一种微白黄链霉菌及其应用

1.本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种微白黄链霉菌及其应用。


背景技术：

2.稻瘟病是水稻生产中最为严重的病害之一，其病原为水稻稻瘟病从秧苗期至穗期均可发生，其中在水稻穗颈部发病损失最为严重，一般平均每年可减产10％～30％，严重时可绝产。
3.水稻纹枯病是我国水稻生产上发生面积最大的病害。水稻纹枯病从秧苗期至穗期均可发生，水稻分蘖盛期至穗期发病损失最为严重，一般减产15％～20％，重病田可达60％～70％。
4.小麦赤霉病是影响麦类作物产量、品质的主要病害之一。赤霉病大流行年，小麦病穗率可达50％～100％，减产10％～40％，中度流行年的病穗率在30％～50％，减产5％～15％。
5.目前针对水稻稻瘟病、水稻纹枯病和小麦赤霉病的防治仍以化学药剂防治为主。但是，化学药剂长期大量使用不仅能引发病原菌抗药性的形成从而导致病害再猖獗，而且也易引起农产品安全问题和环境污染。


技术实现要素：

6.针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种微白黄链霉菌及其应用的技术方案。
7.本发明具体通过以下技术方案实现：
8.本发明第一方面提供了微白黄链霉菌(streptomyces albidoflavus)dm2101，该菌株已保藏于广东省微生物菌种保藏中心(简称gdmcc，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，邮政编码：510075)，保藏号为gdmcc no:62984，保藏时间为：2022年11月4日，分类命名为streptomyces albidoflavus。
9.本发明第二方面提供了含有上述微白黄链霉菌dm2101菌体和/或其发酵液的微生物菌剂。
10.本发明第三方面提供了上述微白黄链霉菌dm2101或上述微生物菌剂在防治水稻稻瘟病中的应用。
11.本发明第四方面提供了上述微白黄链霉菌dm2101或上述微生物菌剂在防治水稻纹枯病中的应用。
12.本发明第五方面提供了上述微白黄链霉菌dm2101或上述微生物菌剂在防治小麦赤霉病中的应用。
13.进一步，所述发酵液通过以下步骤得到：
14.1)将微白黄链霉菌dm2101菌胎接种于营养肉汤培养基中，摇床培养后获得种子液体；
15.2)将步骤1)得到的种子液接种至发酵培养液中，摇床培养后离心去除菌体，得到发酵液。
16.进一步，所述发酵培养液中每升含可溶性淀粉20g，牛肉膏0.5g，磷酸氢二钾0.5g，七水硫酸镁0.5g，氯化钠2g，七水硫酸亚铁0.01g，ph7.4-7.6。
17.本发明提供的微白黄链霉菌(streptomyces albidoflavus)dm2101及其发酵液对水稻稻瘟病菌、水稻纹枯病菌和小麦赤霉病菌等病原菌菌丝生长有抑制作用，可有效防治水稻稻瘟病、水稻纹枯病和小麦赤霉病为害程度，可克服了化学杀菌剂容易引发的弊端。
具体实施方式
18.以下结合实施例来进一步说明本发明。
19.实施例1：微白黄链霉菌dm2101的筛选
20.取水稻收割后稻桩(采集于杭州富阳)10g，加入到装有200ml无菌水的500ml三角瓶中，200rpm室温振荡30min后，按10倍梯度进行稀释，分别取100μl梯度稀释液涂布高氏1号培养基平板，平板于28℃培养7d；挑取单细菌菌落接种于距离中央2.5cm处的pyda培养基平板，平板中央同时分别接种水稻稻瘟病菌、水稻纹枯病菌和小麦赤霉病菌，每个平板接种4个不同的菌落后，平板于28℃培养4d，根据菌落直径，计算抑制率，挑选抑制率最高的菌株。
21.菌株培养基采用高氏1号培养基：每升培养基含可溶性淀粉20g，硝酸钾1g，磷酸氢二钾0.5g，七水硫酸镁0.5g，氯化钠0.5g，七水硫酸亚铁0.01g，琼脂粉20g，ph值7.4-7.6。液体培养基不加琼脂粉。
22.平皿抑菌采用pyda培养基：每升培养基含去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，酵母提取物1g，琼脂粉20g。
23.实施例2：微白黄链霉菌dm2101的鉴定
24.将实施例1筛选得到的菌株进行16s rdna序列鉴定，通过pcr扩增16s rdna序列，并经ncbi比对为微白黄链霉菌，并命名为微白黄链霉菌dm2101。该微白黄链霉菌dm2101的16s rdna序列如seq id no.1所示。
25.同时，对该菌株保藏于广东省微生物菌种保藏中心(简称gdmcc，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，邮政编码：510075)，保藏号为gdmcc no:62984，保藏时间为：2022年11月4日，分类命名为streptomyces albidoflavus。
