一种p38MAPK/MK2通路调节剂及其组合物、制备方法和用途与流程

一种p38 mapk/mk2通路调节剂及其组合物、制备方法和用途
1.本公开要求享有于2021年12月29日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202111642855.0，名称为“一种p38 mapk/mk2通路调节剂及其组合物、制备方法和用途”的在先申请的优先权。该在先申请的全文通过引用的方式结合于本公开中。
技术领域
2.本公开属于医药领域，具体涉及一种p38 mapk/mk2通路调节剂及其组合物、制备方法和用途。


背景技术：

3.生物信号转导涉及特异性的蛋白-蛋白相互作用和翻译后修饰、调节遗传和表观遗传过程以应对内外环境的作用。丝裂原活化蛋白激酶mapk(mitogen-activated protein kinase)是一组能被不同的细胞内外部应激激活的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶，是信号从细胞表面传导到细胞核内部的重要传递者。应激因素包括细胞因子、神经递质、激素、细胞应激和细胞黏附等。
4.作为mapk家族的一个亚族，p38 mapk在细胞对外界信号和炎性细胞因子的作用作出响应，p38 mapk被激活后磷酸化并激活下游多种蛋白激酶和转录因子，从而发挥复杂的生物学作用。p38 mapk包括四个成员，即p38α、p38β、p38γ和p38δ。其中，p38α被认为在炎症过程的信号通路中起着重要作用，而其它异构体的生物学功能尚未完全被发现，但它们具有多效性。研究表明，p38β在细胞保护机制中起着重要的作用，而丝裂原活化蛋白激酶mkk3(map kinase kinase 3)介导p38δ对晚期结直肠癌(crc)细胞的增殖和存活有作用。作为药物开发领域一个有吸引力的靶点，p38 mapk有多个抑制剂药物进入临床研究，截至目前还没有药物被批准上市。根据公开信息，部分候选化合物在临床研究阶段失败，临床失败的主要原因包括剂量受限制以避免毒性从到导致药物分子在作用靶点暴露量不足抗炎通路下调、信号网络冗余或参与其它mapk通路反馈调节的关键蛋白受到抑制等，而抑制反馈机制可能上调其他促炎症途径，导致炎症增加。因此，开发一款安全有效的p38 mapk抑制剂是目前该领域药物开发面临的主要挑战。
5.p38 mapk可调控超过60种底物并行使不同的生理学功能[cell 2013(152),924]，所以选择性地抑制p38 mapk下游效应物的激活，是避免由于p38 mapk的整体抑制而导致的副作用/药效不足的主要策略。mapk激活蛋白激酶2(mapk-activated protein kinase 2，mk2)是p38 mapk下游的直接作用底物，可被p38α和p38β激活。作为第一个被发现的p38 mapk底物，mk2可在转录和转录后水平调节炎症因子的表达，从而在多个炎症性疾病的调节中发挥重要作用。研究表明，mk2可通过稳定mrna的au-rich元件，从而使tnf-α、il-6、il-8和cox-2等炎症因子表达增加。在小鼠的术后肠梗阻模型中[the journal of surgical research 2013(185),102]，mk2抑制剂可减少炎症因子mip-1α、tnf-α、il-6和il-1β等的表达，同时发现多形核白细胞、肥大细胞、单核巨噬细胞浸润的减少和肠平滑肌收缩性能的改善。在小鼠的胶原诱发性关节炎(cia)模型中[journal ofimmunology 2006(177),1913]，
敲除mk2基因可以减少胶原诱发性关节炎的发生，与野生型小鼠相比，mk2-/-和mk2+/-小鼠胶原诱发性关节炎的发病率减少、严重程度降低，且炎症因子tnf-α和il-6表达也有不同程度的减少。在mk2敲除的高胆固醇血症小鼠模型中[circ res 2007(101),1104]，小鼠的大动脉的脂质沉积和巨噬细胞减少，而且vcam-1和mcp-1等炎症因子表达减少。另外，有研究表明抑制mk2可以用于抗肿瘤药物的开发[cancer cell 2007(11),175]。
[0006]
许多疾病与p38 mapk/mk2通路相关，这些疾病包括(但不限于)自体免疫疾病和炎症性疾病(例如类风湿性关节炎、发脓性汗腺炎、银屑病、炎症性肠病、特发性皮炎、系统性红斑狼疮等)、骨骼疾病、代谢疾病、神经和神经退化性疾病、癌症、心血管疾病、过敏症和哮喘、阿尔茨海默氏病和激素相关疾病等。选择性的抑制p38 mapk/mk2通路减少了对p38 mapk其它下游通路的影响，进而降低了药物开发中的潜在毒副作用和药效不充分的问题；满足与p38mapk/mk2通路相关疾病领域存在的未被满足的临床需求。


技术实现要素：

[0007]
为了改善现有技术存在的问题，本公开提供了一种如式i所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药：
[0008][0009]
其中，w为ch或n；m为0-5的整数；n为0-3的整数；
[0010]
环a为3-20元的含氮杂环基，除与母核连接的n原子以外，还任选地含有1个、2个或更多个选自o、n或s的杂原子；
[0011]
r1选自h、卤素、cn和c
1-6
烷基；
[0012]
r2选自-or
81
、-nh-c(o)r
82
、-nhr
83
和-c(o)nhr
84
；
[0013]
r3选自h、c
1-10
烷基和c
3-20
环烷基；
[0014]
r4选自h、卤素和c
1-10
烷基；
[0015]
r5分别独立地选自h、卤素、-oh、-c
1-6
烷基、-c
1-6
烷氧基、氧代(＝o)、-c(o)c
1-6
烷
基、羟基取代的c
1-10
烷基、-c(o)oh、-c(o)nr
91ar91b
、-s(o)2r
92
和-s(o)2nr
93ar93b
；
[0016]
r6选自h、卤素和甲基；
[0017]
r7分别独立地选自h、卤素、未取代或被ra取代的c
1-10
烷基和c
3-20
环烷基；ra选自卤素和c
3-20
环烷基；
[0018]r81
、r
82
、r
83
、r
84
相同或不同，彼此独立地选自无取代或任选被1、2、3、4或5个rb取代的c
6-14
芳基-c
1-10
烷基、5-14元杂芳基-c
1-10
烷基、c
6-14
芳基和5-14元杂芳基；每个rb相同或不同，彼此独立地选自卤素、卤代c
1-10
烷基、c
1-10
烷基和c
1-10
烷氧基；
[0019]r91a
、r
91b
、r
92
、r
93a
、r
93b
相同或不同，彼此独立地选自h、c
1-6
烷基和c
3-20
环烷基。
[0020]
根据本公开的实施方案，w为ch或n；m为0-5的整数；n为0-3的整数；
[0021]
环a为3-20元的含氮杂环基，除与所述母核连接的n原子以外，还任选地含有1个、2个或更多个选自o、n或s的杂原子；
[0022]
r1选自h、卤素、cn和c
1-6
烷基；
[0023]
r2选自-or
81
、-nh-c(o)r
82
、-nhr
83
和-c(o)nhr
84
；
[0024]
r3选自h、c
1-10
烷基和c
3-20
环烷基；
[0025]
r4选自h、卤素和c
1-10
烷基；
[0026]
r5分别独立地选自h、卤素、-oh、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、氧代(＝o)、-c(o)c
1-6
烷基、羟基取代的c
1-6
烷基、-c(o)oh、-c(o)nr
91ar91b
、-s(o)2r
92
和-s(o)2nr
93ar93b
；
[0027]
r6选自h、卤素和甲基；
[0028]
r7分别独立地选自h、卤素、c
1-10
烷基和c
3-20
环烷基；
[0029]r81
、r
82
、r
83
、r
84
相同或不同，彼此独立地选自c
6-14
芳基-c
1-10
烷基、5-14元杂芳基-c
1-10
烷基、c
6-14
芳基和5-14元杂芳基；其中c
6-14
芳基或5-14元杂芳基各自无取代或任选被1、2、3、4或5个彼此独立地选自卤素、卤代c
1-10
烷基、c
1-10
烷基和c
1-6
烷氧基取代；
[0030]r91a
、r
91b
、r
92
、r
93a
、r
93b
相同或不同，彼此独立地选自h、c
1-6
烷基和c
3-20
环烷基。
[0031]
根据本公开的实施方案，w为ch或n；m为0、1、2、3、4或5；n为0、1、2、3；
[0032]
环a为3-12元的含氮杂环基，除与所述母核连接的n原子以外，还任选地含有1个、2个或更多个选自o、n或s的杂原子；
[0033]
r1选自h、卤素、cn和c
1-6
烷基；
[0034]
r2选自-or
81
、-nh-c(o)r
82
、-nhr
83
和-c(o)nhr
84
；
[0035]
r3选自h、c
1-6
烷基和c
3-12
环烷基；
[0036]
r4选自h、卤素和c
1-6
烷基；
[0037]
r5分别独立地选自h、卤素、-oh、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、氧代(＝o)、-c(o)c
1-6
烷基、羟基取代的c
1-6
烷基、-c(o)oh、-c(o)nr
91ar91b
、-s(o)2r
92
和-s(o)2nr
93ar93b
；
[0038]
r6选自h、卤素和甲基；
[0039]
r7分别独立地选自h、卤素、c
1-6
烷基和c
3-12
环烷基；
[0040]r81
、r
82
、r
83
、r
84
相同或不同，彼此独立地选自c
6-14
芳基-c
1-6
烷基、5-14元杂芳基-c
1-6
烷基、c
6-14
芳基和5-14元杂芳基；其中芳基或杂芳基各自无取代或任选被1、2、3、4或5个彼此独立地选自卤素、卤代c
1-6
烷基、c
1-6
烷基和c
1-3
烷氧基取代；
[0041]r91a
、r
91b
、r
92
、r
93a
、r
93b
相同或不同，彼此独立地选自h、c
1-6
烷基和c
3-10
环烷基。
[0042]
根据本公开的实施方案，w为ch或n；m为0、1、2、3、4或5；n为0、1、2、3；
[0043]
环a为3-9元的含氮杂环基，除与所述母核连接的n原子以外，还任选地含有1个、2个或更多个选自o、n或s的杂原子；
[0044]
r1选自卤素；
[0045]
r2选自-or
81
、-nh-c(o)r
82
、-nhr
83
和-c(o)nhr
84
；
[0046]
r3选自c
1-3
烷基和c
3-6
环烷基；
[0047]
r4为c
1-3
烷基或卤素；
[0048]
r5分别独立地选自卤素、-oh、-c
1-3
烷基、-c
1-3
烷氧基、氧代(＝o)、-c(o)c
1-3
烷基、羟基取代的c
1-3
烷基、-c(o)oh、-c(o)nr
91ar91b
、-s(o)2r
92
和-s(o)2nr
93ar93b
；
[0049]
r6选自h、卤素和甲基；
[0050]
r7分别独立地选自h、卤素和c
1-3
烷基；
[0051]r81
、r
82
、r
83
、r
84
相同或不同，彼此独立地选自c
6-8
芳基-c
1-3
烷基、5-6元杂芳基-c
1-3
烷基、c
6-8
芳基、5-6元杂芳基；其中芳基或杂芳基各自无取代或任选被1、2、3、4或5个彼此独立地选自卤素、卤代c
1-3
烷基、c
1-3
烷基和c
1-3
烷氧基取代；
[0052]r91a
、r
91b
、r
92
、r
93a
、r
93b
相同或不同，彼此独立地选自h、c
1-3
烷基和c
3-7
环烷基。
[0053]
根据本公开的实施方案，w为ch或n；m为0、1、2或3；n为0或1；
[0054]
环a选自以下结构：
[0055][0056]
r1为cl或br；
[0057]
r2选自-or
81
、-nh-c(o)r
82
、-nhr
83
和-c(o)nhr
84
；
[0058]
r3为甲基或环丙基；
[0059]
r4为甲基；
[0060]
r5选自f、-oh、甲基、甲氧基、乙氧基、氧代(＝o)、-c(o)c
1-3
烷基、2-羟基异丙基、-c(o)oh、-c(o)nh2、-c(o)nhch3、-s(o)2ch3、s(o)2ch2ch3和-s(o)
2-环丙烷；
[0061]
r6选自h、f和cl；
[0062]
r7为h；
[0063]r81
、r
82
、r
83
、r
84
相同或不同，彼此独立地选自无取代或任选被1、2或3个rb取代的苯基甲基、吡啶基甲基、吡啶基乙基、苯基和吡啶基；每个rb相同或不同，彼此独立地选自f、cl和cf3。
[0064]
根据本公开的实施方案，r5和环a形成的结构可以选自：
[0065][0066][0067]
在一种优选的实施方案中，式ⅰ化合物具有式ⅰa或ⅰb所示的结构：
[0068][0069]
其中，r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、a、w、m和n具有上文所述的定义，加粗的化学键表示化合物中存在轴手性。
[0070]
在一种优选的实施方案中，式ⅰ化合物具有式ⅱ所示的结构：
[0071][0072]
其中r1、r3、r4、r5、r6、r7、m、n、w和环a彼此独立地具有上文所述的定义；
[0073]r10
选自h、卤素、未取代或任选被1个、2个或更多个卤素、oh、nh2取代的下列基团：c
1-10
烷基、c
1-10
烷氧基、卤代c
1-10
烷基、卤代c
1-10
烷氧基、c
2-10
烯基、c
2-10
烯基氧基、c
2-10
炔基和c
2-10
炔基氧基；
[0074]
每个r
11
相同或不同，彼此独立地选自h、卤素、c
1-6
烷基和卤代c
1-10
烷基；
[0075]
p为0-4的整数。
[0076]
根据本公开的实施方案，r
10
选自h、卤素、未取代或任选被1个、2个或更多个卤素、oh、nh2取代的下列基团：c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷基、卤代c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯基、c
2-6
烯基氧基、c
2-6
炔基和c
2-6
炔基氧基；
[0077]
每个r
11
相同或不同，彼此独立地选自h、卤素、c
1-6
烷基和卤代c
1-6
烷基；
[0078]
p为0、1、2、3或4。
[0079]
根据本公开的实施方案，r
10
选自h、卤素、c
1-3
烷基和卤代c
1-3
烷基；p为0、1或2；
[0080]
每个r
11
相同或不同，彼此独立地选自h、卤素、c
1-3
