一种改善微循环的刺五加注射液及其制备工艺的制作方法

1.本发明属于中药技术领域，具体涉及一种改善微循环的刺五加注射液及其制备工艺。


背景技术：

2.微循环是指微动脉和微静脉之间的血液循环。血液循环最根本的功能是进行血液和组织之间的物质交换，这一功能就是在微循环部分实现的。
3.微循环血流量与人体组织、器官代谢水平相适应，使人体内各器官生理功能得以正常运行。微循环功能障碍或微循环血流灌注量减少时，营养物质和氧气不能满足组织代谢的需要，同时组织器官中的废物不能及时排出，可导致组织器官功能不全或衰竭，这成为许多疾病发生和发展的重要原因。
4.微循环是指微动脉和微静脉之间的血液循环。微循环的基本功能是进行血液和组织液之间的物质交换。正常情况下，微循环的血流量与组织器官的代谢水平相适应，保证各组织器官的血液灌流量并调节回心血量。如果微循环发生障碍，将会直接影响各器官的生理功能。因此，改善人体微循环对调节人体健康具有极其重要的作用。
5.刺五加为五加科植物刺五加[acanthopanax senticosus(rupr.et maxim.)harms]的干燥根和根茎或茎，主要分布于黑龙江、吉林、辽宁、河北和山西，其味辛、微苦、性温，归脾、肾、心经，具有益气健脾、补肾安神的功效。
[0006]
现代药理学研究表明，刺五加具有保护中枢神经系统和心脑血管系统、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、增强机体免疫力等作用，尤其在治疗缺血性中风方面疗效显著。刺五加含有的活性成分较多，主要包括三萜、多糖、木脂素、香豆素，以及多种微量元素。刺五加苷为刺五加主要的活性物质，其酚苷类化合物主要包括刺五加苷a，刺五加苷b(紫丁香苷)，刺五加苷b1，刺五加苷c，刺五加苷d和刺五加苷e，其糖类组分包括葡萄糖、果糖和阿拉伯糖等。剌五加苷b(紫丁香苷)具有抗疲劳、增强免疫力、护肝和释放乙酰胆碱，增加胰岛素分泌等作用；剌五加苷e具有缓解压力、抗焦虑、抗应激、抗溃疡和抗疲劳等作用；异秦皮啶是刺五加苷b1的苷元，具有明显的抗炎和抗菌作用。
[0007]
中药由许多不同化学成分组成，而这些不同成分的有机组合不同于单独各成分的简单加和，因此对中药多种活性成分的提取制备工艺研究就显得尤为重要。
[0008]
国家药典委公示的刺五加注射液质量标准草案传统工艺如下：取刺五加，粉碎，加水煎煮，滤过，滤液加石灰乳调ph值10-12，搅拌，用20％硫酸调ph值5.0-6.0，搅拌，静置，上清液浓缩至一定相对密度，加乙醇至含醇量83-85％，静置，滤过，滤液回收乙醇，加注射用水调整总黄酮至一定含量，调节ph值，加热，冷藏，滤过，滤液加氯化钠搅匀或溶液加活性炭煮沸，冷却，滤过，滤液用氢氧化钠调ph值，滤过。灌封，灭菌，即得。该方法是用传统的石硫法提取刺五加有效成分，步骤较多，工艺较繁琐，提取周期长。
[0009]
cn109010398a公开了一种刺五加注射液及其制备工艺，该工艺基于刺五加注射液生产过程中容易导致产品澄明度、安全性的关键步骤进行工艺改进，增加了沉降和分离处
理步骤；有效地在精制液大分子聚合时迅速去除大分子物质，显著降低了杂质成分，有效提高了注射液的澄明度，但是并未考察注射液的安全性和药用效果。
[0010]
cn104306417a公开了一种低毒的刺五加注射液及其制备方法。其中刺五加注射液含有以下活性成分：含总黄酮1.8-5.5mg/ml、紫丁香苷0.13-0.70mg/ml和刺五加苷e 0.06-0.34mg/ml，钾离子的数量≤800μg/ml。该方法提供的刺五加注射液钾离子含量低，该制剂的钾离子含量控制由国家标准中≤1000μg/ml，降至800μg/ml(或计为800μg/5mg总黄酮)以下；异常毒性小，安全性高。
[0011]
因此，开发一种可以有效改善微循环的刺五加注射液是本领域的研究重点。


技术实现要素：

[0012]
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种改善微循环的刺五加注射液及其制备工艺，可以有效改善机体微循环。
[0013]
