一种小分子抑制剂药物增强NK细胞抗肿瘤作用的用途及其应用

一种小分子抑制剂药物增强nk细胞抗肿瘤作用的用途及其应用
技术领域
1.本发明涉及细胞免疫治疗领域，具体地，本发明涉及一种小分子抑制剂药物增强nk细胞抗肿瘤作用的用途及其应用，所述小分子抑制剂药物为venetoclax，其直接激活nk细胞，并显著促进nk细胞抗肿瘤免疫治疗的效果。


背景技术：

2.过继性免疫细胞治疗是一种治疗临床选择有限的血液肿瘤以及实体恶性肿瘤的有前途的新方法，也是当前肿瘤治疗领域的热点之一。近年来，嵌合抗原受体t细胞(car-t细胞)在治疗血液恶性肿瘤方面取得了显著的成效。然而，car-t细胞在临床应用中存在细胞因子风暴、神经毒性、移植物抗宿主病等不良反应，同时对实体瘤的治疗效果尚不理想，这使得car-t细胞的临床应用仍面临挑战。自然杀伤(nk)细胞是一种独特的先天性淋巴细胞群，具有识别和消除病毒感染细胞和肿瘤细胞的内在能力。nk细胞相较于t细胞，具有更好的安全性，不会引起细胞因子风暴和移植物抗宿主病等副作用。此外，nk细胞不需要抗原递呈和不受mhc限制，可直接杀伤肿瘤细胞。nk细胞可通过多种识别机制识别和杀伤肿瘤，抗瘤谱广泛，因此在抗肿瘤治疗中有广泛的应用前景，成为细胞免疫治疗研发领域的热点。然而，基于nk细胞的免疫治疗在研发过程中面临的挑战之一是nk细胞在体内抗肿瘤活性较弱，影响其在体内的效果。因此，增强nk细胞抗肿瘤活性对nk细胞免疫疗效至关重要。
3.bcl-2蛋白由bcl-2基因编码翻译表达，是bcl-2家族中一个十分重要的抗凋亡蛋白。研究表明bcl-2蛋白在多种肿瘤细胞中高表达且与化疗药物耐药密切相关。venetoclax，作为一种bcl-2的特异性小分子抑制剂药物，其与去甲基化药物阿扎胞苷联用可在不适合接受化疗的老年急性髓性白血病患者中产生快速和持久的应答，因而被fda批准用于治疗急性髓系白血病的患者。但venetoclax在nk细胞功能及其免疫治疗方面的研究并不深入。


技术实现要素：

4.本发明旨在解决现有技术的缺陷，提供一种增强nk细胞对于肿瘤细胞杀伤活性的小分子抑制剂及其应用。
5.为了解决上述的技术问题，本发明提供了如下技术方案：
6.一方面，本发明提供抗肿瘤制剂，其特征在于，所述制剂包括经venetoclax处理的nk细胞。
7.在一些实施方案中，所述nk细胞来源于脐带血、急性髓系白血病患者骨髓、外周血例如正常供者外周血、永生化nk细胞系nk92、ipsc衍生的nk细胞或脐带血来源的cd34
+
hspc诱导分化而来的nk细胞。
8.另一方面，本发明提供提高nk细胞肿瘤杀伤活性的培养基或试剂盒，其特征在于，所述培养基或试剂盒包括基础培养基和venetoclax，所述基础培养基选自rpim1640培养
基、scgm培养基、imdm培养基和dmem培养基。
9.在一些实施方案中，所述培养基或试剂盒还包括选自il-12、il-15、il-2和il-18的两种或更多种细胞因子。
10.在一些实施方案中，所述venetoclax的含量为200-1000nm，优选200-500nm、200-600nm、200-700nm、200-800nm、200-900nm、200-1000nm、200-1100nm、200-1200nm、200-1300nm、200-1400nm、200-1500nm、200-1600nm、200-1700nm、200-1800nm、200-1900nm，更优选400nm。
11.在一些实施方案中，所述细胞因子为il-12和il-15，所述il-12的浓度为5-20ng/ml，优选10ng/ml，所述il-15的浓度为5-100ng/ml，优选50ng/ml。
12.另一方面，本发明提供venetoclax在制备具有提高的肿瘤杀伤活性的nk细胞中的用途。
13.另一方面，本发明提供venetoclax在制备提高nk细胞肿瘤杀伤活性的试剂中的用途，任选地，所述试剂还包括选自il-12、il-15、il-2和il-18的两种或更多种细胞因子。
14.另一方面，本发明提供治疗受试者的肿瘤的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的经venetoclax处理的nk细胞。