烷基和卤代c
1-3
烷基。
[0081]
根据本公开的实施方案，r
10
为h或甲基；p为0、1或2；
[0082]
每个r
11
相同或不同，彼此独立地选自f、cl和cf3。
[0083]
在一种更优选的实施方案中，式ⅱ化合物具有式ⅱa或式ⅱb所示的结构：
[0084][0085]
其中，r1、r3、r4、r5、r6、r7、r
10
、r
11
、a、w、m、n和p具有上文所述的定义，加粗的化学键表示存在轴手性。
[0086]
在一些实施方案中，式i、式ia、式ib、式ii、式iia或式iib所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药，其中w为n。
[0087]
在一些实施方案中，式i、式ia或式ib所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药，其中r2为-or
81
或-nhr
83
；r
81
和r
83
相同或不同，彼此独立地为c
6-8
芳基-c
1-3
烷基-或5-6元杂芳基-c
1-3
烷基-；其中c
6-8
芳基、5-6元杂芳基无取代或任选被1、2、3、4或5个彼此独立地选自卤素、卤代c
1-3
烷基、c
1-3
烷基和c
1-3
烷氧基取代，c
1-3
烷基部分与o或nh相连。
[0088]
在一些实施方案中，式i、式ia或式ib所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药，其中r2为-or
81
；r
81
为c
6-8
芳基-c
1-3
烷基或5-6元杂芳基-c
1-3
烷基；其中c
6-8
芳基和5-6元杂芳基无取代或任选被1、2、3、4或5个彼此独立地选自卤素、卤代c
1-3
烷基、c
1-3
烷基和c
1-3
烷氧基取代；c
1-3
烷基部分与o相连。在一些实施方案中，式i、式ia或式ib所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药，其中r2为-or
81
；r
81
为-ch
2-吡啶基；其中，吡啶基无取代或任选被1、2、3、4或5个彼此独立地选自卤素、卤代c
1-3
烷基、c
1-3
烷基和c
1-3
烷氧基取代。
[0089]
在一些实施方案中，式i、式ia、式ib、式ii、式iia或式iib所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药，其中r5分别独立地选自h、-oh、-c
1-6
烷基、-c
1-6
烷氧基、-c(o)c
1-6
烷基、羟基取代的c
1-10
烷基、-c(o)oh、-c(o)nr
91ar91b
和-s(o)2r
92
；r
91a
、r
91b
和r
92
相同或不同，彼此独立地选自h、c
1-6
烷基和c
3-10
环烷基。
[0090]
在一些实施方案中，式i、式ia、式ib、式ii、式iia或式iib所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药，其中r1为卤素。
[0091]
在一些实施方案中，式i、式ia、式ib、式ii、式iia或式iib所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药，其中r3为c
1-3
烷基。
[0092]
在一些实施方案中，式i、式ia、式ib、式ii、式iia或式iib所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药，其中r4为卤素或c
1-3
烷基。
[0093]
在一些实施方案中，式i、式ia、式ib、式ii、式iia或式iib所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药，其中r6为h或卤素。
[0094]
根据本公开的实施方案，式ⅰ化合物包括但不限于以下结构：
[0095]
[0096]
[0097]
[0098]
[0099]
[0100]
[0101][0102]
根据本公开的实施方案，式i所示化合物包括但不限于以下结构：
[0103]
[0104]
[0105]
[0106][0107]
本公开还提供一种式ⅰ化合物的制备方法，包括：
[0108]
方案一：化合物a1与化合物a2发生偶联反应得到式ⅰ化合物。
[0109]
反应式如下：
[0110][0111]
其中，y为cl或br；w、r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、m、n和环a彼此独立地具有上文所述定义；
[0112]
方案二：当w为n，r7为h时，化合物b1与化合物b2反应得到式ⅱ化合物；
[0113]
反应式如下：
[0114][0115]
其中r1、r3、r4、r5、r6、r7、r
10
、r
11
、m、n、p和环a彼此独立地具有上文所述的定义；
[0116]
根据本公开的实施方案，所述反应在无机碱的存在下进行；所述无机碱选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、氢氧化钠和氢氧化钾中的一种。
[0117]
根据本公开的实施方案，当r5为oh时，化合物b2中的oh可以被硅保护基保护，所述硅保护基可以为叔丁基二苯基硅基；所述硅保护基在所述反应中会脱除，得到脱保护的oh。
[0118]
本公开还提供式i所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药化合物中的至少一种在制备药物中的用途。
[0119]
根据本公开的实施方案，所述药物可以为治疗和/或预防与p38激酶抑制剂有关的疾病的药物，例如可以为mk2抑制剂或p38 mapk/mk2通路调节剂。
[0120]
本公开还提供一种药物组合物，其包含治疗有效量的式i所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药化合物中的至少一种。
[0121]
根据本公开的实施方案，所述药物组合物还包括至少一种药学上可接受的载体。
[0122]
根据本公开的实施方案，所述药物组合物还可以进一步含有一种或多种额外的治疗剂。
[0123]
所述的载体包括崩解剂，例如甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钙、交联羧甲基纤维素钠、聚乙烯基吡咯烷酮、羧丙基纤维素、淀粉等；润滑剂，包括硬脂酸钙、硬脂酸锌、硬脂酸镁、硬脂酰醇富马酸钠等；粘合剂，包括明胶、聚乙二醇、糖、树胶、淀粉、羟丙基纤维素等；稀释剂，包括甘露醇、木糖醇、乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇和淀粉；表面活性
剂，包括聚山梨酯80、十二烷基硫酸钠、滑石粉和二氧化硅。可通过使用本领域中已知的方法配制本公开组合物，以便在给予患者后提供速释、缓释或延迟释放活性成分的作用。
[0124]
本公开还提供式i所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药化合物，在治疗和/或预防与p38激酶抑制剂介导有关的疾病中的用途。
[0125]
本公开还提供治疗和/或预防与p38激酶抑制剂介导有关的疾病的方法，包括给予患者治疗或预防有效量的式i所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药化合物中的至少一种。
[0126]
根据本公开的实施方案，所述疾病可以为与p38 mapk/mk2通路相关的疾病，例如可以为自体免疫疾病和炎症性疾病(如类风湿性关节炎、发脓性汗腺炎、银屑病、炎症性肠病、特发性皮炎、系统性红斑狼疮等)、骨骼疾病、代谢疾病、神经和神经退化性疾病、癌症、心血管疾病、过敏症和哮喘、阿尔茨海默氏病和激素相关疾病。
[0127]
有益效果
[0128]
本公开的化合物对p38 mapk/mk2通路具有良好的调节作用，并具有良好的选择性。另外，本公开的化合物药代动力学等性能良好。还有，本公开的化合物可用于治疗与p38激酶抑制剂介导有关的疾病，以及制备用于此类病症或疾病的药物。
[0129]
术语定义与说明
[0130]
除非另有说明，本公开说明书和权利要求书中记载的基团和术语定义，包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中具体化合物的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。这样的组合和结合后的基团定义及化合物结构，应当被理解为本公开说明书和/或权利要求书记载的范围内。
[0131]
除非另有说明，本说明书和权利要求书记载的数值范围相当于至少记载了其中每一个具体的整数数值。例如，数值范围“1-20”相当于记载了数值范围“1-20”中的每一个整数数值即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20。此外，当某些数值范围被定义为“数”时，应当理解为记载了该范围的两个端点、该范围内的每一个整数以及该范围内的每一个小数。例如，“0～10的数”应当理解为不仅记载了0、1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的每一个整数，还至少记载了其中每一个整数分别与0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9的和。
[0132]
应当理解，本文在描述一个、两个或更多个中，“更多个”应当是指大于2，例如大于等于3的整数，例如3、4、5、6、7、8、9或10。
[0133]
应当理解，术语“任选地含有1个、2个或更多个选自o、n或s的杂原子”表示不含有杂原子的情形，或含有1个、2个或更多个选自o、n或s的杂原子的情形。
[0134]
术语“卤素”表示氟、氯、溴和碘。
[0135]
术语“c
1-10
烷基”应理解为表示具有1～10个碳原子的直链或支链饱和一价烃基。例如，表示具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子的直链和支链烷基，“c
1-6
烷基”表示具有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链和支链烷基。所述烷基是例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、2,3-二甲基
丁基、1,3-二甲基丁基或1,2-二甲基丁基等或它们的异构体。
[0136]
术语“烷氧基”指-o-(烷基)，其中烷基的定义如本文中所述。优选含有1至12个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12个)碳原子的烷氧基(c
1-12
烷氧基)，更优选含有1至6个碳原子的烷氧基(c
1-6
烷氧基)。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基和丁氧基。烷氧基可以是取代的或未取代的。
[0137]
术语“c
2-10
烯基”应理解为优选表示直连或支链的一价烃基，其包含一个或多个双键并且具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子，更优选“c
2-8
烯基”。“c
2-10
烯基”应理解为优选表示直连或支链的一价烃基，其包含一个或多个双键并且具有2、3、4、5、6、7或8个碳原子，例如，具有2、3、4、5或6个碳原子(即，c
2-6
烯基)，具有2或3个碳原子(即，c
2-3
烯基)。应理解，在所述烯基包含多于一个双键的情况下，所述双键可相互分离或者共轭。所述烯基是例如乙烯基、烯丙基、(e)-2-甲基乙烯基、(z)-2-甲基乙烯基、(e)-丁-2-烯基、(z)-丁-2-烯基、(e)-丁-1-烯基、(z)-丁-1-烯基、戊-4-烯基、(e)-戊-3-烯基、(z)-戊-3-烯基、(e)-戊-2-烯基、(z)-戊-2-烯基、(e)-戊-1-烯基、(z)-戊-1-烯基、己-5-烯基、(e)-己-4-烯基、(z)-己-4-烯基、(e)-己-3-烯基、(z)-己-3-烯基、(e)-己-2-烯基、(z)-己-2-烯基、(e)-己-1-烯基、(z)-己-1-烯基、异丙烯基、2-甲基丙-2-烯基、1-甲基丙-2-烯基、2-甲基丙-1-烯基、(e)-1-甲基丙-1-烯基、(z)-1-甲基丙-1-烯基、3-甲基丁-3-烯基、2-甲基丁-3-烯基、1-甲基丁-3-烯基、3-甲基丁-2-烯基、(e)-2-甲基丁-2-烯基、(z)-2-甲基丁-2-烯基、(e)-1-甲基丁-2-烯基、(z)-1-甲基丁-2-烯基、(e)-3-甲基丁-1-烯基、(z)-3-甲基丁-1-烯基、(e)-2-甲基丁-1-烯基、(z)-2-甲基丁-1-烯基、(e)-1-甲基丁-1-烯基、(z)-1-甲基丁-1-烯基、1,1-二甲基丙-2-烯基、1-乙基丙-1-烯基、1-丙基乙烯基、1-异丙基乙烯基。
[0138]
术语“c
2-10
炔基”应理解为优选表示直连或支链的一价烃基，其包含一个或多个三键并且具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子，例如，具有2、3、4、5、6、7或8个碳原子(即，“c
2-8
炔基”)，具有2、3、4、5或6个碳原子(即，“c
2-6
炔基”)，具有2或3个碳原子(“c
2-3
炔基”)。所述炔基是例如乙炔基、丙-1-炔基、丙-2-炔基、丁-1-炔基、丁-2-炔基、丁-3-炔基、戊-1-炔基、戊-2-炔基、戊-3-炔基、戊-4-炔基、己-1-炔基、己-2-炔基、己-3-炔基、己-4-炔基、己-5-炔基、1-甲基丙-2-炔基、2-甲基丁-3-炔基、1-甲基丁-3-炔基、1-甲基丁-2-炔基、3-甲基丁-1-炔基、1-乙基丙-2-炔基、3-甲基戊-4-炔基、2-甲基戊-4-炔基、1-甲基戊-4-炔基、2-甲基戊-3-炔基、1-甲基戊-3-炔基、4-甲基戊-2-炔基、1-甲基戊-2-炔基、4-甲基戊-1-炔基、3-甲基戊-1-炔基、2-乙基丁-3-炔基、1-乙基丁-3-炔基、1-乙基丁-2-炔基、1-丙基丙-2-炔基、1-异丙基丙-2-炔基、2,2-二甲基丁-3-炔基、1,1-二甲基丁-3-炔基、1,1-二甲基丁-2-炔基或3,3-二甲基丁-1-炔基。特别地，所述炔基是乙炔基、丙-1-炔基或丙-2-炔基。
[0139]
术语“c
3-20
环烷基”应理解为表示饱和的一价单环、二环(如并环、螺环、桥环)烃环或三环烷烃，其具有3～20个碳原子，优选“c
3-12