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
[0014]
第一方面，本发明提供一种刺五加提取物的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
[0015]
(1)将刺五加进行提取、固液分离，得到滤液；
[0016]
(2)将所述滤液经吸附柱进行富集纯化，得到所述刺五加提取物；
[0017]
所述吸附柱的填料包括硅胶和配基；所述配基选自c3-c18的直链或支链烷基。
[0018]
本发明采用吸附柱对提取和固液分离得到的滤液进行富集纯化，可以有效去除滤液中的鞣质及多糖类大分子等致敏性物质，并且可以最大限度保留有效成分，整个实验操作过程简单，并且富集纯化过程中使用的试剂均可以重复使用。
[0019]
所述配基选自c3-c18的直链或支链烷基，例如可以为c3、c4、c8、c18等。
[0020]
优选地，所述提取前还包括前处理的步骤。
[0021]
优选地，所述前处理为将刺五加的根部、茎部进行粉碎。
[0022]
优选地，所述提取的料液比为1:(6-10)，例如可以为1:7、1:8或1:9等。
[0023]
优选地，所述提取的温度为90-100℃，例如可以为92℃、95℃或97℃等，时间为2-3h，例如可以为2.3h、2.5h或2.8h等。
[0024]
优选地，所述提取重复进行1-2次。
[0025]
优选地，所述固液分离包括过滤和超滤。
[0026]
优选地，所述过滤采用陶瓷膜。
[0027]
优选地，所述陶瓷膜的孔径为30-750nm，例如可以为50nm、100nm、200nm、500nm、600nm等。
[0028]
优选地，所述陶瓷膜的材质包括氧化铝、氧化锆或氧化钛中的任意一种。
[0029]
优选地，所述超滤采用中空纤维膜。
[0030]
优选地，所述中空纤维膜截留的分子量为5-800kd，例如可以为10kd、50kd、100kd、200kd、500kd、600kd、700kd、750kd等。
[0031]
上述各项数值范围中的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
[0032]
优选地，所述吸附柱为反相色谱柱。
[0033]
优选地，所述填料的粒径为5-60μm，例如可以为6μm、7μm、10μm、15μm、30μm、40μm或
60μm等。
[0034]
优选地，所述富集纯化包括上液、一次洗脱、二次洗脱、再生的步骤。
[0035]
优选地，所述上液时滤液的流速为10-14bv/h，例如可以为11bv/h、12bv/h或13bv/h等。
[0036]
优选地，所述一次洗脱和二次洗脱的洗脱液流速为10-14bv/h，例如可以为11bv/h、12bv/h或13bv/h等。
[0037]
优选地，所述再生的再生液流速为10-14bv/h，例如可以为11bv/h、12bv/h或13bv/h等。
[0038]
所述bv/h是指柱内单位时间流经单位体积树脂的平均液量。
[0039]
优选地，所述富集纯化后还包括减压浓缩的步骤。
[0040]
上述各项数值范围中的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
[0041]
优选地，所述一次洗脱的洗脱液为乙醇水溶液a。
[0042]
优选地，所述乙醇水溶液a中乙醇的质量百分比为25-35％，例如可以为27％、30％或32％等。
[0043]
优选地，所述二次洗脱的洗脱液为乙醇水溶液b。
[0044]
优选地，所述乙醇水溶液b中乙醇的质量百分比为55-65％，例如可以为58％、60％或63％等。
[0045]
优选地，所述再生液为乙醇水溶液c。
[0046]
优选地，所述乙醇水溶液c中乙醇的质量百分比为85-95％，例如可以为88％、90％或93％等。
[0047]
优选地，所述制备方法包括如下步骤：
[0048]
(1)将刺五加在90-100℃下进行提取2-3h，重复提取1-2次，之后经30-750nm陶瓷膜进行过滤，再经截留分子量为5-800kd的中空纤维膜进行超滤，得到滤液；
[0049]