15.另一方面，本发明提供制备具有提高的肿瘤杀伤活性的nk细胞的方法，所述方法包括用上述的培养基培养所述nk细胞，并分离出经培养的细胞。
16.另一方面，本发明提供提高nk细胞肿瘤杀伤活性的方法，其特征在于，所述方法包括用上述培养基培养所述nk细胞。
17.在一些实施方案中，所述nk细胞来自于受试者。
18.在一些实施方案中，所述肿瘤选自急性髓系白血病、b细胞淋巴瘤、三阴性乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、肺癌和肝癌。
19.定义
20.venetoclax，一种bcl-2的特异性抑制剂，其化学式为c
45h50
cln7o7s。
21.其结构式为
[0022][0023]
kg1a细胞：kg1a是一种人类急性髓系白血病细胞系，kg1a细胞系是一种较为原始的细胞系，有干细胞特性，可以诱导分化成不同的细胞类型，如髓样、粒细胞、单核细胞和红细胞系。几乎所有kg1a细胞都表达cd34和cd38，这两种表面标记物是髓系细胞和干细胞的标记物之一。可以用于研究急性髓系白血病和其他白血病相关的基础和临床问题。
[0024]
thp1细胞：thp1是一种人类单核细胞白血病细胞系，thp1细胞系是一种较为原始的细胞系，可以诱导分化成巨噬细胞或者树突状细胞。thp1细胞系表面高表达一些单核细胞和/或巨噬细胞分化与激活相关的标记分子，如cd11b，cd64，cd14等。
[0025]
效靶比：本发明涉及效靶比为0.5:1、1:1、2.5:1、5:1。进行多个效靶比可以评估nk细胞对不同靶细胞的杀伤效果，从而确定nk细胞的杀伤能力和特异性。这有助于选择最适合的靶细胞，确定最佳的细胞比例和最佳的培养条件，以及评估药物或治疗方法对nk细胞杀伤能力的影响。此外，多个效靶比还可以评估不同样本之间的差异，以及评估不同实验条件对结果的影响。本发明的效靶比说明在低效靶比0.5：1，此效靶比接近于人体内nk细胞的比例，都可以观察到venetoclax处理的nk细胞杀伤效应的增强。
[0026]
nsg免疫缺陷小鼠：nsg小鼠是一种严重的免疫缺陷小鼠模型，其主要特点包括：1.全身性免疫缺陷：因为缺少功能性的t、b和自然杀伤细胞，nsg小鼠无法产生自身免疫反应。这意味着它们特别容易受到各种病原体的感染，包括传染性的人类病毒、寄生虫和细菌等，需要饲养在无菌的环境下。2.x-射线敏感性：nsg小鼠的敏感性很高，主要是因为缺少完整的dna修复机制。这意味着在进行模型制作时，需要小心处理和维持其健康状态。3.人源特异性：由于nsg小鼠缺乏mrna拼接和信号传导方面的保守性，因此它们对人类细胞和组织具有良好的容纳性和相似性。这使得nsg小鼠成为了测试人类肿瘤和免疫治疗方面的有效小鼠模型。4.高生存率：由于其免疫系统的缺陷，nsg小鼠无法对捐赠细胞排斥，并且对捐赠物的容纳性很高。这导致了在移植异种细胞和组织方面，其成功率和寿命要比其它小鼠模型高。
[0027]
有益效果
[0028]
本发明公开了一种小分子抑制剂，其可以显著增强多种来源的nk细胞对肿瘤细胞的杀伤能力，将该抑制剂添加到nk细胞培养基中，可以在保证nk细胞高存活力的同时，显著增强nk细胞的杀伤活性。本发明用含有小分子抑制剂venetoclax的培养基培养的nk细胞杀伤性能优异，能够在保持nk细胞高活力和高纯度的同时，在1:1效靶比的条件下将培养的nk细胞对kg1a细胞的杀伤率提高至少20％，在5:1的效靶比对kg1a细胞的杀伤活性可以达到60％。
附图说明
[0029]
图1为nk细胞存活力曲线示意图，显示venetoclax处理对nk细胞的存活力没有影响。采用t-test的统计方法，ns代表没有统计学差异。
[0030]
图2为nk细胞体外杀伤能力检测结果图，显示venetoclax处理可以显著提高nk细胞的杀伤活性。采用t-test的统计方法，*表示p《0.05,**表示p《0.01,***表示p《0.001。
[0031]
图3为nk细胞杀伤因子表达水平的检测结果，显示venetoclax处理可以显著促进nk细胞cd107a的表达以及ifn-γ的分泌。采用t-test的统计方法，*表示p《0.05,**表示p《0.01,***表示p《0.001。