环烷基”，更优选优选“c
3-8
环烷基”。术语“c
3-12
环烷基”应理解为表示饱和的一价单环、双环(如桥环、螺环)烃环或三环烷烃，其具有3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个碳原子。所述c
3-12
环烷基可以是单环烃基，如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基或环癸基，或者是双环烃基如龙脑基、吲哚基、六氢吲哚基、四氢萘基、十氢萘基、二环[2.1.1]己基、二环[2.2.1]庚基、二环[2.2.1]庚烯基、6,6-二甲基二环[3.1.1]庚基、2,6,6-三甲基二环[3.1.1]庚基、二环[2.2.2]辛基、2,7-二氮杂螺[3,5]壬烷基、2,6-二氮杂螺[3,4]辛烷基，或者是三环烃基如金刚烷基。
[0140]
术语“3-20元的含氮杂环基”是指饱和的或不饱和的含氮的非芳族的环或环系，例如，其是4-、5-、6-或7-元的单环、7-、8-、9-、10-、11-、12-、13-或14-元的二环(如并环、螺环、桥环)或者三环环系，并且含有至少一个n，还可以不含或含有例如1、2、3、4、5个或更多个选自o和s和的杂原子，其中n和s还可以任选被氧化成各种氧化状态，以形成氮氧化物、-s(o)-或-s(o)
2-的状态。优选地，所述杂环基可以选自“3-12元的含氮杂环基”。术语“3-12元的含氮杂环基”意指饱和的或不饱和的含氮的非芳族的环或环系，并且含有至少一个n原子，不含或含有选自o和s和的杂原子。所述杂环基通过n原子与母核连接，可以通过所述碳原子中的任一个或其他氮原子(如果存在的话)与分子的其余部分连接。所述杂环基可以包括稠合的或桥连的环以及螺环的环。特别地，所述杂环基可以包括但不限于：4元环，如氮杂环丁烷基；5元环，如吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基；或6元环，如哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基或哌嗪基；或7元环，如二氮杂环庚烷基。任选地，所述杂环基可以是苯并稠合的。所述杂环基可以是双环的，例如但不限于5,5元环，如六氢环戊并[c]吡咯-2(1h)-基环，或者5,6元双环，如六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1h)-基环。杂环基可以是部分不饱和的，即它可以包含一个或多个双键，例如但不限于2,5-二氢-1h-吡咯基、4h-[1,3,4]噻二嗪基、1,2,3,5-四氢噁唑基或4h-[1,4]噻嗪基，或者，它可以是苯并稠合的，例如但不限于二氢异喹啉基。所述3-12元的含氮杂环基与其它基团相连构成本公开的化合物时，可以为3-12元的含氮杂环基上的n原子与母核相连，碳原子与其它基团相连。例如当3-12元的含氮杂环基选自哌嗪基时，可以为哌嗪基上的氮原子与母核相连。或当3-12元的含氮杂环基选自哌啶基时，可以为哌啶基环上的氮原子与母核相连。
[0141]
术语“螺环”是指两个环共用1个成环原子的环系。
[0142]
术语“并环”是指两个环共用2个成环原子的环系。
[0143]
术语“桥环”是指两个环共用3个以上成环原子的环系。
[0144]
术语“c
6-14
芳基-c
1-10
烷基”指被c
6-14
芳基取代的c
1-10
烷基，连接位点在c
1-10
烷基。
[0145]
术语“5-14元杂芳基-c
1-10
烷基”指被5-14元杂芳基取代的c
1-10
烷基，连接位点在c
1-10
烷基。
[0146]
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(稠合多环是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至10元，例如苯基和萘基。所述芳基环包括如本文中所述的芳基环稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，其非限制性实例包括：
[0147][0147]
芳基可以是取代的或未取代的。
[0148]
术语“杂芳基”指包含1至4个(例如1、2、3和4个)杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元(例如5、6、7、8、9或10元)，更优选为5元或6元，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、n-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基等。所述杂芳基环包括如本文中所述的杂芳基稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：
[0149][0149]
杂芳基可以是取代的或未取代的。
[0150]
本文中的术语“烷基”、“烷氧基”、“环烷基”、“杂环基”、“芳基”和“杂芳基”等可以是取代的或未取代的；当被取代时，其可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选独立地任选选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个相同或不同的取代基。
[0151]
本公开中所述化合物的药学上可接受的盐可为无机盐或有机盐，如果这些化合物具有碱性中心，则其可以形成酸加成盐；如果这些化合物具有酸性中心，则其可以形成碱加成盐；如果这些化合物既包含酸性中心(例如羧基)又包含碱性中心(例如氨基)，则其还可以形成内盐。
[0152]
本公开化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。例如顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(r)-和(s)-对映体、非对映异构体、(d)-异构体、(l)-异构体，外消旋混合物和其他混合物，以及对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本公开的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本公开的范围之内。
[0153]
本公开所述化合物的化学结构中，键表示未指定构型，表示绝对构型，即如果化学结构中存在手性异构体，键可以为或者同时包含两种构型，表示存在轴手性。
[0154]
键表示未指定构型，包括顺式(e)或反式(z)构型。
[0155]
另外，本公开的化合物和中间体还可以以不同的互变异构体形式存在，并且所有这样的形式包含于本公开的范围内。“互变异构体”是指可经由低能垒互变的不同能量的结构异构体。例如，质子互变异构体(也称为质子转移互变异构体)包括经由质子迁移的互变，如酮-烯醇异构化、亚胺-烯胺异构化和内酰胺-内酰亚胺异构化。本公开中的所有化合物的所有的互变异构形式均在本公开的范围内。用单一方式命名的化合物的名称不排除任何互变异构体。
[0156]
本公开还包括一些与本文中记载的结构相同的，但一个或多个原子被原子量或质量数不同于自然中通常发现的原子量或质量数的原子置换的同位素标记的本公开化合物。可结合到本公开化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，诸如分别为2h、3h、
11
c、
13
c、
14
c、
13
n、
15
n、
15
o、
17
o、
18
o、
31
p、
32
p、
35
s、
18
f、
123
i、
125
i和
36
cl等。本公开的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本公开的范围之内。
[0157]
除另有说明，当一个位置被特别地指定为氘(d)时，该位置应理解为具有大于氘的天然丰度(其为0.015％)至少1000倍的丰度的氘(即，至少10％的氘掺入)。示例中化合物的具有大于氘的天然丰度可以是至少1000倍的丰度的氘、至少2000倍的丰度的氘、至少3000倍的丰度的氘、至少4000倍的丰度的氘、至少5000倍的丰度的氘、至少6000倍的丰度的氘或
更高丰度的氘。与碳原子连接的各个可用的氢原子可独立地被氘原子替换。本领域技术人员能够参考相关文献合成氘化形式的化合物。在制备氘代形式的化合物时可使用市售的氘代起始物质，或它们可使用常规技术采用氘代试剂合成，氘代试剂包括但不限于氘代硼烷、三氘代硼烷四氢呋喃溶液、氘代氢化锂铝、氘代碘乙烷和氘代碘甲烷等。
[0158]
本公开的“治疗有效量”是指研究人员、兽医、医师或其它临床医师等在组织、系统、动物、个体或人中寻找的引起生物学或医学反应的活性化合物或药物的量，它包括以下一项或多项：(1)预防疾病：例如在易感染疾病、紊乱或病症但尚未经历或出现疾病病理或症状的个体中预防疾病、紊乱或病症。(2)抑制疾病：例如在正经历或出现疾病、紊乱或病症的病理或症状的个体中抑制疾病、紊乱或病症(即阻止病理和/或症状的进一步发展)。(3)缓解疾病：例如在正经历或出现疾病、紊乱或病症的病理或症状的个体中缓解疾病、紊乱或病症(即逆转病理和/或症状)。针对药物或药理学活性剂而言，“治疗有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。
[0159]
本公开“药学上可接受的”是指这些化合物、材料、组合物和/或剂型，在合理的医学判断范围内，适用于与患者组织接触而没有过度毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症，具有合理的获益/风险比，并且对预期的用途是有效。
[0160]
本公开的“患者”是指包括哺乳动物在内的任何动物，优选小鼠、大鼠、其它啮齿类动物、兔、狗、猫、猪、牛、羊、马或灵长类动物，最优选人。
具体实施方式
[0161]
下文将结合具体实施例对本公开的技术方案做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本公开，而不应被解释为对本公开保护范围的限制。凡基于本公开上述内容所实现的技术均涵盖在本公开旨在保护的范围内。
[0162]
除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。
[0163]
化合物的结构是通过核磁共振(nmr)或/和质谱(ms)来确定的。nmr位移(δ)以10-6
(ppm)的单位给出。nmr的测定是用bruker ascend
tm-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(dmso-d6)、氘代氯仿(cdcl3)、氘代甲醇(cd3od)，内标为四甲基硅烷(tms)。
[0164]
ms的测定用agilent 6110，agilent 1100，agilent 6120，agilentg6125b液相质谱联用仪。
[0165]
hplc的测定使用岛津hplc-2010c高效液相色谱仪(xbridge 2.1*50mm,3.5um色谱柱)。
[0166]
手性hplc分析测定使用tharsfc x5。
[0167]
薄层层析硅胶板使用烟台青岛gf254硅胶板，薄层色谱法(tlc)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
[0168]
柱层析一般使用青岛海洋硅胶200～300目硅胶为载体。
[0169]
高效液相制备使用waters 2767、waters 2545、和创新恒通lc3000制备型色谱仪。
[0170]
手性制备柱层析使用，shimadzu lc-20ap、tharsfc prep 80。
[0171]
combiflash快速制备仪使用combiflash rf200(teledyne isco)。
[0172]
加压氢化反应使用北京佳维科创科技gcd-500g型氢气发生器。
[0173]
微波反应使用biotage initiator+型微波反应器。
[0174]
实验例中如无特殊说明，反应均在氩气氛或者氮气氛下进行。
[0175]
氩气氛或者氮气氛是指反应瓶连接一个约1升容积的氩气或者氮气气球。
[0176]
氢气氛是指反应瓶连接一个约1升容积的氢气气球。
[0177]
实验例中如无特殊说明，反应温度均为室温，温度范围是20℃-30℃。
[0178]
中间体化合物a-5的合成
[0179][0180]
第一步：化合物a-5b的合成
[0181]
将氯化亚砜(22.43g,188.5mmol)缓慢滴加到化合物a-5a(20.00g,125mol)的乙醇(60ml)溶液中，反应混合物在60℃下进行3小时。反应结束后，反应液直接减压浓缩除去溶剂后得到化合物a-5b(20.00g)粗品，该粗品直接用于下一步反应。
[0182]
ms m/z(esi):187.9[m+1]
+
。
[0183]
第二步：化合物a-5c的合成
[0184]
将化合物a-5b(16.00g,85.6mmol)溶于乙醇(60ml)中，再将硼氢化钠(6.48g,171.2mmol)在0℃分批缓慢加入溶液中。将所得混合物在室温下搅拌3小时。反应结束后，减压浓缩除去溶剂，所得残余物通过硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:5)纯化得到化合物a-5c(16.00g,收率：73.5％)。
[0185]
ms m/z(esi):146.1[m+1]
+
。
[0186]
第三步:化合物a-5的合成
[0187]
在室温下，将氯化亚砜(1.77g,0.015mol)缓慢加入到化合物a-5c(1.80g,0.012mol)和n,n-二甲基甲酰胺(5滴)的二氯甲烷(50ml)溶液中，反应在室温下进行1小时。反应结束后，向反应液中加入氯化铵溶液(100ml,4m)调节ph值至中性，然后加入水(20ml)并用二氯甲烷(10ml
×
3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥并过滤，过滤液减压浓缩除去溶剂，所得残余物经柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:0～5:1)纯化得到化合物a-5(1.80g,收率：84.68％)。
[0188]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.35(d,j＝2.4hz,1h),7.26(ddd,j＝9.1,8.0,2.6hz,1h),4.72(d,j＝2.1hz,2h).