(2)将所述滤液经吸附柱进行富集纯化，所述富集纯化包括上液、一次洗脱、二次洗脱、再生的步骤；上液时滤液的流速为10-14bv/h，采用乙醇水溶液a进行一次洗脱，流速为10-14bv/h，采用乙醇水溶液b进行二次洗脱，流速为10-14bv/h，采用乙醇水溶液c进行再生，流速为10-14bv/h；
[0050]
所述乙醇水溶液a中乙醇的质量百分比为25-35％；所述乙醇水溶液b中乙醇的质量百分比为55-65％；所述乙醇水溶液c中乙醇的质量百分比为85-95％；
[0051]
所述吸附柱为反相色谱柱，吸附柱的填料包括硅胶和配基，所述配基选自c3-c18的直链或支链烷基。
[0052]
上述各项数值范围中的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
[0053]
第二方面，本发明提供一种刺五加提取物，所述刺五加提取物通过第一方面提供的制备方法制备得到。
[0054]
优选地，所述刺五加提取物中紫丁香苷的质量百分含量为2-7.46％，例如可以为2.3％、3％、4％、5％、6％或7％等。
[0055]
优选地，所述刺五加提取物中刺五加苷e的质量百分含量为2-4.82％，例如可以为2.5％、3％、4％、4.5％等。
[0056]
优选地，所述刺五加提取物中异嗪皮啶的质量百分含量为0.3-2.7％，例如可以为
0.5％、1％、1.5％、2％或2.5％等。
[0057]
上述各项数值范围中的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
[0058]
第三方面，本发明提供一种如第二方面所述的刺五加提取物在注射液中的应用。
[0059]
第四方面，本发明提供一种刺五加注射液，所述刺五加注射液采用如下方法进行制备，所述制备方法包括：将第二方面所述的刺五加提取物与氯化钠、注射用活性炭混合，煮沸，得到混合物，过滤混合物，得到所述刺五加注射液；
[0060]
优选地，所述注射用活性炭与刺五加提取物的质量体积比为(0.1-0.4)g:1ml，例如可以为0.15g:1ml、0.2g:1ml或0.3g:1ml等。
[0061]
优选地，所述煮沸的温度为98-105℃，例如可以为100℃、102℃或104℃等，时间为25-35min，例如可以为28min、30min或33min等。
[0062]
优选地，所述过滤包括一次过滤、二次过滤。
[0063]
优选地，所述一次过滤的孔径0.2-1.2μm，例如可以为0.4μm、0.6μm、0.8μm或1μm等。
[0064]
优选地，所述二次过滤的截留分子量为5-800kd，例如可以为10kd、50kd、100kd、200kd、500kd、600kd、700kd、750kd等。
[0065]
优选地，所述过滤前冷却混合物至30-40℃，例如可以为33℃、35℃或38℃等。
[0066]
优选地，所述过滤之后还包括稀释、灌装、灭菌步骤。
[0067]
优选地，所述稀释采用的稀释剂为注射用水。
[0068]
优选地，所述灭菌的温度为114-118℃，例如可以为115℃、116℃或117℃等，时间为35-45min，例如可以为38min、40min或43min等。
[0069]
上述各项数值范围中的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
[0070]
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
[0071]
本发明采用反相吸附柱对提取和固液分离得到的滤液进行富集纯化，可以有效去除滤液中的鞣质及多糖类大分子等致敏性物质，并且可以最大限度保留有效成分，例如紫丁香苷、刺五加苷e和异嗪皮啶，本发明提供的刺五加提取物中紫丁香苷的质量百分含量最高为7.46％，刺五加苷e为4.82％，异嗪皮啶为2.7％；
[0072]
采用本发明提供的刺五加提取物制备得到的刺五加注射液可以有效改善微循环，实验表明，对急性肾缺血性再灌注模型小鼠具有治疗作用；
[0073]
本发明提供的制备工艺过程简便、所用试剂均可回收重复利用，节约成本。
附图说明
[0074]
图1为应用例1的刺五加注射液的混标特征谱图；