26.实施例3：微白黄链霉菌dm2101发酵液抑菌活性
27.微白黄链霉菌dm2101发酵液制备：将一接种环微白黄链霉菌dm2101菌胎接种于100ml营养肉汤培养基中，200rpm，28℃摇床培养48h后获得种子液体；按3％接种量按种子液接种至发酵培养液(每升含可溶性淀粉20g，牛肉膏0.5g，磷酸氢二钾0.5g，七水硫酸镁0.5g，氯化钠2g，七水硫酸亚铁0.01g，ph7.4-7.6)中200rpm，28℃摇床培养9天后，离心去除菌体后所得发酵液待用。
28.对病原菌相对生长抑制率测定，将微白黄链霉菌dm2101发酵液按10％的比例加入到50℃-60℃的pda培养基中混匀后制成平板，在平板中央接种病原菌，每处理4个重复。以加入清水作为对照。各处理平板置于25℃培养箱培养3-5d，测量抑菌圈大小。抑制生长率(％)＝(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-菌饼直径)
×
100％。结果显示微白
黄链霉菌dm2101发酵液对水稻稻瘟病菌、水稻纹枯病菌和小麦赤霉病菌等均有显著的抑菌效果，见表1。
29.表1微白黄链霉菌dm2101发酵液的抑菌效果
[0030][0031]
实施例4：水稻稻瘟病叶瘟防治效果
[0032]
水稻稻瘟病叶瘟防治试验水稻品种选用日本晴。取3-4叶期的水稻植株进行盆栽防效测定。设4个处理，每处理3盆，每盆20株苗。采用实施例3中微白黄链霉菌dm2101发酵液，分别用水稀释5、10、20倍后，均匀喷雾，以清水处理为对照。喷雾1d后接种浓度为104cfu/ml数量的稻瘟病致病菌株孢子悬浮液。水稻苗保湿培养7d后，调查发病情况。
[0033]
病叶分级标准以水稻叶片为害症状程度分级。0级：无病1级：仅有小的针尖大小的褐点；2级：较大褐点；3级：小而圆以至稍长的褐色的环死灰斑，直径1-2毫米；4级：典型的稻瘟病斑或椭圆型，长1-2厘米，常限于两条叶脉间，病斑面积不足叶面积的2％；5级：典型的稻瘟病斑，受害面积小于10％；6级：典型的稻瘟病斑，受害面积为10-25％；7级：典型的稻瘟病斑，受害面积为26-50％；8级：典型的稻瘟病斑，受害面积为51-75％；9级：全部叶片死亡。
[0034]
病情指数＝[∑(病级值
×
该级病穗数)/(调查总穗数
×
9)]
×
100％；防治效果＝[1-(处理的病情指数/对照病情指数)]
×
100％。
[0035]
微白黄链霉菌dm2101发酵液对水稻稻瘟病防治效果见表2。
[0036]
表2为微白黄链霉菌dm2101发酵液对水稻稻瘟病的防治效果
[0037][0038]
实施例5：水稻纹枯病防治效果
[0039]
在水稻分蘖末期开始进行田间试验，水稻品种为秀水134。设4个处理，每处理3个小区，每个小区20平方米。采用实施例3中微白黄链霉菌dm2101发酵液，分别用水稀释5、10、20倍后，均匀喷雾。于水稻孕穗后期再施一次药，施药后7-14天进行药效调查。以清水处理为对照。以株为单位，每小区对角线5点取样法，每点调查相连5丛，共25丛，记录总株数、病株数和病级数。
[0040]
病叶分级标准以水稻叶鞘和叶片为害症状程度分级。0级：全株无病；1级：第四叶片及其以下各叶鞘、叶片发病(以剑叶为第一片叶)；3级：第三叶片及其以下各叶鞘、叶片发病；5级：第二叶片及其以下各叶鞘、叶片发病；7级：剑叶叶片及其以下各叶鞘、叶片发病；9级：全株发病，提早枯死。
[0041]
病情指数＝[∑(病级值
×
该级病穗数)/(调查总穗数
×
9)]
×
100％；防治效果＝[1-(处理的病情指数/对照病情指数)]
×
100％。
[0042]
微白黄链霉菌dm2101发酵液对水稻纹枯病防治效果见表3。
[0043]
表3为微白黄链霉菌dm2101发酵液对水稻纹枯病的防治效果
[0044][0045]
实施例6：小麦赤霉病防治效果
[0046]
在小麦始花期开展赤霉病防治试验，供试小麦品种扬麦20。设4个处理，每处理20平方，3次重复，随机排列。在小麦始花期，采用实施例3中微白黄链霉菌dm2101发酵液，分别用水稀释5、10、20倍后，喷雾处理；7d后进行第二次喷雾处理。以清水处理为对照。待小麦乳熟后进行病害调查。
[0047]
病穗分级标准以麦穗为害症状程度分级：0级无发病小穗，1级零星小穗发病，发病同小穗占总小穗数的25.0％以下；2级发病同小穗占总小穗数的25.0％-50.0％；3级发病同小穗占总小穗数的50.1％-75.0％；4级发病同小穗占总小穗数的75.1％以上。
[0048]
病情指数＝[∑(病级值
×
该级病穗数)/(调查总穗数
×
4)]
×
100％；防治效果＝[1-(处理的病情指数/对照病情指数)]
×
100％。
[0049]
微白黄链霉菌dm2101发酵液对小麦赤霉病防治效果见表4。
[0050]
表4为微白黄链霉菌dm2101发酵液对小麦赤霉的防治效果
[0051]