[0189]
化合物a的合成
[0190][0191]
第一步：化合物a-2的合成
[0192]
在-78℃，将双(三甲基硅基)胺基锂的四氢呋喃溶液(141ml,141mmol)慢慢加入到化合物a-1(20g,141mmol)的四氢呋喃(500ml)溶液中，反应液在-78℃搅拌1小时后再慢慢滴加乙酰氯(6.6g,844mmol)，得到的混合物在-78℃继续搅拌1小时。反应结束后，反应液缓慢倒入饱和氯化铵水溶液中(500ml),用乙酸乙酯萃取(300ml
×
3)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤(300ml
×
2)，无水硫酸钠干燥并过滤，过滤液减压浓缩，所得残余物用柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:0～2:1)纯化得到化合物a-2(6.6g,收率：30％)。
[0193]
ms m/z(esi):185.1[m+1]
+
。
[0194]
第二步：化合物a-4的合成
[0195]
将化合物a-2(8.98g,48.7mmol)和化合物a-3(4.63g,32.5mmol)的1,4-二氧六环(150ml)溶液加热至90℃并搅拌3.5小时。反应液自然冷却至室温后，加入甲磺酸(3.12g,32.5mmol)，然后反应加热至50℃继续搅拌3小时。反应结束后，反应混合液自然冷却到室温并过滤，滤饼收集后干燥得到化合物a-4(5.60g，收率：69％)。
[0196]
ms m/z(esi):251.0[m+1]
+
。
[0197]
第三步：化合物a-6的合成
[0198]
将化合物a-5(4.01g,24.6mmol)加到化合物a-4(5.60g,22.3mmol)，碳酸钾(7.69g,55.7mmol)和18-冠-6(1.18g,4.4mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(80ml)混合液中，反应在室温搅拌16小时。反应结束后，反应液倒入水中(100ml),用乙酸乙酯萃取(80ml
×
3)。合并的有机相用食盐水洗涤(20ml
×
3)，无水硫酸钠干燥并过滤，过滤液减压浓缩得到化合物a-6(8.40g,收率80％)粗品，该粗品直接用于下一步反应。
[0199]
ms m/z(esi):378.0[m+1]
+
。
[0200]
第四步：化合物a-8的合成
[0201]
将双三苯基膦二氯化钯(1.56g,2.22mmol)加到化合物a-6(8.4g,22.2mmol)和三丁基(1-乙氧基乙烯)锡(化合物a-7)(10.21g,24.2mmol)的1,4-二氧六环(100ml)溶液中，反应液加热到130℃并搅拌4小时。然后反应液过滤，滤液直接减压浓缩，残余物中加入四氢呋喃(100ml)溶解，再滴入5ml浓盐酸并搅拌1小时。反应结束后，反应液减压浓缩，所得残余物经柱层析(乙酸乙酯)纯化得到化合物a-8(5g,收率：60％)。
[0202]
ms m/z(esi):386.0[m+1]
+
。
[0203]
第五步：化合物a-9的合成
[0204]
将醋酸(2ml)滴加到化合物a-8(5g,13mmol)和n-氯代丁二酰亚胺(1.90g,14.3mmol)的异丙醇(100ml)溶液中，反应在60℃条件下搅拌16小时。反应结束后，反应液减压浓缩，所得残余物用柱层析(乙酸乙酯)纯化得到化合物a-9(3.60g,收率：70％)。
[0205]
ms m/z(esi):420.0[m+1]
+
。
[0206]
第六步：化合物a的合成
[0207]
将n，n-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(0.85g,7.2mmol)加入到化合物a-9(1.30g,3.1mmol)的n，n-二甲基甲酰胺(15ml)溶液中，反应混合物在100℃条件下搅拌3小时。反应结束后，反应混合液倒入水中(50ml),用乙酸乙酯萃取(30ml
×
3)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤(30ml
×
3)，无水硫酸钠干燥并过滤，过滤液减压浓缩，所得残余物用柱层析(二氯甲烷:甲醇＝1:0～50:1)纯化得到化合物a(900mg,收率：78％)。
[0208]
ms m/z(esi):474.9[m+h]
+
。
[0209]
中间体化合物b的合成：
[0210][0211]
第一步：化合物b-2的合成
[0212]
将叠氮磷酸二苯酯(23.5g,0.085mol)加入到化合物b-1(10g,0.057mol)和三乙胺(17.3g,0.17mol)的叔丁醇/甲苯(50ml/50ml)的混合溶液中，反应混合物在110℃进行16小时。反应结束后，将反应液倒入水中，用二氯甲烷(200ml
×
3)萃取。合并的有机相用水(30ml)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤，过滤液减压浓缩除去溶剂，所得残余物通过硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:0～10:1)纯化得到化合物b-2(3.6g，收率：25％)。
[0213]
ms m/z(esi):247.0[m+1]
+
。
[0214]
第二步：化合物b-3的合成
[0215]
将化合物b-2(3.6g,14.5mol)加入到三氟乙酸/二氯甲烷(15ml/30ml)的混合溶液中，反应混合物在室温下搅拌16小时。反应结束后，反应液减压浓缩除去溶剂，所得残余物经柱层析(二氯甲烷:甲醇＝1:0～20:1)纯化得到化合物b-3粗品(3.1g)。
[0216]
ms m/z(esi):147.0[m+1]
+
。
[0217]
第三步：化合物b-4的合成
[0218]
将硫酸银(6.61g,0.02mol)和碘(5.38g,0.02mol)加入到化合物b-3(3.1g,0.02mol)的乙醇(50ml)溶液中，反应混合物在50℃条件下搅拌16小时。反应结束后，反应液减压浓缩除去溶剂，得到的残余物通过硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝1:0～10:1)纯化得到化合物b-4(4.9g,收率：65％)。ms m/z(esi):272.7[m+1]
+
。
[0219]
第四步：化合物b-6的合成
[0220]
在氮气保护下，将甲基硼酸(530mg,8.8mmol)，碳酸铯(8.96g,27.5mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(450mg,0.55mmol)依次加入到化合物b-4(1.5g,5.5mmol)的1，4-二氧六环(30ml)溶液中，反应混合物在100℃进行1.5小时。反应结束后，向反应液中加入碳酸氢钠水溶液进行稀释，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥并过滤，过滤液减压浓缩除去溶剂，所得残余物通过硅胶柱层析法(石油醚:乙酸乙酯＝2:3)纯化得到化合物b-6(0.43g,收率：48％)。
[0221]
ms m/z(esi):161.0[m+1]
+
。
[0222]
第五步：化合物b-7的合成
[0223]
将化合物b-6(1.20g,6.88mmol)加入到化合物a-2(850mg,5.29mmol)的无水1，4-二氧六环(8ml)溶液中，反应加热到110℃并在该温度下搅拌1小时。反应液自然降温至50℃后，加入甲基磺酸(285mg,2.96mmol)，然后反应在50℃继续进行1小时。反应结束后，向反应液中加入水(50ml)进行稀释，用乙酸乙酯萃取(100ml
×
3)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤，过滤液通过减压浓缩除去溶剂，所得残余物通过硅胶柱层析(二氯甲烷)纯化得到化合物b-7(530mg,收率：66％)。
[0224]
ms m/z(esi):269.0[m+1]
+
。
[0225]
第六步：化合物b-8的合成
[0226]
将碳酸钾(1.14g,8.28mmol)，18-冠-6(175mg,0.66mmol)加入到化合物a-5(702mg,4.30mmol)和化合物b-7(890mg,3.31mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(15ml)溶液中，反应加热到40℃并在该温度下搅拌16小时。反应结束后，反应液冷却至室温，加入水(50ml)进行稀释，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(10ml)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤，过滤液通过减压浓缩得到化合物b-8(1.5g,纯度：84％,收率：96％)粗品，该粗品直接用于下一步反应。
[0227]
ms m/z(esi):395.8[m+1]
+
。
[0228]
第七步:化合物b-9的合成
[0229]
将化合物a-7(2.01g,5.55mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(257mg,0.37mmol)加入到化合物b-8(1.45g,3.70mmol)的1，4-二氧六环(20ml)溶液中，反应在130℃搅拌1.5小时。反应结束后，反应液直接减压浓缩得到化合物b-9(3.90g)粗品，该粗品直接用于下一步。
[0230]
ms m/z(esi):431.9[m+1]
+
。
[0231]
第八步:化合物b-10的合成
[0232]
将化合物b-9(1.45g,3.40mmol)加入到四氢呋喃(15ml)和浓盐酸(0.50ml)溶液中，反应在室温搅拌1小时。反应结束后，将反应液减压浓缩除去溶剂，所得残余物通过硅胶
柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝3:2)纯化得到b-10(910mg,收率：66％)。
[0233]
ms m/z(esi):403.9[m+1]
+
。
[0234]
第九步：化合物b-11的合成
[0235]
将n-氯代丁二酰亚胺(330mg,2.48mmol)和冰醋酸(0.20ml)依次加入到化合物b-10(910mg,2.25mmol)的异丙醇(12ml)溶液中，反应在60℃搅拌3小时。反应结束后，反应液减压浓缩除去溶剂，所得残余物通过硅胶柱层析法(乙酸乙酯)纯化得到化合物b-11(1.13g)。
[0236]
ms m/z(esi):437.8[m+1]
+
。
[0237]
第十步：化合物b的合成
[0238]
将n,n-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(600mg,5.0mmol)加入到化合物b-11(1.08g,2.5mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(15ml)溶液中，反应在100℃条件下搅拌3小时。反应结束后，反应液自然冷却至室温，加入水(50ml)稀释，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤，过滤液减压浓缩除去溶剂，得到的残余物通过硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)纯化得到化合物b(900mg,收率：72％)。
[0239]
ms m/z(esi):492.7[m+1]
+
。
[0240]
实施例1化合物2，2-p1和2-p2的合成
[0241][0242]
第一步：化合物2-3的合成
[0243]
将化合物2-1(300mg,2.42mmol)，化合物2-2(753mg,2.42mmol)和n,n-二异丙基乙胺(627mg,4.85mmol)溶于乙腈(15ml)中，室温搅拌12小时。反应完成后，反应液减压浓缩，所得残余物经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:0～4:1)纯化得到化合物2-3(620mg,收率：77.3％)。
[0244]
ms m/z(esi):330.0[m+1]
+
。
[0245]
第二步：化合物2-4的合成
[0246]
室温下，将氯化氢的1,4-二氧六环溶液(1.9ml,4m)缓慢加入化合物2-3(500mg,1.52mmol)的二氯甲烷(10ml)中，室温反应12小时。反应结束后，减压浓缩除去溶剂，得到化合物2-4(200mg,粗品)。该粗品直接进行下一步反应。ms m/z(esi):130.1[m+1]
+
。
[0247]
第三步：化合物2的合成
[0248]
将化合物a(100mg,0.21mmol)，化合物2-4(70mg,0.42mmol)和碳酸钾(87mg,0.63mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(10ml)中，反应混合物加热至90℃搅拌16小时。反应结束后，加水(30ml)稀释，乙酸乙酯萃取(20ml
×
3)。合并有机相，用饱和食盐水洗涤(20ml
×
2)，无水硫酸钠干燥并过滤，过滤液减压浓缩，所得残余物经高效液相制备色谱(色谱柱：gemini-c18,150
×
21.2mm，5μm；流动相：乙腈-水(0.1％甲酸)；梯度：30-70％；柱温：25℃；流速：14ml/min；波长：214nm；柱压：80bar)纯化得到化合物2(40mg,收率35.0％)。
[0249]
ms m/z(esi):540.8[m+1]
+
；1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.84(s,1h),8.48(dd,j＝12.2,4.1hz,2h),8.41(s,1h),7.83
–
7.72(m,2h),6.79(s,1h),5.51(d,j＝1.8hz,2h),4.20
–
4.11(m,4h),2.17(d,j＝3.7hz,3h),1.99(s,3h),1.55(s,3h)。
[0250]
将化合物a(300mg，0.63mmol)，化合物2-4(314mg，1.89mmol)和碳酸钾(175mg，1.26mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(10ml)溶液中，反应混合物加热至90℃搅拌16小时。反应结束后，反应液加水(30ml)稀释，乙酸乙酯萃取(20ml
×
3)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤(20ml
×
2)，无水硫酸钠干燥并过滤，过滤液减压浓缩，残余物经硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝1/0～20/1)纯化得到粗品化合物2，粗品化合物2经超临界流体手性色谱((设备：sfc thar prep 80,柱子：chiralpak whelk-01 250mm*21.1mm，5μm，流动相：40％meoh/co2(nh4oh 0.2％)，总流速：40g/min)拆分得到化合物2-p1(29.1mg，收率8.5％)和化合物2-p2(40.2mg，收率11.7％)。