[0075]
图2为应用例1的刺五加注射液的特征谱图；
[0076]
图3为应用例2的刺五加注射液的特征谱图；
[0077]
图4为应用例3的刺五加注射液的特征谱图；
[0078]
图5为应用例4的刺五加注射液的特征谱图；
[0079]
图6为应用例5的刺五加注射液的特征谱图；
[0080]
图7为应用例6的刺五加注射液的特征谱图；
[0081]
图8为对比例的刺五加注射液的特征谱图；
[0082]
图9为测试例2中假手术组、阳性药物组、模型组和对比例的肾脏图；
[0083]
图10为测试例2中应用例1-4的肾脏图；
[0084]
图11为测试例2中应用例5-6的肾脏图；
[0085]
图12为测试例2中阳性对照组的左右肾表面血流图；
[0086]
图13为测试例2中假手术组的左右肾表面血流图；
[0087]
图14为测试例2中模型组的左右肾表面血流图；
[0088]
图15为测试例2中应用例1的左右肾表面血流图；
[0089]
图16为测试例2中应用例2的左右肾表面血流图
[0090]
图17为测试例2中应用例3的左右肾表面血流图
[0091]
图18为测试例2中应用例4的左右肾表面血流图
[0092]
图19为测试例2中应用例5的左右肾表面血流图
[0093]
图20为测试例2中应用例6的左右肾表面血流图
[0094]
图21为测试例2中对比例的左右肾表面血流图。
具体实施方式
[0095]
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
[0096]
本文所用术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，还可包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
[0097]“任选的”或者“任意一种”是指其后描述的事项或事件可以发生或不发生，而且该描述包括事件发生的情形和事件不发生的情形。
[0098]
本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显只指单数形式。
[0099]
本发明所描述的术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例性地”、“具体示例”或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本文中，对上述术语的示意性表述不是必须针对相同的实施例或示例。
[0100]
以下实施例中试剂、原料或设备来源如下：
[0101]
c1吸附柱：由乌苏里江制药有限公司提供，吸附柱的填料包括基质和配基，基质为硅胶，配基为自制的c18的直链或支链烷基；
[0102]
c2吸附柱：由乌苏里江制药有限公司提供，吸附柱的填料包括基质和配基，基质为硅胶，配基为自制的c18的直链或支链烷基。
[0103]
实施例1
[0104]
本实施例提供一种刺五加提取物，所述刺五加提取物的制备方法如下：
[0105]
(1)粉碎：将刺五加的根和茎进行粉碎，过筛，制成粉碎料刺五加粗粉；
[0106]
(2)水提：取刺五加粗粉1.0kg，加12倍量的纯化水，加热煎煮2小时，收集煎煮液；药渣再加10倍量的纯化水，加热煎煮1小时，收集煎煮液，合并两次煎煮液；
[0107]
(3)澄清过滤：将刺五加煎煮液用500nm陶瓷膜进行澄清过滤，得澄清过滤液；
[0108]
(4)超滤：将刺五加澄清过滤液，用750kd中空纤维膜进行超滤，得超滤液；
[0109]
(5)富集纯化：将刺五加超滤液用c1吸附柱进行吸附时，吸附柱的填料粒径为40μm，填料重量为1.5kg，上液量为10bv，上液流速为8bv/h，然后分别用30％、60％乙醇洗脱，洗脱液用量为30％乙醇洗脱4bv，60％乙醇1bv，洗脱流速为12bv/h，最后用90％乙醇2bv再生，再生流速为12bv/h，收集洗脱液，减压浓缩，即得刺五加提取物。
[0110]
实施例2
[0111]
本实施例提供一种刺五加提取物，所述刺五加提取物的制备方法如下：
[0112]