[0032]
图4为病人来源的nk细胞杀伤能力检测结果图，显示venetoclax处理可以显著提高nk细胞的杀伤活性。采用t-test的统计方法，*表示p《0.05,**表示p《0.01,***表示p《0.001。
[0033]
图5为nk细胞治疗hl60-luc荷瘤小鼠的操作流程图。nsg小鼠通过尾静脉注射5
×
106个稳定表达荧光素酶的hl60-luc细胞，随后通过尾静脉输注pbs、5
×
106nk细胞或5
×
106venetoclax处理的nk细胞进行处理；通过生物发光成像每周一次监测aml负荷，持续2周。
pbs缓冲液重悬清洗细胞，350g，离心8min，弃上清。使用100μl pbs重悬细胞，加入fitc-cd45(biolegend，304308)，apc-cy7-cd3(biolegend，344818)，bv421-cd56(biolegend，362552)，避光染色15min后，加入1ml pbs重悬去掉多余的抗体，再使用100μl annexin v binding buffer(翌圣生物，40304es60)重悬细胞，加入5μl alex647-annexin v(翌圣生物，40304es60)和10μl pi(翌圣生物，40304es60)染料，避光染色10min，上流式细胞仪检测cd45+cd3-cd56+nk细胞的凋亡情况。
[0042]
图1显示添加了本发明中的小分子抑制剂venetoclax不影响nk细胞的存活力，在对照组的nk细胞存活力为90.2％，小分子抑制剂venetoclax200nm、400nm、1000nm处理组的存活力分别为90.8％、90.7％和88.5％。
[0043]
实施例2venetoclax促进脐血来源的nk细胞对肿瘤细胞的体外杀伤作用
[0044]
小分子抑制剂venetoclax预处理nk细胞：将实施例1制备好的nk细胞制成单细胞悬液后，在无菌条件下缓慢向细胞悬液中加入小分子抑制剂venetoclax(medchemexpress，hy-15531)，10ng/ml的il-12和50ng/ml的il-15，然后将混合物置于二氧化碳培养箱的水浴中孵育18小时，整个过程要求保证无菌操作，其中venetoclax混合于细胞悬液中的终浓度为400nm。
[0045]
以下是venetoclax促进nk细胞对肿瘤细胞体外杀伤实验的具体操作步骤：
[0046]
2.1靶细胞的预处理
[0047]
实验中所用到的靶细胞分别为kg1a、thp1细胞(atcc，tib-202,ccl-246.1)，使用cfse(5,6-羧基荧光素二乙酸酯，biolegend，423801)对靶细胞进行标记，在37℃5％co2培养箱中避光孵育20min，加入完全培养基(rpim1640培养基+10％胎牛血清)终止染色，1000rpm，离心5min，使用pbs重悬细胞，洗涤一次，1000rpm，离心5min，弃上清，使用rpmi 1640基础培养基(biosharp，bl303a)重悬细胞，计数，铺板，96孔板中每孔接种20000-60000个细胞/100μl。
[0048]
2.2添加效应细胞-nk细胞
[0049]
收集提前使用小分子抑制剂venetoclax预处理的nk细胞，350g，离心10min，弃掉上清，使用pbs重悬清洗细胞，350g，离心10min，弃掉上清，即预处理后将venetoclax联同培养基一起去掉了。根据预先设计好的效靶比用rpim1640基础培养基将nk细胞配制成需要的浓度，按照效靶比进行铺板，每孔加入nk细胞悬液100μl，轻轻地摇匀混合液。
[0050]
实验设计分组如下，每组3个复孔：
[0051]
1)单纯靶细胞组：向每个孔中接种100μl的靶细胞悬液，然后加入100μl rpim1640基础培养基补足体积。
[0052]
2)nk细胞组：将靶细胞和nk细胞按照不同的效靶比例接种，具体比例为：0.5:1、1:1、2.5:1、5:1。
[0053]
3)venetoclax处理nk细胞组：将靶细胞和预先使用venetoclax处理的nk细胞按照不同的效靶比接种，效靶比为：0.5:1、1:1、2.5:1、5:1。
[0054]