[0251]
化合物2-p1:
[0252]
esi-ms[m+h]
+
:541.2。sfc：保留时间＝4.84min；1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.69(s,1h),8.42(d,j＝5.2hz,1h),8.39(d,j＝2.4hz,1h),8.30(s,1h),7.61(d,j＝5.2hz,1h),7.32(ddd,j＝9.0,8.0,2.4hz,1h),6.33(s,1h),5.38(t,j＝2.2hz,2h),4.15
–
4.03(m,4h),2.12(s,3h),1.83(s,3h),1.54(s,3h)。
[0253]
化合物2-p2:
[0254]
esi-ms[m+h]
+
:541.0。sfc：保留时间＝6.79min；1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.71(s,1h),8.42(d,j＝5.3hz,1h),8.39(d,j＝2.4hz,1h),8.24(s,1h),7.62(d,j＝5.3hz,1h),7.32(ddd,j＝9.0,8.0,2.4hz,1h),6.35(s,1h),5.39(s,2h),4.12(dt,j＝15.3,6.2hz,4h),2.14(s,3h),1.87(s,3h),1.55(s,3h)。
[0255]
实施例2化合物6的合成
[0256][0257]
第一步：化合物6-2的合成
[0258]
将s-甲基异硫脲硫酸盐(799mg,4.25mol)加入化合物6-1(500mg,5.74mol)的水溶液(5ml)中,反应混合物在90℃下搅拌1小时。反应结束后，将反应混合物减压浓缩，残余物经乙醇洗涤后得到化合物6-2(900mg,收率：92.80％)。
[0259]
ms m/z(esi)：130.2[m+1]
+
。
[0260]
第二步：化合物6的合成
[0261]
将化合物6-2(383mg,1.68mmol)和碳酸钾(233mg,1.68mmol)加入化合物a(200mg,0.42mmol)的n，n-二甲基甲酰胺(5ml)溶液中，反应混合物在60℃下搅拌16小时。反应结束后，加水(50ml)稀释，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(50ml)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤，过滤液减压浓缩，残余物经过高效液相制备色谱(色谱柱：gemini-c18，150
×
21.2mm，5μm；流动相：乙腈-水(0.1％甲酸)；梯度：25-50％；柱温：25℃；流速：14ml/min；波长：214nm；柱压：80bar)纯化得到化合物6(60mg，收率：26.3％)。
[0262]
ms m/z(esi)：541.2[m+1]
+
；1h nmr(400mhz,dmso-d6)：δ8.80(s,1h),8.61(d,j＝2.3hz,1h),8.52(d,j＝5.0hz,1h),8.28(s,1h),8.14-8.06(m,1h),7.51(d,j＝5.0hz,1h),6.83(s,1h),5.49(d,j＝1.2hz,2h),5.05-4.82(m,1h),4.50-4.25(m,1h),3.82-3.45(m,4h),2.10-1.85(m,8h)。
[0263]
实施例3化合物10的合成
[0264][0265]
将碳酸钾(87.32mg,0.63mmol)，化合物10-2(54.4mg,0.42mmol)加入到化合物a(100mg,0.21mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(10ml)溶液中，反应混合物在90℃下搅拌反应12小时。反应结束后，加水(50ml)稀释，乙酸乙酯萃取(50ml
×
3)，合并有机相，用饱和食盐水洗(50ml
×
3)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩除去溶剂，残余物经高效液相制备色谱(色谱柱：xbridge-c18；150
×
21.2mm，5μm；柱温：25℃；流速：20ml/min；波长：214nm；柱压：80bar；流动项：乙腈-水(0.1％甲酸)；梯度：40-60％)纯化得到化合物10(30.5mg,收率：25.4％)。
[0266]
ms m/z(esi)：540.8[m+1]
+
；1h nmr(400mhz,cd3od)：δ8.74(s,1h),8.48(d,j＝5.1hz,1h),8.44(d,j＝2.3hz,1h),8.25(s,1h),7.75-7.68(m,1h),7.58(d,j＝5.1hz,1h),6.80(s,1h),5.48(d,j＝1.5hz,2h),3.85-3.78(m,4h),3.76-3.68(m,4h),2.13(s,3h),2.03(s,3h)。
[0267]
实施例4化合物11的合成
[0268][0269]
第一步：化合物11-2的合成
[0270]
将化合物11-1(1g,9.90mmol)，s-甲基异硫脲硫酸盐(0.93g,4.95mmol)，溶于水(15ml)中，反应混合物于90℃下搅拌1小时。加入乙醇(20ml)搅拌30分钟，过滤，滤饼干燥得
化合物11-2(0.88g，收率：74.1％)。
[0271]
ms m/z(esi):144.1[m+h]
+
。
[0272]
第二步：化合物11的合成
[0273]
将化合物a(119mg,0.25mmol)，化合物11-2(200mg,1.40mmol)，碳酸钾(116mg,0.84mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(5ml)溶液中，90℃搅拌12小时反应结束后，加入水(10ml)，用乙酸乙酯萃取(20ml
×
3)，合并有机相，饱和食盐水(30ml)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤，滤液减压浓缩后经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝1:0～10:1)纯化得到粗品，粗品经高效液相制备色谱(色谱柱：gemini-c18；150
×
21.2mm，5μm；流动相：乙腈-水(0.1％甲酸)；梯度：30-70％；柱温：25℃；流速：20ml/min；波长：214nm；柱压：80bar)纯化得化合物11(37mg,收率：26.7％)。
[0274]
ms m/z(esi):555.2[m+1]
+
；1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.78(s,1h),8.49
–
8.46(m,2h),8.29(s,1h),7.78
–
7.72(m,1h),7.56(d,j＝5.1hz,1h),6.84(s,1h),5.53(d,j＝1.9hz,2h),4.54(d,j＝13.7hz,2h),3.93
–
3.84(m,1h),3.36(s,1h),3.31(s,1h),2.17(s,3h),2.07(s,3h),1.98
–
1.90(m,2h),1.50(d,j＝10.7hz,2h)。
[0275]
实施例5化合物12、12-p1和12-p2的合成
[0276][0277]
第一步：化合物12-2的合成
[0278]
室温下，将s-甲基异硫脲硫酸盐(351mg,1.86mmol)加入化合物12-1(430mg,3.73mmol)的水溶液(5.0ml)中。反应混合物在90℃下搅拌1小时。反应混合物减压浓缩，得到化合物12-2(600mg,粗品)。产物不经纯化直接进行下一步反应。
[0279]
ms m/z(esi):158.1[m+1]
+
。
[0280]
第二步：化合物12-p1和12-p2的合成
[0281]
将化合物12-2(559mg,2.19mmol)，化合物a(260mg,0.55mmol)和碳酸钾(302mg,2.19mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(15ml)溶液加热至60℃，反应12小时。反应混合物加水(20ml)稀释，乙酸乙酯萃取(20ml
×
3)。合并有机相，用饱和食盐水洗涤(20ml
×
3)，无水硫酸钠干燥并过滤，过滤液减压浓缩，所得残余物经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝1:0～10:1)纯化得到含量为80％的粗品。该粗品经高效液相制备色谱(色谱柱：gemini-c18；150
×
21.2mm，5μm；流动相：乙腈-水(0.1％甲酸)；梯度：30-60％；柱温：25℃流速：14ml/min；波长：214nm；柱压:80bar)纯化得到化合物12(45mg,收率：14.3％)。
[0282]
ms m/z(esi):569.1[m+h]
+
；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.80(s,1h),8.62(d,j＝2.3hz,1h),8.51(d,j＝5.0hz,1h),8.28(s,1h),8.14
–
8.08(m,1h),7.49(d,j＝5.0hz,1h),6.83(s,1h),5.48(s,2h),4.39(s,1h),4.28(d,j＝12.3hz,2h),3.50
–
3.42(m,2h),2.06(s,3h),1.95(s,3h),1.52
–
1.43(m,4h),1.15(s,3h)。
[0283]
化合物12经过超临界流体制备色谱(设备：sfc thar prep 80；柱子：chiralpak ad-h，250mm
×
20mm，5μm；流动相：40％乙醇(乙醇/二氧化碳，0.2％的氨水)；流速：12.5g/min)拆分得到化合物12-p1(15.4mg)和化合物12-p2(15.8mg)。
[0284]
化合物12-p1：
[0285]
ms m/z(esi):568.8[m+1]
+
；sfc：保留时间＝3.50min；1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.73(s,1h),8.43(t,j＝4.1hz,2h),8.24(s,1h),7.75
–
7.67(m,1h),7.50(d,j＝5.1hz,1h),6.79(s,1h),5.48(d,j＝1.8hz,2h),4.33
–
4.24(m,2h),3.54(ddd,j＝13.5,10.1,3.8hz,2h),2.13(s,3h),2.02(s,3h),1.63-1.54(m,4h),1.22(s,3h)。
[0286]
化合物12-p2：
[0287]
ms m/z(esi):568.8[m+1]
+
；sfc：保留时间＝5.76min；1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.66(s,1h),8.36(dd,j＝5.2,3.7hz,2h),8.17(s,1h),7.67
–
7.59(m,1h),7.43(d,j＝5.1hz,1h),6.72(s,1h),5.40(d,j＝1.8hz,2h),4.21(dd,j＝13.5,4.5hz,2h),3.53
–
3.43(m,2h),2.05(s,3h),1.95(s,3h),1.56
–
1.47(m,4h),1.15(s,3h)。
[0288]
实施例6化合物13的合成
[0289][0290]
第一步：化合物13-2的合成
[0291]
将13-1(1g,7.8mmol)和s-甲基异硫脲硫酸盐(730mg,3.90mmol)的水溶液(50ml)加热至90℃，搅拌1小时。反应液减压浓缩，所得残余物中加入20ml乙醇，搅拌30分钟，过滤，滤饼干燥得化合物13-2(0.5g,收率：36％)。
[0292]1h nmr(400mhz,cd3od)δ3.76
–
3.68(m,4h),3.67
–
3.52(m,4h),2.15(d,j＝7.8hz,3h)。
[0293]
第二步：化合物13的合成
[0294]
将化合物a(100mg,0.21mmol),化合物13-2(72mg,0.42mmol)和碳酸钾(58mg,0.42mmol)的n，n-二甲基甲酰胺(10ml)溶液加热至90℃搅拌12小时。反应混合物加水(50ml)稀释，二氯甲烷萃取(30ml
×
3)。合并有机相，用饱和食盐水洗涤(20ml
×
2)，无水硫酸钠干燥并过滤，过滤液减压浓缩，所得残余物经高效液相制备色谱(色谱柱：gemini-c18，150
×
21.2mm，5μm；流动相：乙腈-水(0.1％三氟乙酸)；梯度：30-50％，柱温：25℃；流速:14ml/min；波长:214nm；柱压:80bar)纯化得到化合物13(14.9mg,收率：12.2％)。ms m/z
(esi):582.1[m+h]
+
；1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.80(s,1h),8.54(d,j＝5.2hz,1h),8.49(d,j＝2.4hz,1h),8.36(s,1h),7.76(ddd,j＝9.6,8.6,2.4hz,1h),7.67(d,j＝5.2hz,1h),6.84(s,1h),5.53(d,j＝1.9hz,2h),4.03
–
3.96(m,2h),3.96
–
3.89(m,2h),3.73
–
3.62(m,4h),2.19(s,3h),2.17(s,3h),2.07(s,3h)。
[0295]
实施例7化合物33、33-p1和33-p2的合成
[0296][0297]
第一步：化合物33-2的合成
[0298]
将化合物33-1(3.60g,23.75mmol)，化合物2-2(7.37g,23.75mmol,)和n,n-二异丙基乙胺(6.14g,47.50mmol)加入到乙腈(50ml)中，室温搅拌12小时。反应完成后，反应液减压浓缩，所得残余物经硅胶柱层析法(石油醚:乙酸乙酯＝1:0～5:1)纯化得到化合物33-2(7.5g,收率：84.8％)。
[0299]
ms m/z(esi):358.2[m+1]
+
。
[0300]
第二步：化合物33-3的合成
[0301]
室温下，将氯化氢的二氧六环溶液(26ml,4m)缓慢加入化合物33-2(7.5g,21mmol)的二氯甲烷(100ml)溶液中，室温搅拌12小时。反应液减压浓缩得化合物33-3(6g,粗品)。产物不经纯化直接进行下一步反应。
[0302]
ms m/z(esi):158.1[m+1]
+
。
[0303]
第三步：化合物33-4的合成
[0304]
将化合物a(500mg,1.05mmol)，化合物33-3(4.07g,粗品)和碳酸钾(1.45g,10.53mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(10ml)溶液加热至90℃搅拌16小时。反应液加水(30ml)稀释，乙酸乙酯萃取(20ml
×
3)。合并有机相，用饱和食盐水洗涤(20ml
×
2)，无水硫酸钠干燥并过滤，过滤液减压浓缩，所得残余物经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝1:0～20:1)纯化得到化合物33-4(150mg,收率：22.54％)。
[0305]