(1)粉碎：将刺五加的根和茎进行粉碎，过筛，制成粉碎料刺五加粗粉；
[0113]
(2)水提：取刺五加粗粉1.0kg，加10倍量的纯化水，加热煎煮2.5小时，收集煎煮液；药渣再加8倍量的纯化水，加热煎煮1.5小时，收集煎煮液，合并两次煎煮液；
[0114]
(3)澄清过滤：将刺五加煎煮液用500nm陶瓷膜进行澄清过滤，得澄清过滤液；
[0115]
(4)超滤：将刺五加澄清过滤液，用50kd中空纤维膜进行超滤，得超滤液；
[0116]
(5)富集纯化：将刺五加超滤液用c1吸附柱进行吸附时，吸附柱的填料粒径为40μm，填料重量为1.5kg，上液量为12bv，上液流速为12bv/h，然后分别用30％、60％乙醇洗脱，洗脱液用量为30％乙醇洗脱4bv，60％乙醇1bv，洗脱流速为12bv/h，最后用90％乙醇2bv再生，再生流速为12bv/h，收集洗脱液，减压浓缩，即得刺五加提取物。
[0117]
实施例3
[0118]
本实施例提供一种刺五加提取物，所述刺五加提取物的制备方法如下：
[0119]
(1)粉碎：将刺五加的根和茎进行粉碎，过筛，制成粉碎料刺五加粗粉；
[0120]
(2)水提：取刺五加粗粉1.0kg，加8倍量的纯化水，加热煎煮3小时，收集煎煮液；药渣再加6倍量的纯化水，加热煎煮2小时，收集煎煮液，合并两次煎煮液；
[0121]
(3)澄清过滤：将刺五加煎煮液用500nm陶瓷膜进行澄清过滤，得澄清过滤液；
[0122]
(4)超滤：将刺五加澄清过滤液，用5kd中空纤维膜进行超滤，得超滤液；
[0123]
(5)富集纯化：将刺五加超滤液用c1吸附柱进行吸附时，吸附柱的填料粒径为40μm，填料重量为1.5kg，上液量为12bv，上液流速为12bv/h，然后分别用30％、60％乙醇洗脱，洗脱液用量为30％乙醇洗脱4bv，60％乙醇1bv，洗脱流速为12bv/h，最后用90％乙醇2bv再生，再生流速为12bv/h，收集洗脱液，减压浓缩，即得刺五加提取物。
[0124]
实施例4
[0125]
本实施例提供一种刺五加提取物，所述刺五加提取物的制备方法如下：
[0126]
其与实施例1的区别仅在于将c1吸附柱替换为c2吸附柱，其余原料、用量及制备方法均与实施例1相同。
[0127]
实施例5
[0128]
本实施例提供一种刺五加提取物，所述刺五加提取物的制备方法如下：
[0129]
其与实施例2的区别仅在于将c1吸附柱替换为c2吸附柱，其余原料、用量及制备方法均与实施例2相同。
[0130]
实施例6
[0131]
本实施例提供一种刺五加提取物，所述刺五加提取物的制备方法如下：
[0132]
其与实施例3的区别仅在于将c1吸附柱替换为c2吸附柱，其余原料、用量及制备方
法均与实施例3相同。
[0133]
应用例1
[0134]
本应用例提供一种刺五加注射液，所述刺五加注射液的制备方法如下：
[0135]
将实施例1制得的刺五加提取物加入0.3％氯化钠煮沸30分钟，加入与刺五加提取物质量体积比为0.2％g/ml的供注射用活性炭，在100℃下继续煮沸30分钟，药液冷却至30℃，通过0.45μm板框过滤器过滤，加注射用水稀释至原生药比为1:2，即加注射用水稀释至2l，灌装，在116℃下灭菌40分钟，得到所述刺五加注射液。
[0136]
应用例2
[0137]
本应用例提供一种刺五加注射液，所述刺五加注射液的制备方法如下：
[0138]
将实施例2制得的刺五加提取物加入0.4％氯化钠煮沸30分钟，加入与刺五加提取物质量体积比为0.3％g/ml的供注射用活性炭，在100℃下继续煮沸30分钟，药液冷却至40℃，通过0.65μm板框过滤器过滤，加注射用水稀释至原生药比为1:2，即加注射用水稀释至2l，灌装，在116℃下灭菌40分钟，得到所述刺五加注射液。
[0139]
应用例3
[0140]
本应用例提供一种刺五加注射液，所述刺五加注射液的制备方法如下：
[0141]
将实施例3制得的刺五加提取物加入0.3％氯化钠煮沸30分钟，加入与刺五加提取物质量体积比为0.4％g/ml的供注射用活性炭，在100℃下继续煮沸30分钟，药液冷却至35℃，通过0.22μm板框过滤器过滤，加注射用水稀释至原生药比为1:2，即加注射用水稀释至2l，灌装，在116℃下灭菌40分钟，得到所述刺五加注射液。