2.3共孵育以及检测
[0055]
按照上述分组接种完成后，在37℃、5％ co2的培养箱中共孵育4小时，
[0056]
共孵育结束后，350g，离心8min，弃掉上清，加入alex647-annexin v/pi(翌圣生物，40304es60)标记凋亡细胞，流式细胞仪检测cfse+的靶细胞的凋亡情况。
[0057]
2.4实验结果计算
[0058]
特异性杀伤效率的计算公式＝[(nk细胞组％annexin v-单纯细胞组％annexin v)/100-单纯细胞组％annexin v]*100，实验结果以平均值
±
sd表示。
[0059]
由图2结果可以看出，venetoclax预处理的nk细胞对于靶细胞的杀伤效率显著提高，并且这种效应在0.5:1的低效靶比的情况下就可以观察到。在kg1a细胞系中，对照组在效靶比0.5:1、1:1、2.5:1、5:1下的杀伤效率分别为9.3125，9.963，16.1775，20.0125，而venentoclax处理组的杀伤效率分别为21.45，33.54，41.97，58.24。在thp1细胞系中，对照组在效靶比0.5:1、1:1、2.5:1、5:1下的杀伤效率分别为10.75,13.18,36.37,52.60,而venentoclax处理组的杀伤效率分别为24.67,35.29,55.00,74.26。体外杀伤实验中nk细胞的杀伤效率一般是会随着效靶比的提高而不断增高，但在正常机体内的nk细胞比例不会达到体外实验这么高的比例，为了模拟体内的情况我们选择了0.5：1的低效靶比组，本发明中在5：1效靶比的情况下已经有较为明显的差异故没有进行进一步提高nk细胞的比例的实验。
[0060]
实施例3venetoclax促进脐血来源nk细胞杀伤功能分子的表达
[0061]
收集venetoclax预处理的nk细胞和阴性对照组nk细胞，其中venetoclax混合于细胞悬液中的终浓度为400nm，1200rpm，离心10min，弃上清，使用pbs重悬清洗细胞，1200rpm，离心10min，弃上清，用pbs将细胞密度调整为2
×
107/ml，每管加入100μl细胞悬液，用pe标记的cd107a(biolegend，328608)和fitc标记的ifn-γ(biolegend，506504)的流式抗体对细胞进行孵育然后通过流式细胞仪检测其表达。
[0062]
nk细胞杀伤靶细胞的过程中，nk细胞受到信号触发，先通过脱颗粒过程释放细胞毒颗粒到达靶细胞，细胞毒颗粒进入靶细胞后引发靶细胞的dna断裂使靶细胞凋亡。cd107a也是nk细胞脱颗粒过程中的重要参与因子。活化的nk细胞可合成和分泌多种细胞因子，发挥调节免疫和造血作用以及直接杀伤靶细胞的作用。因此本领域技术人员通过检测cd107a和ifn-γ的分泌水平从而评价nk细胞的杀伤能力。
[0063]
由图3可见，使用本发明中的小分子抑制剂可以显著促进nk细胞的杀伤能力，cd107a的表达水平可由4.7％增加至20.4％，ifn-γ的表达水平可由7.26％增加至38.1％。
[0064]
实施例4venetoclax促进病人来源的nk细胞杀伤活性
[0065]
4.1病人骨髓单个核细胞的分离
[0066]
在无菌条件下，采集急性髓系白血病患者(来自于中国科学技术大学附属第一医院血液内科提供，所有标本的采集均在患者知情同意情况下获取，并获医院伦理会批准，伦理号为2022-ky-089)的骨髓液，用于制备nk细胞和患者来源的原代肿瘤细胞。将5ml的人淋巴细胞分离液加入离心管中，缓慢地沿管壁加入2ml的骨髓液，避免破坏淋巴细胞分离液的液面。在室温下，450g，升0降0，离心30分钟。用移液管将淡黄色的单核细胞层吸出，置于新的离心管中，加入无菌的1
×
pbs进行清洗细胞。4℃条件下进行1800rpm，升9降9，离心10分钟，丢弃上清液，用pbs再次洗涤细胞，1200rpm，升9降9，离心10min，丢弃上清液，沉淀即为骨髓单个核细胞。
[0067]
4.2病人来源的nk细胞以及原代肿瘤细胞的分离及纯化
[0068]
分离得到单个核细胞悬液后，加入1ml pbs洗涤细胞，200目白纱网过滤，250g离心10min，macs buffer(miltenyi biotec，130-091-221)重悬细胞沉淀，使用大鼠血清