ms m/z(esi):568.8[m+1]
+
。
[0306]
第四步：化合物33的合成
[0307]
将化合物33-4(150mg,0.27mmol)和氢氧化锂水合物(37mg,0.81mmol)溶于10ml四氢呋喃和水(v:v＝1:1)混合溶剂中，室温下搅拌反应12小时。反应结束后，向反应液中滴加1m的盐酸至ph＝7。过滤，滤饼干燥得粗品。该粗品经高效液相制备色谱(色谱柱：gemini-c18；150
×
21.2mm，5μm；流动相：乙腈-水(0.1％甲酸)；梯度：40-50％；柱温：25℃；流速：
20ml/min；波长：214nm；柱压：80bar)纯化得到化合物33(23.2mg，收率：15.5％)。
[0308]
ms m/z(esi):554.6[m+1]
+
；1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.85(s,1h),8.49(t,j＝4.2hz,2h),8.41(s,1h),7.84(d,j＝5.8hz,1h),7.80
–
7.71(m,1h),6.81(s,1h),5.52(d,j＝1.7hz,2h),4.50(td,j＝9.1,3.3hz,2h),4.42(td,j＝8.9,6.0hz,2h),3.70
–
3.63(m,1h),2.19(s,3h),2.03(s,3h)。
[0309]
取放大批次的化合物33(30mg)经超临界流体手性色谱((设备：sfc thar prep 80,柱子：chiralpak ad-h 250mm*20mm，5μm，流动相：40％ etoh/co2(nh4oh 0.2％),总流速：40g/min)拆分得到化合物33-p1(12.6mg)和化合物33-p2(10.4mg)。
[0310]
化合物33-p1：
[0311]
ms m/z(esi):554.8[m+1]
+
。sfc：保留时间＝3.03min；uv＝254nm。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.81(s,1h),8.61(d,j＝2.3hz,1h),8.54(d,j＝5.1hz,1h),8.23(s,1h),8.14
–
8.07(m,1h),7.61(d,j＝5.1hz,1h),6.82(s,1h),5.48(d,j＝1.1hz,2h),4.31
–
4.08(m,4h),3.51(s,1h),2.07(s,3h),1.93(s,3h)。
[0312]
化合物33-p2：
[0313]
ms m/z(esi):554.8[m+1]
+
。sfc：保留时间＝3.57min；uv＝254nm。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.81(s,1h),8.61(d,j＝2.3hz,1h),8.54(d,j＝5.1hz,1h),8.23(s,1h),8.10(td,j＝9.9,2.3hz,1h),7.61(d,j＝5.1hz,1h),6.82(s,1h),5.48(s,2h),4.29
–
4.15(m,4h),3.50(s,1h),2.07(s,3h),1.95(s,3h)。
[0314]
实施例8化合物35、35-p1和35-p2的合成
[0315]
路线1：
[0316][0317]
将化合物33(150mg,0.27mmol)，甲胺盐酸盐(109mg,1.35mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(155mg,0.81mmol)，1-羟基苯并三唑(110mg,0.81mmol)和三乙胺(82mg,0.81mmol)溶于二氯甲烷(20ml)中，反应混合物在室温下搅拌12小时。反应完成后，加水(10ml)稀释，二氯甲烷萃取(20ml
×
3)。合并有机相，用饱和食盐水洗涤(20ml
×
2)，无水硫酸钠干燥并过滤，过滤液减压浓缩，所得残余物经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝1:0～20:1)纯化得到粗品，将粗品经高效液相制备色谱(色谱柱:gemini-c18 150x 21.2mm，5μm流动项:acn
‑‑
h2o(0.1％fa)，梯度:20-60，温度：45℃；压力：80bar；波长：214/254nm；流速：20ml/min)纯化得到化合物35(2.7mg,收率：1.74％)。
[0318]
ms m/z(esi):567.7[m+1]
+
；1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.79(s,1h),8.50
–
8.45(m,2h),8.26(s,1h),7.75(s,1h),7.68(d,j＝5.2hz,1h),6.83(s,1h),5.52(d,j＝1.9hz,2h),4.34
–
4.25(m,4h),3.96(s,1h),2.78(s,3h),2.17(s,3h),2.06(s,3h)。
[0319]
路线2：
[0320][0321]
第一步：化合物35-2的合成
[0322]
将化合物35-1(1.7g,7.9mmol)加入到氯化氢的1,4-二氧六环溶液(10ml,4m)中，反应混合物室温搅拌4小时。反应结束后，反应液减压浓缩得到化合物35-2(1.5g，粗品)。ms m/z(esi):115.1[m+1]
+
。
[0323]
第二步：化合物35-3的合成
[0324]
将化合物35-2(1.5g,9.96mmol)加入到化合物2-2(3.4g,10.96mmol)和n,n-二异丙基乙胺(2.57g,19.92mmol)的乙腈(30ml)溶液中，反应混合物室温搅拌12小时。反应结束后，反应液减压浓缩，残余物经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:0～3:1)纯化得到化合物35-3(3g，收率：84.5％)。ms m/z(esi):357.0.[m+1]
+
。
[0325]
第三步：化合物35-4的合成
[0326]
将化合物35-3(500mg,1.40mmol)加入到氯化氢的1,4-二氧六环溶液(10ml,4m)中，反应混合物室温搅拌16小时。反应结束后，反应液减压浓缩得到化合物35-4(300mg，粗品)。ms m/z(esi):157.1[m+1]
+
。
[0327]
第四步：化合物35的合成
[0328]
将化合物35-4(300mg,1.92mmol)加入到化合物a(182.43mg,0.38mmol)和碳酸钾(530.94mg，3.84mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(10ml)溶液中，反应混合物在90℃下搅拌12小时，反应结束后，反应液加水(20ml)稀释，用乙酸乙酯萃取(30ml
×
3)，合并的有机相经无水硫酸钠干燥并过滤，过滤液减压浓缩后经硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝1:0～10:1)纯化得到化合物35，化合物35通过超临界流体手性色谱(设备：sfc thar prep 80,柱子：chiralpak ad-h 250mm*20mm，5μm，流动相：40％ etoh/co2(nh4oh 0.2％),总流速：40g/min)拆分得到化合物35-p1(48.6mg，收率4.5％)和化合物35-p2(59.8mg，收率5.5％)。
[0329]
化合物35-p1：
[0330]
ms m/z(esi):568.2[m+1]
+
。sfc：保留时间＝2.76min,uv＝254nm。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.81(s,1h),8.61(d,j＝2.3hz,1h),8.54(d,j＝5.0hz,1h),8.21(s,1h),8.16
–
8.06(m,1h),7.98(d,j＝4.7hz,1h),7.59(d,j＝5.1hz,1h),6.82(s,1h),5.48(s,2h),4.21(t,j＝8.6hz,2h),4.12(dd,j＝14.9,8.7hz,2h),3.41(td,j＝8.5,4.2hz,1h),2.61(d,j＝4.6hz,3h),2.08(s,3h),1.95(s,3h)。
[0331]
化合物35-p2：
[0332]
ms m/z(esi):568.2[m+1]
+
。sfc：保留时间＝3.2min,uv＝254nm。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.81(s,1h),8.61(d,j＝2.3hz,1h),8.54(d,j＝5.1hz,1h),8.21(s,1h),8.15
–
8.08(m,1h),7.98(d,j＝4.6hz,1h),7.59(d,j＝5.1hz,1h),6.82(s,1h),5.49(d,j＝1.1hz,2h),4.21(t,j＝8.5hz,2h),4.12(dd,j＝14.8,8.7hz,2h),3.49
–
3.36(m,1h),2.61(d,j＝4.6hz,3h),2.08(s,3h),1.95(s,3h)。
[0333]
实施例9化合物38的合成
[0334][0335]
第一步：化合物38-2的合成
[0336]
将化合物38-1(500mg,2.17mmol)，甲胺盐酸盐(161mg,2.39mmol)，hatu(o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐)(1.65g,4.34mmol)，n,n-二异丙基乙胺(840mg,6.51mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(10ml)中，氮气保护下在室温搅拌16小时。反应结束后，加水(10ml)稀释，用乙酸乙酯萃取(20ml
×
3)。合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤，过滤液减压浓缩，残余物经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝1:0～20:1)纯化得到化合物38-2(550mg,纯度75％,收率：78.1％)。
[0337]
ms m/z(esi):265.0[m+23]
+
。
[0338]
第二步：化合物38-3的合成
[0339]
将氯化氢的1,4-二氧六环溶液(3ml,4m)加入到化合物38-2(600mg,2.48mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中，室温下搅拌2小时。反应结束后，减压浓缩得到化合物38-3(600mg,粗品)。产物不经纯化直接进行下一步反应。
[0340]
ms m/z(esi):143.1[m+1]
+
。
[0341]
第三步：化合物38-4的合成
[0342]
将化合物38-3(300mg,1.68mmol)，化合物2-2(520mg,1.68mmol)，n,n-二异丙基乙胺(434mg,3.35mmol)溶于乙腈(5ml)中，反应混合物在40℃下搅拌16小时。反应结束后，减压浓缩，残余物经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝1:0～20:1)纯化得到化合物38-4(650mg,收率：80.7％)。
[0343]
ms m/z(esi):385.0[m+1]
+
。
[0344]
第四步：化合物38-5的合成
[0345]
将氯化氢的1,4-二氧六环溶液(3ml,4m)加入到化合物38-4(550mg,1.43mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中，反应液在室温下搅拌12小时。反应结束后，减压浓缩，得到化合物
38-5(500mg,粗品)。产物不经纯化直接进行下一步反应。
[0346]
ms m/z(esi):185.2[m+1]
+
。
[0347]
第五步：化合物38的合成
[0348]
将化合物38-5(264mg,1.20mmol),化合物a(171mg,0.36mmol)和碳酸钾(247mg,1.79mmol)溶于n-n二甲基甲酰胺(10ml)中，在65℃下搅拌16小时。反应结束后，加水稀释(100ml)，用乙酸乙酯萃取(50ml
×
3)。合并有机相，无水硫酸钠干燥并过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:0～2:1)纯化得到粗品，该粗品经高效液相制备色谱(色谱柱：gemini-c18，150
×
21.2mm，5μm；流动相：乙腈-水(0.1％甲酸)；梯度：30-50％；柱温：25℃；流速：20ml/min；波长：214nm；柱压：80bar)纯化得到化合物38(40mg,收率：18.6％)。
[0349]
ms m/z(esi):596.2[m+1]
+
；1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.79(s,1h),8.49(d,j＝3.1hz,1h),8.48(s,1h),8.31(s,1h),7.79
–
7.71(m,1h),7.60(d,j＝5.2hz,1h),6.84(s,1h),5.52(d,j＝1.9hz,2h),2.99(t,j＝12.3hz,3h),2.73(s,3h),2.55
–
2.45(m,1h),2.18(s,3h),2.07(s,3h),1.86(d,j＝10.8hz,2h),1.68(dd,j＝25.0,12.4hz,3h)。
[0350]
实施例10化合物41、41-p1和41-p2的合成
[0351][0352]
第一步：化合物41-2的合成
[0353]
将化合物41-1(400mg,2.33mmol)，化合物2-2(723mg,2.33mmol,)和n,n-二异丙基乙胺(602mg,4.66mmol)溶于乙腈(20ml)中，反应液室温搅拌12小时。反应完成后，减压浓缩，所得残余物经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:0～4:1)纯化得到化合物41-2(600mg,收率：64.8％)。
[0354]
ms m/z(esi):377.9[m+1]
+
。
[0355]
第二步：化合物41-3的合成
[0356]
将氯化氢的1,4-二氧六环溶液(1.7ml,4m)缓慢加入化合物41-2(500mg,1.32mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中。反应液室温搅拌12小时，反应完成后，反应液减压浓缩得化合物41-3(220mg,粗品)。产物不经纯化直接进行下一步反应。
[0357]
ms m/z(esi):178.0[m+1]
+
。
[0358]
第三步：化合物41的合成
[0359]
将化合物a(150mg,0.31mmol)，化合物41-3(135mg,粗品)和碳酸钾(128mg,0.93mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(15ml)溶液加热至90℃搅拌16小时。反应完成后，加水(30ml)稀释，乙酸乙酯萃取(20ml
×
3)。合并有机相，用饱和食盐水洗涤(20ml
×