[0142]
应用例4
[0143]
本应用例提供一种刺五加注射液，所述刺五加注射液的制备方法如下：
[0144]
其与应用例1的区别仅在于将实施例1制得的刺五加提取液替换为等量的实施例4制得的刺五加提取液，其余原料、用量及制备方法均与实施例1相同。
[0145]
应用例5
[0146]
本应用例提供一种刺五加注射液，所述刺五加注射液的制备方法如下：
[0147]
其与应用例2的区别仅在于将实施例2制得的刺五加提取液替换为等量的实施例5制得的刺五加提取液，其余原料、用量及制备方法均与实施例2相同。
[0148]
应用例6
[0149]
本应用例提供一种刺五加注射液，所述刺五加注射液的制备方法如下：
[0150]
其与应用例3的区别仅在于将实施例3制得的刺五加提取液替换为等量的实施例6制得的刺五加提取液，其余原料、用量及制备方法均与实施例3相同。
[0151]
对比例
[0152]
本对比例提供一种传统工艺制备的刺五加注射液，所述刺五加注射液的制备方法如下：
[0153]
取刺五加，粉碎，加水煎煮3h，滤过，滤液加石灰乳调ph值11，搅拌10min，用20％硫酸调ph值至5.0，继续搅拌10min，静置4h以上，取上清液浓缩，加乙醇至含醇量85％，边加边搅拌，控制体系温度不超过30℃，静置12h以上，滤过，滤液回收乙醇，得到刺五加提取物；
[0154]
将刺五加提取物中加注射用水调整至每毫升含总黄酮12mg，调节ph值为5.0，115℃加热40分钟，冷却至室温，滤过，滤液加0.3％氯化钠搅匀，滤过，滤液用20％氢氧化钠调
ph值至6.0，滤过。灌封，116℃下灭菌40分钟，得到所述刺五加注射液。
[0155]
测试例1
[0156]
采用高效液相色谱法(中国药典2020年版四部通则0512)测定实施例1-6制得的刺五加提取物、应用例1-6制得的刺五加注射液、对比例制得的刺五加注射液中的有效成分的含量。
[0157]
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以0.1％磷酸溶液为流动相b，按下表中的程序进行梯度洗脱；检测波长为220nm；柱温30℃。理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于10000；异嗪皮啶峰与相邻杂质峰的分离度应大于1.5。
[0158]
时间(分钟)流动相a(％)流动相b(％)0-2010-2090-8020-3020-2580-7530-40406040-501090
[0159]
对照品溶液的制备：取紫丁香苷对照品、刺五加苷e对照品、异嗪皮啶对照品适量，精密称定，加甲醇(刺五加苷e对照品先加50％甲醇溶解)制成每1ml含紫丁香苷、刺五加苷e各40μg、异嗪皮啶10μg的混合溶液，即得。
[0160]
供试品溶液的制备：取本品约0.2g，精密称定，置小烧杯中，用50％甲醇20ml，分次溶解，转移至25ml量瓶中，超声处理(功率250w，频率50khz)10分钟，取出，放冷，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。其中：本品分别代表实施例1-6制得的刺五加提取物、应用例1-6制得的刺五加注射液、对比例制得的刺五加注射液。
[0161]
测定法：分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，按照前述检测参数进行测定，得到特征谱图，主要成分的检测结果如表1所示。
[0162]
检测结果：应用例1的刺五加注射液的混标特征谱图如图1所示；应用例1的刺五加注射液的特征谱图如图2所示；应用例2的刺五加注射液的特征谱图如图3所示；应用例3的刺五加注射液的特征谱图如图4所示；应用例4的刺五加注射液的特征谱图如图5所示；应用例5的刺五加注射液的特征谱图如图6所示；应用例6的刺五加注射液的特征谱图如图7所示；对比例的刺五加注射液的特征谱图如图8所示。
[0163]
表1
[0164][0165]