(future，f001007)进行封闭，4℃，孵育30min左右。加入fitc-cd45(biolegend，304308)、apc-cy7-cd3(biolegend，344818)、bv421-cd56(biolegend,362552)、apc-cd33(biolegend，303408)的流式抗体，4℃避光孵育30min。使用pbs洗涤细胞，macs buffer重悬细胞沉淀，200目白纱网过滤，转移至无菌流式管中，4℃放置。打开并调整bd流式分选仪(ariaⅲ)，进行细胞分群设门，随后分选出目的细胞群，nk细胞(cd45+cd3-cd56+)，原代肿瘤细胞(cd45+cd3-cd33+)。
[0069]
4.3nk细胞与靶细胞共孵育
[0070]
将制备好的纯化的病人来源的nk细胞制成单细胞悬液后，在无菌条件下缓慢向细胞悬液中加入小分子抑制剂venetoclax，10ng/ml的il-12和50ng/ml的il-15然后将混合物置于二氧化碳培养箱的水浴中孵育18小时，整个过程要求保证无菌操作，其中venetoclax混合于细胞悬液中的终浓度为400nm。实验中所用到的靶细胞分别为kg1a细胞和原代肿瘤细胞，使用cfse对靶细胞进行标记，在37℃5％co2培养箱中避光孵育20min，加入完全培养基(rpim1640培养基+10％胎牛血清)终止染色，1000rpm，离心5min，使用pbs重悬细胞，洗涤一次，1000rpm，离心5min，弃上清，使用rpmi 1640基础培养基重悬细胞，计数，铺板，96孔板中每孔接种20000-60000个细胞/100μl。按照效靶比为2.5：1(由于病人来源的nk细胞样本比较珍贵且数量较少没有进行多效靶比的杀伤效能的检测，选择2.5：1因为该效靶比是体外实验中比较常用的效靶比)的比例加入nk细胞，接种完成后，在37℃、5％ co2的培养箱中共孵育4小时，共孵育结束后，350g，离心8min，弃掉上清，加入alex647-annexin v/pi标记凋亡细胞，流式检测cfse+的靶细胞的凋亡情况。实验结果计算同实施例2。
[0071]
由图4可见，病人来源的nk细胞在venetoclax预处理下可显著提高对于靶细胞的杀伤效率，对于kg1a细胞杀伤效率可由2.45％至18.33％；对于原代自体肿瘤细胞的杀伤效率可由10.83％提高至37.42％。
[0072]
实施例5venetoclax显著促进nk细胞体内的抗肿瘤效应
[0073]
首先，将处于对数生长期的状态良好的人急性髓系白血病细胞hl60-luc(atcc,ccl-240-luc2)制成单细胞悬液备用。选取nsg免疫缺陷小鼠(南方模式生物有限公司，nm-nsg-001)，雌性，4-6周，2.5gy辐照清髓处理，通过尾静脉注射5*106个hl60-luc细胞/只，在约2周左右活体成像检测各只鼠的肿瘤负荷，并按肿瘤负荷随机分为3组：阴性对照组、nk细胞组和venetoclax处理的nk细胞组，每组6只荷瘤鼠。nk细胞组和经venetoclax处理的nk细胞组的荷瘤鼠通过尾静脉输注nk细胞5*106/只。
[0074]
venetoclax处理nk细胞的方法如下：
[0075]
将实施例1制备好的nk细胞制成单细胞悬液后，在无菌条件下缓慢向细胞悬液中加入小分子抑制剂venetoclax(medchemexpress，hy-15531)，10ng/ml的il-12和50ng/ml的il-15，然后将混合物置于二氧化碳培养箱的水浴中孵育18小时，整个过程要求保证无菌操作，其中venetoclax混合于细胞悬液中的终浓度为400nm。收集使用小分子抑制剂venetoclax预处理的nk细胞，350g，离心10min，弃掉上清，使用pbs重悬清洗细胞，350g，离心10min，弃掉上清。
[0076]
在实验期间，每周进行一次活体成像检测，评估各荷瘤鼠的肿瘤负荷，同时，每隔3天注射hil-15(peprotech，200-15)。注射hil-15是为了维持nk细胞在小鼠体内的活性。详细的实验步骤请参见图5。
[0077]