2)，无水硫酸钠干燥并过滤，过滤液减压浓缩，所得残余物经高效液相制备色谱(色谱柱：gemini-c18，150 x 21.2mm，5μm；流动相:乙腈-水(0.1％甲酸)；梯度:20-50％，柱温：25℃流速:14ml/min；波长:214nm；柱压:80bar)纯化得到化合物41(41.6mg,收率21.9％)。
[0360]
ms m/z(esi):588.8[m+1]
+
；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.79(s,1h),8.58(d,j＝2.4hz,1h),8.55(d,j＝5.1hz,1h),8.22(s,1h),8.07(ddd,j＝10.0,9.0,2.4hz,1h),7.64(d,j＝5.1hz,1h),6.80(s,1h),5.45(d,j＝1.5hz,2h),4.45
–
4.21(m,5h),3.02(s,3h),2.04(s,3h),1.92(s,3h)。
[0361]
取放大批次的化合物41经超临界流体手性色谱((设备：sfc thar prep 80,柱子：chiralpak ad-h 250mm*20mm，5μm，流动相：40％ etoh/co2(nh4oh 0.2％),总流速：40g/min)拆分得到化合物41-p1(33.3mg，收率10.5％)和化合物41-p2(29.8mg，收率9.3％)。
[0362]
化合物41-p1:
[0363]
ms m/z(esi):588.7[m+1]
+
。sfc：保留时间＝6.92min,uv＝254nm。1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.68(s,1h),8.42(d,j＝5.2hz,1h),8.36(d,j＝2.4hz,1h),8.20(s,1h),7.68
–
7.58(m,2h),6.71(s,1h),5.40(d,j＝1.9hz,2h),4.42
–
4.29(m,4h),4.29
–
4.22(m,1h),2.90(s,3h),2.06(s,3h),1.93(s,3h)。
[0364]
化合物41-p2:
[0365]
ms m/z(esi):588.7[m+1]
+
。sfc：保留时间＝8.76min,uv＝254nm。1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.68(s,1h),8.42(d,j＝5.2hz,1h),8.36(d,j＝2.3hz,1h),8.20(s,1h),7.69
–
7.59(m,2h),6.71(s,1h),5.40(d,j＝1.8hz,2h),4.43
–
4.30(m,4h),4.26(d,j＝8.2hz,1h),2.89(d,j＝5.7hz,3h),2.06(s,3h),1.93(s,3h)。
[0366]
实施例11化合物45的合成
[0367][0368]
第一步：化合物45-2的合成
[0369]
将化合物45-1(500mg,3.86mmol),化合物2-2(1.2g,3.86mmol)和n,n-二异丙基乙胺(998mg,7.72mmol)溶于乙腈(15ml)中，室温搅拌12小时。反应完成后，反应液减压浓缩，
所得残余物经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:0～4:1)纯化得到化合物45-2(1.2g,收率：88％)
[0370]
ms m/z(esi):335.9[m+1]
+
。
[0371]
第二步：化合物45-3的合成
[0372]
将氯化氢的1,4-二氧六环溶液(1.8ml,4m)加入到化合物45-2(800mg,2.38mmol)的二氯甲烷(15ml)溶液中，室温搅拌12小时。反应完成后，反应液减压浓缩得化合物45-3(200mg,粗品)。产物不经纯化直接进行下一步反应。
[0373]
ms m/z(esi):136.1[m+1]
+
。
[0374]
第三步：化合物45的合成
[0375]
将化合物a(100mg,0.21mmol)，化合物45-3(72mg,0.42mmol)和碳酸钾(87mg,0.63mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(8ml)溶液加热至90℃搅拌16小时。反应混合液加水(30ml)稀释，乙酸乙酯萃取(20ml
×
3)。合并有机相，用饱和食盐水洗涤(20ml
×
2)，无水硫酸钠干燥并过滤，过滤液减压浓缩，所得残余物经高效液相制备色谱(色谱柱：gemini-c18；150
×
21.2mm，5μm；流动相：乙腈-水(0.1％甲酸)；梯度：30-60％；柱温：25℃；流速：14ml/min；波长：214nm；柱压：80bar)纯化得到化合物体45(20.2mg,收率16.6％)。
[0376]
ms m/z(esi):546.8[m+1]
+
；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.83(s,1h),8.62(dd,j＝8.6,3.7hz,2h),8.26(s,1h),8.11(td,j＝10.0,2.3hz,1h),7.74(d,j＝5.1hz,1h),6.84(s,1h),5.50(s,2h),4.56(t,j＝12.5hz,4h),2.09(s,3h),1.96(s,3h)。
[0377]
实施例12化合物34、34-p1和34-p2的合成
[0378][0379]
第一步：化合物34-2的合成
[0380]
将氯甲酸异丁酯(2.7g,19.78mmol)加入到化合物34-1(2.0g,9.88mmol)和n-甲基吗啉(1.5g,14.83mmol)的四氢呋喃(50ml)溶液中，反应混合物在-10℃下搅拌1小时，然后加入氨的甲醇溶液(20ml)，继续搅拌1.5小时。反应结束后，反应液减压浓缩，残余物经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:0～1:1)纯化得到化合物34-2(2.1g，收率：84.41％)。ms m/z(esi):145.1[m+1]
+
。
[0381]
第二步：化合物34-3的合成
[0382]
将氯化氢的1,4-二氧六环溶液(15ml,4m)加入到化合物34-2(2.1g,10.43mmol)的二氯甲烷(15ml)溶液中，反应混合物室温搅拌2小时。反应结束后，反应液减压浓缩得到化
合物34-3(1.5g,收率：86.14％)。ms m/z(esi):101.1[m+1]
+
。
[0383]
第三步：化合物34-4的合成
[0384]
将化合物2-2(3.1g,9.99mmol)加入到化合物34-3(1.0g,9.99mmol)和n,n-二异丙基乙胺(2.58g,19.98mmol)的乙腈(15ml)溶液中，反应混合物室温搅拌12小时。反应结束后，反应液减压浓缩，残余物经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:0～1:1)纯化得到化合物34-4(1.0g，收率：26.32％)。ms m/z(esi):342.9.[m+1]
+
。
[0385]
第四步：化合物34-5的合成
[0386]
将氯化氢的1,4-二氧六环溶液(3ml,4m)加入到化合物34-4(1.0g,2.92mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液中，反应混合物在室温下搅拌2小时。反应结束后，反应液减压浓缩得到化合物34-5(450mg,收率：97.55％)。ms m/z(esi):143.0.[m+1]
+
。
[0387]
第五步：化合物34的合成
[0388]
将化合物34-5(449mg,3.16mmol)加入到化合物a(300mg,0.63mmol)和碳酸钾(523.84mg，3.79mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(5ml)溶液中，反应混合物在90℃下搅拌16小时，反应结束后，反应液减压浓缩，残余物加水(20ml)稀释，用乙酸乙酯萃取(30ml
×
3)，合并的有机相经无水硫酸钠干燥并过滤，过滤液减压浓缩，残余物经硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝1:0～10:1)纯化得到化合物34，化合物34经超临界流体手性色谱((设备：sfc thar prep80,柱子：chiralpak ad-h 250mm*20mm，5μm，流动相：40％ etoh/co2(nh4oh0.2％),总流速：40g/min)拆分得到化合物34-p1(40.5mg，收率11.3％)和化合物34-p2(47.1mg，收率13.1％)。
[0389]
化合物34-p1:
[0390]
ms m/z(esi):[m+1]
+
553.8。sfc：保留时间＝3.81min,uv＝214nm。1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.74(s,1h),8.43(dd,j＝3.8,1.3hz,2h),8.24(s,1h),7.75
–
7.68(m,1h),7.63(d,j＝5.2hz,1h),6.77(s,1h),5.47(d,j＝1.8hz,2h),4.35
–
4.17(m,4h),3.59
–
3.46(m,1h),2.12(s,3h),2.00(s,3h)。
[0391]
化合物34-p2:
[0392]
esi-ms[m+h]
+
:553.8。sfc：保留时间＝4.6min,uv＝214nm。1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.74(s,1h),8.43(dd,j＝3.9,1.1hz,2h),8.24(s,1h),7.75
–
7.67(m,1h),7.63(d,j＝5.2hz,1h),6.77(s,1h),5.47(d,j＝1.6hz,2h),4.35
–
4.18(m,4h),3.59
–
3.46(m,1h),2.13(s,3h),2.00(s,3h)。
[0393]
实施例13化合物29、29-p1和29-p2的合成
[0394][0395]
将化合物2-4(303mg，1.83mmol)加入到化合物b(300mg，0.61mmol)和碳酸钾(168mg，1.22mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(10ml)溶液中，反应混合物加热至90℃搅拌16小时。反应结束后，反应液倒入水中(30ml)，乙酸乙酯萃取(20ml
×
3)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤(20ml
×
2)，无水硫酸钠干燥并过滤，过滤液减压浓缩，残余物经硅胶柱层析(二氯
甲烷/甲醇＝1/0～20/1)纯化得到粗品化合物29，粗品化合物29经超临界流体手性色谱((设备：sfc thar prep 80,柱子：chiralpak ic 250mm*4.6mm，5μm，流动相：40％ meoh/co2(nh4oh 0.2％)，总流速：40g/min)拆分得到化合物29-p1(19.5mg，收率5.7％)和化合物29-p2(22.6mg，收率6.6％)。
[0396]
化合物29-p1：
[0397]
esi-ms[m+h]
+
:559.1。sfc：保留时间＝5.44min,uv＝214nm。1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.63(s,1h),8.44(dd,j＝3.8,1.3hz,2h),7.71(ddd,j＝9.6,8.6,2.4hz,1h),7.27(d,j＝5.1hz,1h),6.85(d,j＝0.5hz,1h),5.49(d,j＝1.9hz,2h),4.09
–
3.91(m,4h),2.19(s,3h),2.10(s,3h),1.51(s,3h)。
[0398]
化合物29-p2：
[0399]
esi-ms[m+h]
+
:559.1。sfc：保留时间＝15.16min,uv＝214nm。1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.63(s,1h),8.44(dd,j＝3.8,1.3hz,2h),7.71(ddd,j＝9.6,8.6,2.4hz,1h),7.32
–
7.21(m,1h),6.85(s,1h),5.49(d,j＝1.9hz,2h),4.10
–
3.93(m,4h),2.19(s,3h),2.10(s,3h),1.51(s,3h)。
[0400]
根据上述实施例，制备如下化合物：
[0401]
[0402]
[0403]
[0404]
[0405]
[0406]
[0407][0408]
生物学评价
[0409]
1.p38 mapk/mk2体外活性的测定
[0410]
化合物对p38 mapk/mk2的抑制作用采用z-lyte激酶检测试剂盒(thermo,pv3177)进行检测。dmso溶解受试化合物至10mm母液，-20℃保存待用。化合物起始浓度为10μm，1％dmso,5倍倍比稀释，8个浓度，双复孔；50mm hepes ph 7.5,10mm mgcl2,0.01％ brij-35,1mm egta作为反应缓冲液用来配置2x active p38a/inactive mk2/ser/thr 4混合液，最终10μl的反应体系在384孔板(corning,4514)中进行，含有500ng/ml inactive mk2(abcam,79910),8ng/ml active p38a(carna,04-152),2μm ser/thr 4；20℃反应1小时后，每孔加入稀释2048倍后的development reagent a，室温孵育1小时后加入5μl终止缓冲溶
液终止反应，酶标仪检测(ex.400nm,em.445nm；ex.400nm,em.520nm)。用graphpad prism 8软件拟合浓度-效应曲线，并计算50％抑制效果的化合物浓度，即ic
50
。结果如表1所示。
[0411]
表1
[0412]
化合物p38 mapk/mk2 ic
50
(nm)化合物24.75化合物2-p10.41化合物610.92化合物1016.59化合物112.68化合物124.69化合物12-p20.55化合物1310.04化合物29-p20.18化合物333.76化合物351.26化合物3831.29化合物413.20化合物45203.70化合物33-p22.11化合物34-p26.33化合物35-p21.24化合物41-p21.06
[0413]
从表1可知，本公开的化合物对p38 mapk/mk2具有良好的抑制活性。
[0414]
2.p38 mapk/mk5体外活性测定
[0415]