根据表格数据可知，采用本发明提供的制备方法得到的刺五加提取物中紫丁香苷的质量百分含量最高为7.46％，刺五加苷e为4.82％，异嗪皮啶为2.7％；刺五加苷为刺五加主要的活性物质，其中刺五加苷b(紫丁香苷)具有抗疲劳、增强免疫力、护肝和释放乙酰胆碱，增加胰岛素分泌等作用；剌五加苷e具有缓解压力、抗焦虑、抗应激、抗溃疡和抗疲劳等作用；异秦皮啶是刺五加苷b1的苷元，具有明显的抗炎和抗菌作用。本发明通过对刺五加注射液中主要活性物质的富集纯化，制成的刺五加注射液在有效性和质量可控性优势更强。
[0166]
测试例2
[0167]
刺五加注射液对急性肾缺血再灌注损伤模型小鼠的微循环改善作用
[0168]
实验动物：c57bl/6j小鼠，6-8周龄，20-22g。
[0169]
实验方法：
[0170]
(1)急性肾缺血再灌注损伤模型：给小鼠注射5％水合氯醛200μl，3min后小鼠进入麻醉状态，采用双夹法，夹住两侧肾血管40min，若肾脏由红润变黑，说明缺血模型成功。
[0171]
(2)给药方式：将应用例1-6、对比例制备的刺五加注射液分别通过尾部静脉注射方式，两天给药一次，每次给药250μl，共计给药14天，观察小鼠生长状况。
[0172]
阳性药物(舒血宁注射液)：通过尾部静脉注射方式，两天给药一次，每次给药原液52μl，用生理盐水稀释至250μl，共计给药14天，观察小鼠生长状况。
[0173]
分为假手术组、模型组、阳性药物组、对比例组、实施例组，以尾部静脉注射的方式给药及生理盐水，两天给药一次，共计给药14天。
[0174]
(3)检测指标：
[0175]
肾脏形态观察：处死小鼠，将左右肾脏取出，按照分组摆放整齐，观察肾脏形态差异。将注射应用例1-6、对比例制备的刺五加注射液的小鼠分别称为应用例1-6、对比例。检测结果：假手术组、阳性药物组、模型组和对比例的肾脏如图9所示；应用例1-4的肾脏如图
10所示；应用例5和应用例6的肾脏如图11所示。
[0176]
肾脏血流指数：从腹部将小鼠腹腔打开，将肾脏暴露，运用激光散斑血流仪观察左右肾脏表面血流指数及血流变化；检测结果如表2所示。检测结果：阳性对照组的左右肾表面血流图如图12所示；假手术组的左右肾表面血流图如图13所示；模型组的左右肾表面血流图如图14所示；应用例1的左右肾表面血流图如图15所示；应用例2的左右肾表面血流图如图16所示；应用例3的左右肾表面血流图如图17所示；应用例4的左右肾表面血流图如图18所示；应用例5的左右肾表面血流图如图19所示；应用例6的左右肾表面血流图如图20所示；对比例的左右肾表面血流图如图21所示。
[0177]
表2
[0178][0179]
根据表格数据和血流图可知，假手术组和阳性药物组(舒血宁注射液组)肾脏状况相当，小鼠肾脏形态完整，颜色红润，呈现健康状态，表明舒血宁注射液改善微循环效果较好；模型组肾脏状况最差，呈现坏死状态，并且逐渐萎缩；对比例组也有一定的改善微循环效果，应用例1-6组肾脏颜色红润，形态均匀，说明应用例1-6组对改善微循环均具有良好的效果，其中实施例4和5的改善微循环效果更佳。
[0180]
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的工艺方法，但本发明并不局限于上述工艺步骤，即不意味着本发明必须依赖上述工艺步骤才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

技术特征：
1.一种刺五加提取物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：(1)将刺五加进行提取、固液分离，得到滤液；(2)将所述滤液经吸附柱进行富集纯化，得到所述刺五加提取物；所述吸附柱的填料包括硅胶和配基；所述配基选自c3-c18的直链或支链烷基。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述提取的料液比为1:(6-10)；优选地，所述提取的温度为90-100℃，时间为2-3h；优选地，所述提取重复进行1-2次。