pei-aunps组矿化结节的沉积增多。
[0098]
说明antagomir-3074-3p/pei-aunps复合物在体外能够显著促进人牙髓干细胞成牙分化。
[0099]
3、体外实验检测antagomir-3074-3p/pei-aunps复合物从gelma中释放情况
[0100]
将实施例3制备得到的antagomir-3074-3p/pei-aunps/gelma复合物和antagomir-nc/pei-aunps/gelma复合物，分散在4000μl无dnase/rnase水中。然后，在接下来的7天内每天从悬浮液中获得固定量的上清液。
[0101]
通过使用多模平板读取器(cytation 5，biotek)检测上清液中的荧光强度(激发
＝550nm/发射＝615nm)来评估cy3-antagomir-3074/pei-aunps及cy3-antagomir-nc/pei-au-nps从gelma的释放，结果如图5中的a图所示，antagomir-3074-3p/pei-aunps及antagomir-nc/pei-aunps可以在7天内从gelma中缓慢释放约80％。
[0102]
4、体内大鼠盖髓模型构建，antagomir-3074-3p/pei-aunps/gelma复合物盖髓可促进穿髓孔处修复性牙本质形成。
[0103]
实验采用8周大雄性sprague-dawley大鼠，大鼠在3％戊巴比妥钠麻醉下，使用便携式牙科动力系统在上颌第一磨牙的中心牙尖处制造i类洞，通过胰岛素注射器将实施例3制备的antagomir-3074-3p/pei-aunps/gelma复合物注射到缺损处，并在距缺损1cm处用365nm波长的紫外光照射30秒进行固化。随后，用玻璃离子水门汀和树脂封闭缺损。磨掉相对的牙尖以缓解咬合。空白对照组仅开放上颌第一磨牙，gelma组为gelma进行盖髓，antagomir-3074-3p/pei-aunp/gelma盖髓为实验组，每组分别6只大鼠。术后4周解剖上颌第一磨牙并在4％多聚甲醛中固定1周，1周后脱钙1个月，然后脱水包埋切片he染色。
[0104]
结果如图5中的b图所示，空白组开髓孔处牙髓炎细胞浸润，8周内逐渐发生大面积坏死，没有继发性牙本质形成。尽管gelma组牙髓炎症坏死程度相比于空白组轻，8周后，牙齿开髓孔处仍然没有有效的修复性牙本质形成。当加载pei-aunps时，1周内炎症相对较少，4周时牙齿开髓孔处有少量矿化沉积物。此外，8周时，pei-aunps/gelma组和antagomir-nc/pei-aunps/gelma组的开髓孔处有较明显的矿化物形成。当antagomir-3074-3p进一步结合时，在牙齿穿孔处形成了相对完整的牙本质修复，在4周和8周时，新生牙本质封闭穿髓孔。新形成的牙本质是第三期牙本质的特征，与原始牙本质结构不同。在antagomir-3074-3p/pei-aunps/gelma组中，穿孔处的新生牙本质形成最完整。
[0105]
上面结合附图对本发明实施例作了详细说明，但是本发明不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

技术特征：
1.mir-3074-3p在制备调控牙髓干细胞成牙分化的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述mir-3074-3p通过调控(i)-(iii)任一项调控牙髓干细胞成牙分化：(i)促进或抑制牙髓干细胞矿化；(ii)alp、col1、dmp-1和dspp中至少一种基因的表达；(iii)促进或抑制牙本质修复和再生。3.一种mir-3074-3p抑制剂，其特征在于，所述抑制剂用于抑制mir-3074-3p蛋白质的编码基因表达、或降解mir-3074-3p蛋白质、或降低mir-3074-3p蛋白质表达水平。4.根据权利要求3所述的mir-3074-3p抑制剂，其特征在于，所述mir-3074-3p抑制剂为靶向mir-3074-3p蛋白质的dsrna、mirna、核酶或shrna。5.根据权利要求4所述的mir-3074-3p抑制剂，其特征在于，所述mir-3074-3p抑制剂为靶向mir-3074-3p蛋白质的mirna；优选地，所述mir-3074-3p抑制剂的核苷酸序列如seq id no.1所示。6.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括如权利要求3-5任一项所述的mir-3074-3p抑制剂。7.根据权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括聚乙烯亚胺修饰金纳米颗粒；优选地，所述组合物还包括水凝胶。8.权利要求3-5任一项所述的mir-3074-3p抑制剂或权利要求6或7所述的组合物的以下任一应用：(1)在制备促进牙髓干细胞成牙分化的产品中的应用；(2)在制备牙本质修复和再生的产品中的应用；(3)在制备用于盖髓的产品中的应用；(4)在制备用于牙髓治疗的产品中的应用；(5)在制备alp表达促进剂中的应用；(6)在制备col1表达促进剂中的应用；(7)在制备dmp-1表达促进剂中的应用；(8)在制备dspp表达促进剂中的应用。9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述产品包括药物或非药用制剂。10.一种牙本质修复和再生方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：将权利要求3-5任一项所述的mir-3074-3p抑制剂或权利要求6或7所述的组合物导入待修复的牙齿中。

技术总结
本发明公开了一种miR-3074-3p抑制剂及其应用。本发明方案首次发现了miR-3074-3p在牙髓干细胞成牙分化过程中的调节作用，通过制备miR-3074-3p的抑制剂AntagomiR-3074-3p可促进牙髓干细胞成牙分化；在此基础上构建了AntagomiR-3074-3p/PEI-AuNPs复合物，具有良好的生物相容性，在体外能有效促进人牙髓干细胞成牙分化，通过进一步构建AntagomiR-3074-3p/PEI-AuNPs/GELMA复合物，可以作为盖髓剂，在大鼠体内有明显的促成牙本质效果，进而可用于牙本质修复和再生性治疗。于牙本质修复和再生性治疗。


技术研发人员：麻丹丹 蒋涛 缪胜宏 宋文婧 沈靖杰 谭生龙 罗醒红
受保护的技术使用者：南方医科大学口腔医院
技术研发日：2023.05.30
技术公布日：2023/8/31