化合物对p38 mapk/mk5的抑制作用采用z-lyte激酶检测试剂盒(thermo,pv3177)进行检测。dmso溶解受试化合物至10mm母液，-20℃保存待用。化合物起始浓度为10μm，1％dmso,5倍倍比稀释，8个浓度，双复孔；50mm hepes ph 7.5,10mm mgcl2,0.01％ brij-35,1mm egta作为反应缓冲液用来配置2x active p38a/inactive mk5/ser/thr 4混合液，最终10μl的反应体系在384孔板(corning,4514)中进行，含有10μg/ml inactive mk5(abcam,217826),1ng/ml active p38a(carna,04-152),2μm ser/thr 4；20℃反应4小时后，每孔加入稀释2048倍后的development reagent a，室温孵育1小时后加入5μl终止缓冲溶液终止反应，酶标仪检测(ex.400nm,em.445nm；ex.400nm,em.520nm)。用graphpad prism 8软件拟合浓度-效应曲线，并计算50％抑制效果的化合物浓度，即ic
50
。结果如表2所示。
[0416]
表2
[0417]
化合物p38 mapk/mk5 ic
50
(nm)化合物28443化合物62238化合物10》10000化合物12》10000
化合物133206化合物418746
[0418]
从表2可知，本公开的化合物对p38 mapk/mk5抑制活性均大于2μm。这进一步说明本公开的化合物对p38 mapk/mk2具有良好的选择性。
[0419]
3.p38 mapk/atf2体外活性的测定
[0420]
化合物对p38a催化atf2的抑制作用采用htrf方法进行检测。dmso溶解受试化合物至10mm母液，-20℃保存待用。化合物起始浓度为10μm，0.25％ dmso,5倍倍比稀释，8个浓度，双复孔；40mm tris ph 7.5,20mm mgcl2,0.1mg/ml bsa,50μm dtt作为反应缓冲液用来配置3.5x p38a(mapk14,carna biosciences,04-152)蛋白工作液、3.5x human atf2 protein(sino biological,11599-h20b)工作液和3.5x atp工作液，10mm的edta用来终止反应，最终14μl的反应体系在96孔板(cisbio，66pl96025)中进行，含有0.29ng/μl p38a,0.29μm human atf2protein；25μm atp。20℃反应35min后，每孔加入预先配置好的抗体溶液(cibio,63adk015peg,phospho-atf2 eu cryptate antibody,phospho-atf2 d2 antibody,用detection buffer稀释40倍)室温孵育过夜，酶标仪检测(htrf compatible reader)。用graphpad prism 8软件拟合浓度-效应曲线，并计算50％抑制效果的化合物浓度，即ic
50
。结果如表3所示。
[0421]
表3
[0422][0423][0424]
从表3可知，本公开的化合物对p38 mapk/atf2抑制活性均大于3.7μm。这进一步说明本公开的化合物对p38 mapk/mk2具有良好的选择性。
[0425]
4.对人pbmc细胞上清tnf-α体外活性测定
[0426]
化合物对人pbmc细胞上清tnf-α的抑制作用实验方案用elisa检测试剂盒(碧云天，pi518)进行检测。dmso溶解受试化合物至10mm母液，-20℃保存待用。化合物起始浓度为2μm，5倍倍比稀释，6个浓度，细胞铺板双复孔，elisa检测为单孔，dmso终浓度为0.4％，也可根据化合物筛选的实际情况，变更化合物起始浓度、倍比稀释倍数、梯度浓度数量和复孔数。
[0427]
新鲜人外周血单个核细胞(pbmc)(赛笠生物)以2*10^5的数量铺在96孔板(corning,3599)中，每孔含有100μl的rpmi-1640(gibco#a1049101)+10％ fbs(gibco,10099141c),37℃，5％co2过夜培养；待测化合物已25μl/孔的体积加入96孔培养板中，1h后，加入5μl的lps，使其终浓度为100ng/ml，阴性对照孔不加lps及化合物，阳性对照孔中不加化合物，37℃，5％ co2继续培养24h后，500rcf离心8min收集细胞培养上清，按照elisaa试剂盒中操作手册进行操作，检测tnf-α的浓度。用graphpad prism 8软件拟合浓度-效应曲线，并计算50％抑制效果的化合物浓度，即ic
50
。结果如表4所示。
[0428]
表4
[0429]
化合物tnf-αic
50
(nm)化合物634.15化合物1072.99化合物1224.64化合物1356.80化合物4150化合物34-p296.39化合物35-p277.74化合物41-p138.18
[0430]
从表4可知，本公开的化合物对人pbmc细胞的tnf-α具有良好的抑制作用。
[0431]
以上，对本公开的实施方式进行了说明。但是，本公开不限定于上述实施方式。凡在本公开的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本公开的保护范围之内。

技术特征：
1.一种如式i所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药：其中，w为ch或n；m为0-5的整数；n为0-3的整数；环a为3-20元的含氮杂环基，除与母核连接的n原子以外，还任选地含有1个、2个或更多个选自o、n或s的杂原子；r1选自h、卤素、cn和c
1-6
烷基；r2选自-or
81
、-nh-c(o)r
82
、-nhr
83
和-c(o)nhr
84
；r3选自h、c
1-10
烷基和c
3-20
环烷基；r4选自h、卤素和c
1-10
烷基；r5分别独立地选自h、卤素、-oh、-c
1-6
烷基、-c
1-6
烷氧基、氧代(＝o)、-c(o)c
1-6
烷基、羟基取代的c
1-10
烷基、-c(o)oh、-c(o)nr
91a
r
91b
、-s(o)2r
92
和-s(o)2nr
93a
r
93b
；r6选自h、卤素和甲基；r7分别独立地选自h、卤素、未取代或被ra取代的c
1-10
烷基、c
3-20
环烷基；ra选自卤素和c
3-20
环烷基；r
81
、r
82
、r
83
、r
84
相同或不同，彼此独立地选自无取代或任选被1、2、3、4或5个rb取代的c
6-14
芳基-c
1-10
烷基、5-14元杂芳基-c
1-10
烷基、c
6-14
芳基和5-14元杂芳基；每个rb相同或不同，彼此独立地选自卤素、卤代c
1-10
烷基、c
1-10
烷基和c
1-10
烷氧基；r
91a
、r
91b
、r
92
、r
93a
、r
93b
相同或不同，彼此独立地选自h、c
1-6
烷基和c
3-20
环烷基。2.根据权利要求1所述的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药，其特征在于，w为ch或n；m为0、1、2、3、4或5；n为0、1、2、3；环a为3-12元的含氮杂环基，除与所述母核连接的n原子以外，还任选地含有1个、2个或更多个选自o、n或s的杂原子；
r1选自h、卤素、cn和c
1-6
烷基；r2选自-or
81
、-nh-c(o)r
82
、-nhr
83
和-c(o)nhr
84
；r3选自h、c
1-6
烷基和c
3-12
环烷基；r4选自h、卤素和c
1-6
烷基；r5分别独立地选自h、卤素、-oh、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、氧代(＝o)、-c(o)c
1-6
烷基、羟基取代的c
1-6
烷基、-c(o)oh、-c(o)nr
91a
r
91b
、-s(o)2r
92
和-s(o)2nr
93a
r
93b
；r6选自h、卤素和甲基；r7分别独立地选自h、卤素、c
1-6
烷基和c
3-12
环烷基；r
81
、r
82
、r
83
、r
84
相同或不同，彼此独立地选自c
6-14
芳基-c
1-6
烷基、5-14元杂芳基-c
1-6
烷基、c
6-14
芳基、5-14元杂芳基；其中芳基或杂芳基各自无取代或任选被1、2、3、4或5个彼此独立地选自卤素、卤代c
1-6
烷基、c
1-6
烷基和c
1-3
烷氧基取代；r
91a
、r
91b
、r
92
、r
93a
、r
93b
相同或不同，彼此独立地选自h、c
1-6
烷基和c
3-10
环烷基。3.根据权利要求1或2所述的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药，w为ch或n；m为0、1、2、3、4或5；n为0、1、2、3；环a为3-9元的含氮杂环基，除与所述母核连接的n原子以外，还任选地含有1个、2个或更多个选自o、n或s的杂原子；r1选自卤素；r2选自-or
81
、-nh-c(o)r
82
、-nhr
83
和-c(o)nhr
84
；r3选自c
1-3
烷基和c
3-6
环烷基；r4为c
1-3
烷基或卤素；r5分别独立地选自卤素、-oh、-c
1-3
烷基、-c
1-3
烷氧基、氧代(＝o)、-c(o)c
1-3
烷基、羟基取代的c
1-3
烷基、-c(o)oh、-c(o)nr
91a
r
91b
、-s(o)2r
92
和-s(o)2nr
93a
r
93b
；r6选自h、卤素和甲基；r7分别独立地选自h、卤素和c
1-3
烷基；r
81
、r
82
、r
83
、r
84
相同或不同，彼此独立地选自c
6-8
芳基-c
1-3
烷基、5-6元杂芳基-c
1-3
烷基、c
6-8
芳基、5-6元杂芳基；其中芳基或杂芳基各自无取代或任选被1、2、3、4或5个彼此独立地选自卤素、卤代c
1-3
烷基、c
1-3
烷基和c
1-3
烷氧基取代；r
91a
、r
91b
、r
92
、r
93a
、r
93b
相同或不同，彼此独立地选自h、c
1-3
烷基和c
3-7
环烷基。4.根据权利要求1-3任一项所述的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药，其特征在于，w为ch或n；m为0、1、2或3；n为0或1；所述环a选自以下结构：r1为cl或br；
r2选自-or
81
、-nh-c(o)r
82
、-nhr
83
和-c(o)nhr
84
；r3为甲基或环丙基；r4为甲基；r5选自f、-oh、甲基、甲氧基、乙氧基、氧代(＝o)、-c(o)c
1-3
烷基、2-羟基异丙基、-c(o)oh、-c(o)nh2、-c(o)nhch3、-s(o)2ch3、s(o)2ch2ch3和-s(o)
2-环丙烷；r6选自h、f和cl；r7为h；r
81
、r
82
、r
83
、r
84
相同或不同，彼此独立地选自无取代或任选被1、2或3个rb取代的苯基甲基、吡啶基甲基、吡啶基乙基、苯基和吡啶基；每个rb相同或不同，彼此独立地选自f、cl和cf3。5.根据权利要求1-4任一项所述的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药，其特征在于，所述r5和环a形成的结构可以选自：
优选地，式ⅰ化合物具有式ⅰa或ⅰb所示的结构：其中，r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、a、w、m和n具有权利要求1-4任一项所述的定义。6.根据权利要求1-5任一项所述的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药，其特征在于，式ⅰ化合物具有式ⅱ所示的结构：
其中r1、r3、r4、r5、r6、r7、m、n、w和环a彼此独立地具有权利要求1-5任一项所述的定义；r
10
选自h、卤素、未取代或任选被1个、2个或更多个卤素、oh、nh2取代的下列基团：c
1-10
烷基、c
1-10
烷氧基、卤代c
1-10
烷基、卤代c
1-10
烷氧基、c
2-10
烯基、c
2-10
烯基氧基、c
2-10
炔基和c
2-10
炔基氧基；每个r
11
相同或不同，彼此独立地选自h、卤素、c
1-6
烷基和卤代c
1-10
烷基；p为0-4的整数；优选地，r
10
选自h、卤素、c
1-3
烷基、卤代c
1-3
烷基；p为0、1或2；每个r
11
相同或不同，彼此独立地选自h、卤素、c
1-3
烷基、卤代c
1-3
烷基；更优选地，r
10
为h或甲基；p为0、1或2；每个r
11
相同或不同，彼此独立地选自f、cl和cf3；优选地，式ⅱ化合物具有式ⅱa或式ⅱb：其中，r1、r3、r4、r5、r6、r7、r
10
、r
11
、a、w、m、n和p具有权利要求1-5任一项所述的定义。7.根据权利要求1-6任一项所述的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药，其特征在于，所述化合物具有以下结构：
优选地，式i所示化合物具有以下结构：
8.权利要求1-7任一项所述化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：方案一：化合物a1与化合物a2发生偶联反应得到式ⅰ化合物。反应式如下：其中，y为cl或br；w、r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、m、n和环a彼此独立地具有权利要求1-7任一项所述定义；方案二：当w为n，r7为h时，化合物b1与化合物b2反应得到式ⅱ化合物；反应式如下：
其中r1、r3、r4、r5、r6、r7、r
10
、r
11
、m、n、p和环a彼此独立地具有权利要求1-7任一项所述的定义；优选地，所述反应在无机碱的存在下进行；所述无机碱选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、氢氧化钠和氢氧化钾中的一种；优选地，当r5为oh时，化合物b2中的oh可以被硅保护基保护，所述硅保护基可以为叔丁基二苯基硅基；所述硅保护基在所述反应中会脱除，得到脱保护的oh。9.一种药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1-7任一项所述的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药化合物中的至少一种，以及一种或多种药学上可接受的载体。10.权利要求1-7任一项所述的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药化合物中的至少一种，或如权利要求9所述的药物组合物在制备药物中的用途；优选地，所述药物为治疗和/或预防与p38激酶抑制剂有关的疾病的药物，例如可以为mk2抑制剂或p38 mapk/mk2通路调节剂；优选地，所述疾病为与p38 mapk/mk2通路相关的疾病，例如可以为自体免疫疾病和炎症性疾病(如类风湿性关节炎、发脓性汗腺炎、银屑病、炎症性肠病、特发性皮炎、系统性红斑狼疮等)、骨骼疾病、代谢疾病、神经和神经退化性疾病、癌症、心血管疾病、过敏症和哮喘、阿尔茨海默氏病和激素相关疾病。

技术总结
本公开公开了一种如式I所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、药学上可接受的盐或其前药，及其组合物、制备方法和应用。该化合物对p38MAPK/MK2通路具有良好的调节作用，并具有良好的选择性，药代动力学等性能良好。还有，可用于治疗与p38激酶抑制剂介导有关的疾病，以及制备用于此类病症或疾病的药物。于此类病症或疾病的药物。于此类病症或疾病的药物。


技术研发人员：栾林波 姚元山 陈永凯 王朝东
受保护的技术使用者：上海美悦生物科技发展有限公司
技术研发日：2022.12.28
技术公布日：2023/7/21