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述固液分离包括过滤和超滤；优选地，所述过滤采用陶瓷膜；优选地，所述陶瓷膜的孔径为30-750nm；优选地，所述超滤采用中空纤维膜；优选地，所述中空纤维膜截留的分子量为5-800kd。4.根据权利要求1-3任一项所述的制备方法，其特征在于，所述吸附柱为反相色谱柱；优选地，所述填料的粒径为5-60μm。5.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，其特征在于，所述富集纯化包括上液、一次洗脱、二次洗脱、再生的步骤；优选地，所述上液时滤液的流速为10-14bv/h；优选地，所述一次洗脱和二次洗脱的洗脱液流速为10-14bv/h；优选地，所述再生的再生液流速为10-14bv/h；优选地，所述富集纯化后还包括减压浓缩的步骤。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述一次洗脱的洗脱液为乙醇水溶液a；优选地，所述乙醇水溶液a中乙醇的质量百分比为25-35％；优选地，所述二次洗脱的洗脱液为乙醇水溶液b；优选地，所述乙醇水溶液b中乙醇的质量百分比为55-65％；优选地，所述再生液为乙醇水溶液c；优选地，所述乙醇水溶液c中乙醇的质量百分比为85-95％。7.根据权利要求1-6任一项所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：(1)将刺五加在90-100℃下进行提取2-3h，重复提取1-2次，之后经30-750nm陶瓷膜进行过滤，再经截留分子量为5-800kd的中空纤维膜进行超滤，得到滤液；(2)将所述滤液经吸附柱进行富集纯化，所述富集纯化包括上液、一次洗脱、二次洗脱、再生的步骤；上液时滤液的流速为10-14bv/h，采用乙醇水溶液a进行一次洗脱，流速为10-14bv/h，采用乙醇水溶液b进行二次洗脱，流速为10-14bv/h，采用乙醇水溶液c进行再生，流速为10-14bv/h；所述乙醇水溶液a中乙醇的质量百分比为25-35％；所述乙醇水溶液b中乙醇的质量百分比为55-65％；所述乙醇水溶液c中乙醇的质量百分比为85-95％；所述吸附柱为反相色谱柱，吸附柱的填料包括硅胶和配基，所述配基选自c3-c18的直链或支链烷基。
8.一种刺五加提取物，其特征在于，所述刺五加提取物通过权利要求1-7任一项所述的制备方法制备得到；优选地，所述刺五加提取物中紫丁香苷的质量百分含量为2-7.46％；优选地，所述刺五加提取物中刺五加苷e的质量百分含量为2-4.82％；优选地，所述刺五加提取物中异嗪皮啶的质量百分含量为0.3-2.7％。9.一种如权利要求8所述的刺五加提取物在注射液中的应用。10.一种刺五加注射液，其特征在于，所述刺五加注射液采用如下方法进行制备，所述制备方法包括：将权利要求8所述的刺五加提取物与氯化钠、注射用活性炭混合，煮沸，得到混合物，过滤混合物，得到所述刺五加注射液；优选地，所述注射用活性炭与刺五加提取物的质量体积比为(0.1-0.4)g:1ml；优选地，所述过滤包括一次过滤、二次过滤；优选地，所述一次过滤的孔径0.2-1.2μm；优选地，所述二次过滤的截留分子量为5-800kd；优选地，所述过滤之后还包括稀释、灌装、灭菌步骤。

技术总结
本发明提供一种改善微循环的刺五加注射液及其制备工艺，所述制备方法包括：(1)将刺五加进行提取、固液分离，得到滤液；(2)将所述滤液经吸附柱进行富集纯化，得到所述刺五加提取物；所述吸附柱的填料包括硅胶和配基；所述配基选自C3-C18的直链或支链烷基；将刺五加提取物与氯化钠、注射用活性炭混合，煮沸，得到混合物，过滤混合物，得到所述刺五加注射液。本发明采用反相吸附柱对刺五加滤液进行富集纯化，可以有效去除鞣质及多糖类大分子等致敏性物质，并且可以最大限度保留有效成分；本发明提供的刺五加注射液可以有效改善微循环，实验表明，对急性肾缺血性再灌注模型小鼠具有治疗作用。对急性肾缺血性再灌注模型小鼠具有治疗作用。对急性肾缺血性再灌注模型小鼠具有治疗作用。


技术研发人员：王小宇 张洁 韩宝翠
受保护的技术使用者：黑龙江乌苏里江制药有限公司
技术研发日：2023.04.28
技术公布日：2023/8/13