技术特征：
1.微白黄链霉菌(streptomyces albidoflavus)dm2101，其保藏号为gdmccno:62948。2.含有如权利要求1所述微白黄链霉菌dm2101菌体和/或其发酵液的微生物菌剂。3.如权利要求1所述微白黄链霉菌dm2101或权利要求2所述微生物菌剂在防治水稻稻瘟病中的应用。4.如权利要求1所述微白黄链霉菌dm2101或权利要求2所述微生物菌剂在防治水稻纹枯病中的应用。5.如权利要求1所述微白黄链霉菌dm2101或权利要求2所述微生物菌剂在防治小麦赤霉病中的应用。6.如权利要求2所述微生物菌剂，其特征在于所述发酵液通过以下步骤得到：1)将微白黄链霉菌dm2101菌胎接种于营养肉汤培养基中，摇床培养后获得种子液体；2)将步骤1)得到的种子液接种至发酵培养液中，摇床培养后离心去除菌体，得到发酵液。7.如权利要求6所述的微生物菌剂，其特征在于所述发酵培养液中每升含可溶性淀粉20g，牛肉膏0.5g，磷酸氢二钾0.5g，七水硫酸镁0.5g，氯化钠2g，七水硫酸亚铁0.01g，ph7.4-7.6。

技术总结
一种微白黄链霉菌及其应用，属于微生物技术领域。本发明一方面提供了一种微白黄链霉菌DM2101，其保藏号为GDMCC NO:62948，本发明另一方面提供了该微白黄链霉菌的用途。本发明提供的微白黄链霉菌DM2101及其发酵液对水稻稻瘟病菌、水稻纹枯病菌和小麦赤霉病菌等病原菌菌丝生长有抑制作用，可有效防治水稻稻瘟病、水稻纹枯病和小麦赤霉病为害程度，可克服了化学杀菌剂容易引发的弊端。学杀菌剂容易引发的弊端。


技术研发人员：张震 邱海萍 柴荣耀 王艳丽 郝中娜 王教瑜 孙国仓 王静
受保护的技术使用者：浙江省农业科学院
技术研发日：2023.03.20
技术公布日：2023/7/17