由图6可见，经venetoclax处理的nk细胞组的肿瘤负荷明显低于单独nk细胞组以及阴性对照组，而单独nk细胞组的肿瘤负荷相对于阴性对照组的肿瘤负荷略低。nk细胞输注治疗两周后，对照组小鼠体内肿瘤负荷的荧光信号强度为1.06
×
10
10
，nk细胞输注治疗组小鼠体内肿瘤负荷的荧光信号强度为5.56
×
109，而经venentoclax处理的nk细胞输注治疗组小鼠体内负荷的荧光信号强度为1.22
×
109。荧光信号强度越低，则肿瘤负荷越小。实验结果表明，相较于单独使用nk细胞，经venetoclax处理的nk细胞对急性髓系白血病的治疗作用明显更优，从而证实了该方案在治疗急性髓系白血病方面的可行性。并且，经venetoclax处理的nk细胞可以明显延长荷瘤鼠的生存期，对照组的中位生存期为30天，nk细胞组中位生存期为38天，经venetoclax处理的nk细胞治疗组的中位生存期为57天。这一结果进一步支持了经venetoclax处理的nk细胞的安全性。
[0078]
以上所述的具体实施例，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.抗肿瘤制剂，其特征在于，所述制剂包括经venetoclax处理的nk细胞。2.根据权利要求1所述的抗肿瘤制剂，其特征在于，所述nk细胞来源于脐带血、急性髓系白血病患者骨髓、外周血例如正常供者外周血、永生化nk细胞系nk92、ipsc衍生的nk细胞或脐带血来源的cd34
+
hspc诱导分化而来的nk细胞。3.提高nk细胞肿瘤杀伤活性的培养基或试剂盒，其特征在于，所述培养基或试剂盒包括基础培养基和venetoclax，所述基础培养基选自rpim1640培养基、scgm培养基、imdm培养基和dmem培养基。4.根据权利要求3所述的培养基或试剂盒，其特征在于，所述培养基或试剂盒还包括选自il-12、il-15、il-2和il-18的两种或更多种细胞因子。5.根据权利要求3或4所述的培养基或试剂盒，其特征在于，所述venetoclax的含量为200-1000nm，优选200-500nm、200-600nm、200-700nm、200-800nm、200-900nm、200-1000nm、200-1100nm、200-1200nm、200-1300nm、200-1400nm、200-1500nm、200-1600nm、200-1700nm、200-1800nm、200-1900nm，更优选400nm。6.根据权利要求4所述的培养基或试剂盒，其特征在于，所述细胞因子为il-12和il-15，所述il-12的浓度为5-20ng/ml，优选10ng/ml，所述il-15的浓度为5-100ng/ml，优选50ng/ml。7.venetoclax在制备具有提高的肿瘤杀伤活性的nk细胞中的用途。8.制备具有提高的肿瘤杀伤活性的nk细胞的方法，所述方法包括用根据权利要求3-6中任一项所述的培养基培养所述nk细胞，并分离出经培养的细胞。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述nk细胞来自于受试者。10.根据权利要求1或2所述的抗肿瘤制剂、根据权利要求3-6中任一项所述的培养基或试剂盒、根据权利要求7所述的用途或根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于，所述肿瘤选自急性髓系白血病、b细胞淋巴瘤、三阴性乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、肺癌和肝癌。

技术总结
本发明涉及抗肿瘤制剂，所述制剂包括经Venetoclax处理的NK细胞。本发明还涉及提高NK细胞肿瘤杀伤活性的培养基或试剂盒、Venetoclax在制备具有提高的肿瘤杀伤活性的NK细胞中的用途和制备具有提高的肿瘤杀伤活性的NK细胞的方法。使用Venetoclax培养的NK细胞在保持原有NK细胞高活率的同时表现出杀伤性能卓越，并且在肿瘤微环境中能够维持其数量和活性，从而保持强大的肿瘤杀伤活性。从而保持强大的肿瘤杀伤活性。


技术研发人员：倪芳 郑昌成 汪焱
受保护的技术使用者：中国科学技术大学
技术研发日：2023.06.26
技术公布日：2023/10/7